沉默TRPM7对无镁外液致痫Neuro-2a细胞炎症反应的影响

目的观察沉默瞬时受体电位M7通道(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)对无镁外液致痫小鼠脑神经瘤Neuro-2a细胞炎症反应的影响。方法Neuro-2a细胞经脂质体转染TRPM7 siRNA,经无镁外液培养3 h建立癫痫细胞模型。实验分为4组:对照组(Control)、癫痫组(EP)、癫痫转染组(EP+si-TRPM7)和癫痫转染阴性对照组(EP+si-NC)。成模后24 h,利用实时荧光定量PCR技术检测TRPM7 mRNA表达;利用Western Blot检测HMGB1和TLR4蛋白的表达;利用ELISA方法检测上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;CCK-8法检测细胞活力。结果成模后24 h,与Control组比较,EP组TRPM7 mRNA、HMGB1和TLR4蛋白表达增多,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量增多,细胞活力降低。与EP+si-NC组比较,EP+si-TRPM7组TRPM7 mRNA、HMGB1和TLR4蛋白表达减少,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量减少,细胞活力增高(P<0.01)。结论沉默TRPM7能抑制HMGB1/TLR4通路,减轻炎症反应,对无镁外液致痫细胞有保护作用。

垂体腺苷环化酶激活多肽抑制β淀粉样蛋白对Neuro-2a细胞神经毒性作用的机制

通过MTT方法检测细胞活性 ,同时采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子的瞬时运动 ,研究了垂体腺苷环化酶激活多肽 (pituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide 2 7,PACAP2 7)通过调节细胞内钙对抗淀粉样蛋白Aβ2 5 35引起Neuro 2a细胞神经毒性作用的可能机制。结果表明 ,PACAP在一定浓度范围内 (<0 1μmol/L)可提高Neuro 2a细胞增殖能力并对抗Aβ引起的神经毒性 ,此作用可以被PACAP受体竞争性拮抗剂PACAP6 2 7所抑制。 2 5 μmol/LAβ使细胞内钙离子缓慢上升 ,并有一个较长时间的平台期。 0 1μmol/L的PACAP使细胞内钙离子迅速升高后下降 ,10min后回到接近基线水平 ,伴有较长时间的不应期。用PACAP预处理细胞 10min后Aβ引起细胞内钙的慢上升不再出现。推测 ,PACAP受体激活引起瞬时内向钙离子运动 ,而后伴随一个较长时间的不应期 ,可能是一个消除凋亡或阻止凋亡启动的保护机制。

血清型A肉毒杆菌神经毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用

目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A HC(0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)进行干预,于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色,再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比;在此基础上,选择最有效的Bo NT/A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液,于Bo NT/A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白,采用Western blot检测p-ERK1/2及p-Akt的蛋白水平。结果:当Bo NT/A HC浓度为0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L时,细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加,差异显著(P<0.05),其中1 nmol/L效果最显著。在细胞培养液内加入1 nmol/L Bo NT/A HC后,p-ERK1/2的蛋白水平呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用60 min后,p-ERK1/2的增加与对照组相比差异显著(P<0.05);与p-ERK1/2变化趋势类似,细胞培养液内加入1 nmol/L的Bo NT/A HC后,p-Akt的蛋白水平也呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用15 min和60 min时,p-Akt增加显著(P<0.05)。结论:一定剂量的Bo NT/A HC可以促进神经细胞突起再生和生长;Bo NT/A HC对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1/2和Akt的磷酸化而实现。

