卵孢长根菇液体发酵培养基配方优化

以卵孢长根菇菌株H1为试材,以菌丝生物量为主要评价指标,在碳氮源单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计对影响卵孢长根菇液体发酵培养生物量的主效因素进行筛选,通过最陡爬坡试验及Box-Benhnken响应面法对卵孢长根菇液体发酵培养基成分进行优化,以期获取优良液体菌种,为工厂化大规模生产卵孢长根菇提供保障。结果表明,适合卵孢长根菇的最适碳源为玉米粉,最适氮源为豆粕粉。当摇床转速150 r/min、培养温度为25℃时,优化后卵孢长根菇液体发酵培养基成分为葡萄糖25.8 g/L、玉米粉26.0 g/L、KH_(2)PO_(4)1.0 g/L、豆粕粉1.5 g/L、酵母粉1.0 g/L、MgSO_(4)0.4 g/L、维生素B1(VB1)0.01 mg/L,其卵孢长根菇菌丝生物量可达23.2 g/L。与常规培养基对比,培养周期缩短3 d,菌丝活力更高。

不同培养基组分对“台农一号”杧花粉萌发和花粉管生长特性的影响

为筛选“台农一号”杧花粉体外培养最适培养基和培养时间,探讨不同培养基组分和培养时间对其花粉体外萌发及花粉管生长的影响,以15%蔗糖+25%聚乙二醇-4000+0.015%硼酸+0.03%钙+0.02%镁+0.01%钾为基础培养基,分别设置1、2、3、4、5、6 h培养,不同蔗糖、硼酸、聚乙二醇-4000、钙、镁、钾浓度梯度单因素及蔗糖、硼酸、聚乙二醇-40003个因素正交试验,统计比较不同处理的花粉萌发率和花粉管生长长度。结果表明,培养时间,培养基中蔗糖、聚乙二醇-4000、硼酸对花粉萌发及花粉管生长均有显著影响,而钙、镁、钾影响不显著。培养2~3 h即可统计花粉萌发率及测量花粉管长度。随着培养基中蔗糖、聚乙二醇-4000、硼酸浓度增加,花粉萌发率及花粉管长度均呈现先增加后降低的趋势,适宜浓度的3个组分能够促进花粉萌发及花粉管生长,浓度过高则起抑制作用。3个因素之间存在明显的互作效应,蔗糖与聚乙二醇-4000的互作效应突出。说明培养基中蔗糖、聚乙二醇-4000、硼酸是花粉体外萌发的必需成分,钙、镁、钾为非必需成分。“台农一号”杧花粉体外萌发及花粉管生长的最适培养基为15%蔗糖+20%聚乙二醇-4000+0.015%硼酸+0.03%钙+0.02%镁+0.01%钾,适宜培养时间为3 h,此条件下花粉萌发率达到83.40%。

鼠疫菌培养基及培养条件的优化

本试验对鼠疫菌培养基制备过程中涉及鼠疫菌生长的诸因素进行优化并作效果评价,目的在于筛选出适合鼠疫菌生长的优质培养基,从而保证鼠疫防控工作的顺利开展。

响应面法优化褐藻胶降解菌Cobetia sp.20发酵培养基

为了提高褐藻胶降解菌株Cobetia sp.20产褐藻胶裂解酶的能力,利用响应面法优化其发酵产褐藻胶裂解酶的培养基。首先利用单因素法分别对发酵培养基中的不同碳源、碳源添加量、不同氮源、氮源添加量以及氯化钠添加量、磷酸二氢钾添加量、硫酸镁添加量和pH进行探究,研究各因素对产酶的影响。在单因素实验的基础上,通过Plackett-Burman试验确定Cobetia sp.20发酵培养基中影响产酶的主要因素。通过响应面试验建立回归方程。研究结果表明,Cobetia sp.20最优发酵培养基配方为褐藻胶15.00 g/L、硫酸铵7.50 g/L、氯化钠15.00 g/L、硫酸镁0.50 g/L、磷酸二氢钾5.30 g/L、硫酸亚铁0.01 g/L、pH值7.58。优化后酶活为142.79 U/mL,比优化前提高了26.36%。褐藻胶裂解酶活的提高,为褐藻胶裂解酶的工业化生产提供了参考。