50 Hz磁场和双酚A暴露对大鼠脑组织和Neuro-2a细胞Tau蛋白磷酸化的影响

目的研究50 Hz磁场、双酚A(bisphenol A,BPA)单独和联合暴露对神经细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法24只SD雄性大鼠,体质量(150±10)g,分为对照组(生理盐水灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场暴露组(0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露+生理盐水灌胃)、BPA暴露组(BPA20μg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场和BPA复合暴露组(BPA 20μg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃+0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露)4组,每组6只。处理1次/d,6 d/周,连续12周。小鼠神经母细胞瘤细胞株(Neuro-2a),分为对照组、50 Hz磁场暴露组(1 mT、48 h)、BPA暴露组(100μmol/L、24 h)、50 Hz磁场+BPA复合暴露组(1 mT、48 h+100μmol/L,24 h)4组。大鼠暴露结束按标准方法取材,组织免疫荧光化学方法检测大脑皮层和海马脑组织Tau-Thr^(231)、Tau-Ser^(404)的表达以及细胞凋亡。细胞实验暴露后采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞免疫荧光化学和Western blot方法检测Tau-Thr^(231)、TauSer;、Caspase-3的表达。结果50 Hz磁场暴露12周后,大鼠皮层和海马脑区Tau-Thr^(231)位点磷酸化水平明显升高(P<0.05);BPA暴露或与50 Hz磁场复合暴露12周后,大鼠皮层和海马脑区Tau-Thr^(231)位点磷酸化水平、皮层Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平明显升高(P<0.05),复合暴露组皮层和海马脑区细胞凋亡水平变化明显(P<0.05)。50 Hz磁场暴露、BPA单独暴露或与50 Hz磁场复合暴露48 h后,Neuro-2a细胞活力均明显低于对照组(P<0.05)。50 Hz磁场暴露48 h后,Neuro-2a细胞Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平明显高于对照组(P<0.05);BPA单独暴露或与50 Hz磁场复合暴露48 h后,Neuro-2a细胞Tau-Thr^(231)位点和Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平、Caspase-3的表达水平明显升高(P<0.05)。结论50 Hz磁场、BPA暴露可引起神经细胞Tau蛋白不同位点过度磷酸化,并且二者之间存在协同效应,可引起神经细胞损伤。

激活素A对Neuro-2a细胞电压门控钠电流的作用

目的:研究激活素A(activinA)对Neuro-2a细胞电压门控钠电流(INa)的作用及其机制,为激活素A在神经系统疾病中的应用奠定基础。方法:培养小鼠源性Neuro-2a细胞,分为IgG对照组和抗激活素受体ⅡA(ActRⅡA)抗体染色组,免疫组织化学染色观察ActRⅡA在Neuro-2a细胞中是否表达;将Neuro-2a细胞随机分为正常对照组和激活素A组,采用全细胞膜片钳技术检测激活素A对Neuro-2a细胞INa的作用;采用RT-PCR检测激活素A对血管活性肠肽(VIP)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。结果:正常Neuro-2a细胞中可检测到ActRⅡA的表达;与正常对照组比较,激活素A明显增加Neuro-2a细胞INa(P<0.05);激活素A组Neuro-2a细胞VIPmRNA表达明显高于正常对照组(P<0.05),而iNOSmRNA表达低于正常对照组(P<0.05)。结论:激活素A具有增加Neuro-2a细胞电压门控Na+电流的作用,VIP和iNOS途径可能参与了激活素A调控神经细胞的功能。

ARIP1,2在小鼠Neuro-2a细胞中的表达研究

目的探讨激活素受体相互作用蛋白1,2(AR IP1,2)在小鼠神经细胞中表达及其作用的差异。方法实时定量PCR检测AR IP1,2 mRNA,免疫细胞化学染色检测AR IP1,2蛋白。结果实时定量PCR显示AR IP1,2 mRNA在小鼠脑神经瘤细胞系Neuro-2 a细胞均有表达,免疫细胞化学染色进一步证实Neuro-2 a细胞表达AR IP1,2成熟蛋白,LPS可以上调AR IP1,2蛋白表达。在Neuro-2 a细胞过表达AR IP1,2均能抑制Activin A诱导的特异基因转录,AR IP1还能抑制Sm ad3诱导的基因转录。结论AR IP1,2均可在神经细胞表达,但其在神经细胞中介导激活素生物学作用存在差异,其差异的机制尚有待进一步研究。

C57小鼠LATl真核表达载体的构建及其对Neuro-2a细胞的影响

目的构建C57小鼠L型氨基酸转运载体1(LAT1)的真核表达载体,转染Neuro-2a肿瘤细胞进行表达,探讨LAT1对Neuro-2a细胞增殖及凋亡的影响。方法采用RT-PCR扩增出LAT1全长目的基因,定向克隆pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-LAT1重组表达质粒,通过脂质体法将阳性克隆转染Neuro-2a细胞,经G418筛选获得稳定表达株后,用RT-PCR和western blot蛋白印迹法检测LAT1的表达情况。通过MTT法检测各组Neuro-2a细胞的增殖情况,并借助流式细胞仪检测LAT1对Neuro-2a细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建小鼠pcDNA3.1-LAT1真核表达载体,酶切和测序证实其序列正确,并成功转染Neuro-2a细胞建立稳定转染细胞系。MTT法显示转染重组质粒pcDNA3.1-LAT1的Neuro-2a细胞增殖速度显著高于对照组(P<0.05),且流式细胞术检测转染组对Neuro-2a细胞具有促进增殖抑制凋亡的作用。结论转染pcDNA3.1-LAT1质粒的Neuro-2a细胞能成功表达LAT1蛋白,且LAT1对Neuro-2a细胞的增殖和凋亡均有显著影响,为进一步研究LAT1的生物学作用奠定了重要基础。

0.22太赫兹电磁辐射暴露致神经母细胞瘤Neuro-2a细胞损伤的非热效应研究

目的探讨0.22太赫兹(terahertz,THz)电磁辐射暴露致小鼠神经母细胞瘤细胞株——Neuro-2a细胞损伤的非热效应特点。方法以Neuro-2a细胞作为体外实验暴露模型,采用频率为0.22 THz,平均功率密度为0(Sham组)、25(25 mW/cm^2辐照组)、50 mW/cm^2(50 mW/cm^2辐照组)辐照细胞,辐照时间为5 min,监测辐照引起的细胞培养基温度变化;于暴露后24 h检测细胞增殖(EdU阳性细胞比例和细胞活力)、凋亡(γH2AX、TUNEL阳性细胞比例、Bax与Bcl2基因表达水平);于暴露后48 h分析细胞突触生长(突触长度、分支数目及Tubb3与Syp基因表达水平)的变化情况。结果与Sham组比较,两辐照组细胞培养基温度升高在0.1~0.4℃;EdU阳性细胞比例、细胞活力、γH2AX和TUNEL阳性细胞比例及Bax、Bcl2基因表达水平均无明显改变;仅50 mW/cm^2辐照组细胞突触长度和分支数目较Sham组明显减少(P<0.01),Tubb3和Syp基因表达也明显降低(P<0.05)。结论THz辐射暴露以非热效应为主,可抑制Neuro-2a细胞突触生长,而不影响细胞增殖和凋亡,提示神经细胞突触生长是THz辐射产生神经生物效应的敏感靶标。

京尼平通过线粒体动力学缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡

目的:观察京尼平(genipin)对H2O2诱导Neuro-2a细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养Neuro-2a细胞,利用400μmol/L H2O2诱导6 h建立Neuro-2a凋亡模型。处于对数生长期的Neuro-2a细胞随机分为对照组、模型组、京尼平组、京尼平预处理后模型组。MTT法测定细胞存活率;倒置相差显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA(2,7-二氯荧光素二乙酸酯)染色、流式细胞仪检测细胞内线粒体活性氧(ROS)的产生;qRT-PCR检测UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1 mRNA表达;Western blot测定UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率增加,ROS生成量升高,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达增加,Mfn2蛋白及mRNA表达降低,UCP4及mRNA蛋白表达无明显变化。提前给予京尼平(40μmol/L)干预后,与模型组相比,细胞存活率提高,细胞凋亡率降低,ROS生成量减少,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达减少,Mfn2蛋白及mRNA表达升高,但UCP4蛋白及mRNA表达无明显变化。以上指标相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:适宜浓度的京尼平能缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡,其机制可能与抑制UCP2蛋白表达,促进线粒体融合进而改善线粒体功能有关。

EZH2抑制剂GSK126对Neuro-2a细胞增殖分化的影响及其可能机制

神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是常见的儿童恶性肿瘤,在手术、放化疗及介入等多种手段综合治疗下,总体疗效仍然极差。近年来研究发现,果蝇zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）能抑制相关抑癌基因,明显增加神经母细胞瘤发生、发展的风险。GSK126是一种新型的选择性EZH2抑制剂,其在实体瘤方面的药效探究目前相对较少。

H_2O_2诱导Neuro-2a细胞死亡机理的研究

细胞内线粒体呼吸链过程中的电子漏和神经细胞代谢的酶类如单胺氧化酶(MAO)等可产生活性氧物质(ROS)如H_2O_2等。ROS对细胞有毒性作用,导致细胞死亡,在许多疾病特别是神经退行性疾病中具有重要作用。我们用H_2o_2诱导N-2a神经母细胞瘤细胞,利用光镜、荧光显微镜、透射电镜观察了诱导的N-2a细胞的死亡,结果表明其死亡形式不同于典型的细胞凋亡,而类似于Ⅱ型神经细胞编程性死亡,死亡细胞染色质呈团块状凝集,细胞核膜仍保持完整。DNA不降解形成ladder,且不需要caspase-3,1的活性,但是H_2O_2诱导的Neuro-2a细胞死亡可以被Bcl-X_L,抑制。我们的结果可以说明,ROS介导的细胞毒性作用是导致Ⅱ型神经细胞编程性死亡的一个原因。

多穗柯甜茶乙醇提取物对Neuro-2a细胞分化的影响

以Neuro-2a细胞为体外神经分化细胞模型,观察多穗柯乙醇提取物(EELP)对Neuro-2a细胞分化的影响.实验结果表明,EELP可能通过激活Erk1/2和Akt信号通路,显著提高Neuro-2a细胞的分化率,同时促进神经突的生长.该研究可为多穗柯甜茶在神经系统疾病治疗和保健方面的应用提供重要实验依据.

miRNA-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞氧化损伤的影响

目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,生化试剂盒检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)活性,Western blotting检测突触小体相关蛋白(synaptosoma associated protein of molecular mass 25 000,SNAP25)及Mn-SOD、细胞外超氧化物歧化酶(extracellular SOD,EC-SOD)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,过氧化氢刺激的2组细胞存活率明显下降,分别为85%和89%(P<0.05),但miR-99a预处理组的细胞存活率下降程度较小仅为11%(P<0.05)。进一步研究发现,过氧化氢刺激引起细胞T-SOD、Mn-SOD活性降低(P<0.05),转染miR-99a mimics不但能增强T-SOD和Mn-SOD的活性,还能促进Mn-SOD和EC-SOD的表达(P<0.05)。过氧化氢导致细胞中NADH含量降低(P<0.05),miR-99a能够增加NADH含量甚至高于正常细胞水平(P<0.05)。miR-99a还有增加neuro-2a细胞表达SNAP25的趋势。结论 miR-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞引起的氧化损伤具有保护作用。

Neuro-2a细胞替代神经元原代培养进行神经轴突测量实验研究

目的建立使用小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞替代原代培养神经元进行神经轴突测量的方法,用于神经损伤研究。方法使用浓度200μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L过氧化氢处理Neuro-2a细胞12h,戊二醛固定,生物染色,在光学显微镜下手动测量突起长度。结果过氧化氢可剂量依赖性引起神经突起逐渐回缩变短,1 000μmol/L过氧化氢处理组光镜下见不到明显突起,突起测量数据显示,过氧化氢处理后突起长度与未经处理细胞有显著差异。结论 Neuro-2a细胞在一定程度上可替代原代培养神经元进行轴突测量研究,该测量方法可用于神经轴突再生研究。

BDE47对Neuro-2a细胞毒性效应及作用机制

探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenylether,BDE 47)对神经细胞Neuro-2a的毒性影响及机制。将Neuro-2a细胞暴露于浓度为6.25、12.5、25、50、100μmol·L-1的BDE 47,采用MTT法检测细胞存活率、荧光探针DCFH-DA检测细胞活性氧生成量、吖啶橙检测溶酶体膜通透性、罗丹明123检测细胞线粒体膜电位、Annexin V-FITC检测细胞凋亡、Western blot检测组织蛋白酶B(Cathespin B)表达。结果显示,与对照组相比,12.5、25、50、100μmol·L^(-1)BDE 47显著降低Neuro-2a细胞存活率和细胞线粒体膜电位(P<0.05);6.25、12.5、25、50、100μmol·L^(-1)BDE 47显著诱导活性氧含量升高(P<0.05),增加Neuro-2a细胞溶酶体膜通透性(P<0.05),诱导Neuro-2a细胞凋亡(P<0.05),升高Cathespin B蛋白表达(P<0.05)。结果表明,BDE 47可能通过介导溶酶体-活性氧-线粒体环路,诱导Neuro-2a细胞凋亡。

橄榄苦苷与Aβ1-42的亲和效应及对Aβ1-42诱导的Neuro-2a细胞凋亡的保护作用

目的探讨橄榄苦苷对β淀粉样蛋白1-42(amyloidβ1-42,Aβ1-42)的抑制能力和亲和效应,以及其对Aβ1-42诱导的Neuro-2a细胞凋亡的保护作用。方法通过37℃孵育制备Aβ1-42纤维,利用Th-T荧光检测橄榄苦苷抑制Aβ1-42纤维的能力,用生物膜层干涉(biolayer interferometry,BLI)技术实时检测橄榄苦苷与Aβ1-42纤维的亲和效应。进一步用MTT和流式细胞技术检测橄榄苦苷对Aβ1-42诱导的Neuro-2a细胞毒性和凋亡的影响。结果橄榄苦苷降低Aβ1-42与Th-T反应的荧光强度,抑制Aβ1-42纤维。另外BLI检测显示其与Aβ1-42具有较好的亲和力。并且,橄榄苦苷成剂量依耐性地减轻Aβ1-42诱导的Neuro-2a细胞毒性,降低Aβ1-42诱导的细胞凋亡。结论研究结果表明,橄榄苦苷可能通过结合并抑制Aβ1-42纤维保护阿尔茨海默病的细胞凋亡。

桑辛素通过调节胆固醇代谢改善油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积

目的观察桑辛素对油酸(oleic acid,OA)诱导的HepG2细胞脂质蓄积的改善作用,并探讨其可能机制。方法以300μM OA处理HepG2细胞24 h诱导建立脂质蓄积模型,2.5、5、10μM的桑辛素和OA共同作用于细胞24 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,油红O染色观察细胞内脂质含量情况,DiI-LDL检测细胞脂质摄取能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定桑辛素对胆固醇代谢关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体a(PPARα)和胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)蛋白表达的情况,并将桑辛素与低密度脂蛋白受体(LDLR)和PPARα通过AutoDock vina软件进行分子对接验证。结果OA刺激HepG2细胞导致细胞内脂滴颗粒明显增加,脂质含量明显升高(P<0.01)。与模型组相比,桑辛素可明显改善模型组肝细胞脂质蓄积,并降低脂质含量(P<0.05)。桑辛素可抑制HepG2细胞对DiI-LDL的摄取,上调细胞中PPARα和CYP7A1的蛋白表达水平(P<0.05)。分子对接显示桑辛素与LDLR和PPARα受体表现出良好的对接活性。结论桑辛素对HepG2细胞脂质蓄积模型有明显的改善作用,其机制可能与调节PPARα通路有关。

姜酮通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻OGD/R后氧化应激损伤对HT22细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨姜酮对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)后小鼠海马神经元HT22细胞的保护作用,阐明其相关作用机制。方法:培养HT22细胞,设置不同OGD/R时间梯度,建立OGD/R细胞损伤模型。HT22细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+1μmol·L^(-1)姜酮组、OGD/R+10μmol·L^(-1)姜酮、OGD/R+100μmol·L^(-1)姜酮组和OGD/R+0.2%二甲亚枫(DMSO)组,CCK-8法检测各组细胞活性并计算各组细胞存活率,确定姜酮最适药物浓度。细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+姜酮组和OGD/R+姜酮+核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂(ML385)组,OGD/R+姜酮组细胞经姜酮给药处理4 h后予以OGD 8 h和复糖复氧8 h处理,OGD/R+姜酮+ML385组细胞在姜酮给药前予以10μmol·L^(-1)ML385预处理6 h,CCK-8法检测各组细胞活性,Western blotting法检测各组细胞中Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。结果:与对照组比较,HT22细胞经OGD 8 h和复糖复糖8 h处理后细胞存活率低于50%,以OGD 8 h和复糖复糖8 h建立HT22细胞OGD/R模型。与OGD/R组比较,OGD/R+不同剂量姜酮组细胞存活率均不同程度升高,其中OGD/R+100μmol·L^(-1)姜酮组细胞存活率升高最明显(P<0.01),故选用100μmol·L^(-1)姜酮用于后续实验。与对照组比较,OGD/R组细胞活性明显降低(P<0.01),细胞中Nrf2、HO-1和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞培养上清中SOD活性明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.01);与OGD/R组比较,OGD/R+姜酮组细胞活性明显升高(P<0.01),细胞中Nrf2、HO-1和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞培养上清中SOD活性明显升高(P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01);与OGD/R+姜酮组比较,OGD/R+姜酮+ML385组细胞活性明显降低(P<0.01),细胞中Nrf2、HO-1和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞培养上清中SOD活性明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.05)。结论:姜酮可通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻OGD/R后氧化应激损伤对HT22细胞凋亡的抑制作用。

IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制人脐带间充质干细胞CD200表达抑制巨噬细胞M2极化

目的探究白细胞介素1β(IL-1β)调控人脐带间充质干细胞CD200表达及其对巨噬细胞极化的影响及作用机制。方法无血清培养基分离培养获得人脐带间充质干细胞(hUC-MSC),形态学观察及流式细胞术检测CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达,确定间充质干细胞属性;20 ng/mL IL-1β处理hUC-MSC 24 h,流式细胞术检测CD200阳性细胞率,实时定量PCR和Western blot法检测CD200 mRNA和蛋白表达水平;佛波酯(PMA)诱导THP-1巨噬细胞活化,并与IL-1β处理感染CD200过表达慢病毒的hUC-MSC共培养,流式细胞术检测CD11c和CD206阳性细胞比例;IL-1β联合细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂PD98059处理hUC-MSC,Western blot法检测细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号分子与CD200的表达。结果IL-1β显著下调hUC-MSC CD200蛋白表达与CD200阳性细胞率;过表达CD200显著上调hUC-MSC CD200表达,且CD200过表达hUC-MSC提高巨噬细胞CD206阳性细胞比率;IL-1β激活hUC-MSC的ERK1/2信号通路,PD98059上调IL-1β处理后hUC-MSC中CD200的蛋白表达。结论IL-1β通过激活ERK1/2信号通路抑制CD200的表达,进而抑制hUC-MSC对巨噬细胞向M2型极化的促进作用。

大豆肽和豌豆肽对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢及其相关机制的研究

通过细胞实验探讨大豆肽与豌豆肽的复合物对II型糖尿病胰岛素抵抗作用,并初步探明其作用机制。采用1×10^(-6)mol/L的人胰岛素处理HepG2细胞24 h建立胰岛素抵抗模型;CCK-8法确定大豆肽及豌豆肽对HepG2细胞的安全剂量;检测不同复配比例的大豆肽和豌豆肽实验组的葡萄糖消耗、葡萄糖吸收及细胞中的糖原含量反应糖代谢情况,通过Western Blot法检测各蛋白的表达。结果表明,与对照组相比,HepG2细胞置于含1×10^(-6)mol/L人胰岛素培养液孵育24 h,葡萄糖消耗量、葡萄糖吸收量、糖原含量都降低,表明建模成功。大豆肽及豌豆肽干预均能改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状况,提高细胞对葡萄糖的吸收和消耗能力、糖原合成能力,并能够提高葡萄糖转运蛋白GLUT2、GLUT4的表达量及胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的磷酸化水平,其中质量浓度为200μg/mL、比例为2∶1的大豆肽和豌豆肽效果最好。大豆肽与豌豆肽以2∶1的质量比进行复配可以有效改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状况,可能与肽提高细胞中GLUT2和GLUT4的表达量,以及提高IRS-1和Akt蛋白的磷酸化水平有关。