化工专业“1+X”证书制度“双师型”教师培养基地建设研究

高等职业院校要建设一支师德高尚、技艺精湛、专兼结合的高水平教师队伍,提高教师队伍的整体素质。对此,文章基于化工专业“1+X”证书制度“双师型”教师培养基地建设的必要性,阐述了化工专业“1+X”证书制度“双师型”教师培养基地的建设要以企业和行业发展的需求为导向,以培养“双师型”教师为目标,通过校企合作建立稳定的实践教学基地,创新完善实践教学体系,构建校企合作、工学结合的教学模式,提升教师团队的实践教学能力,旨在全面提高教师队伍的整体素质。

不同培养基对固沙先锋植物羽毛针禾种子萌发的影响

为探索固沙先锋植物羽毛针禾种子萌发的最适培养基条件,以羽毛针禾种子为材料,利用MS、N6、1/2 MS、琼脂和White等5种培养基进行羽毛针禾种子萌发实验。在筛选出高效(琼脂培养基)和低效(White)培养基后,对种子进行可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、α-淀粉酶活性以及赤霉素、脱落酸、乙烯利、茉莉酸和生长素等萌发相关指标的检测。结果表明,琼脂培养基中种子萌发率最高,种子萌发前可溶性蛋白含量和α-淀粉酶活性持续升高,可溶性糖含量基本保持稳定,相关植物激素赤霉素、脱落酸、乙烯利、茉莉酸和生长素含量处于持续上升的状态。White培养基中萌发率最低,种子萌发前α-淀粉酶活性持续升高,可溶性蛋白含量显著下降,赤霉素浓度显著低于琼脂糖培养基,脱落酸的含量高于琼脂糖培养基。研究结果表明,琼脂培养基为5种羽毛针禾种子萌发的最高效培养基。

分离自羊茅属植物的内生真菌菌株在不同培养基上的生长速度多样性

为进一步开发利用羊茅属(Festuca)内生真菌,筛选适于内生真菌生长的培养基并比较不同菌株的生长速度,本研究设置了不同的生长培养基,包括不同pH(4、5、6、7、8、9、10),不同碳源(葡萄糖、麦芽糖、乳糖、D-木糖、D-山梨糖醇、可溶性淀粉),不同氮源(蛋白胨、胰蛋白胨、硝酸钠、硝酸铵、尿素、草酸铵、硝酸钾)和不同培养基[马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)、察氏培养基(Czapek agar)、玉米粉琼脂培养基(CMA)和水琼脂培养基(WA)],选择11株从羊茅属植物分离的香柱菌属(Epichloë)内生真菌(G1、G2、G3、G4、291-4、291-14A、1、2、9、57A、84F)在这些培养基上进行培养,探究上述菌株在不同培养条件下生长速度的差异。结果表明,培养基种类和pH对内生真菌的生长速度和产孢速度均有显著影响(P<0.05),内生真菌的最适生长pH为4~7,利用能力最强的碳源为D-山梨糖醇,氮源为蛋白胨,菌丝生长较适宜的培养基为PDA和PSA培养基,其中生长速度最快的是菌株1和2,生长速度最慢的菌株是291-4和291-14A。

地衣芽孢杆菌产芽孢培养基和培养条件的优化

本研究以地衣芽孢杆菌CICC 20514为对象,芽孢数和芽孢率为目标参数,采用单因素、正交试验方法对培养基配方进行筛选,并在此配方基础上对培养条件进一步优化。结果表明:最终产芽孢发酵培养基的最佳组合为20 g/L果糖、20 g/L豆粕、5 g/L K2HPO_(4)、7 g/L NaCl、0.8 g/L CaCO_(3)和0.8 g/L MgSO_(4);产芽孢最佳培养条件为37℃,220 r/min,接种量5%,装样量20%,初始pH 6.5~7.5,发酵培养时间48 h。优化后的地衣芽孢杆菌CICC 20514培养基芽孢数及芽孢率均具有良好的稳定性,发酵液芽孢数达5.8×10^(9)CFU/mL,比优化前提高了58倍。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)液体增菌培养基的优化

为研发一种金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)选择性增菌液,选用针对革兰氏阴性菌及非葡萄球菌属菌株具有选择抑制作用的7.5%氯化钠肉汤作为基础培养基,探索氨基酸、丙酮酸钠、甘露醇对金黄色葡萄球菌的促生长能力,通过正交试验确定培养基的最优配方,并使用优化后的培养基与原始培养基作用于来源不同的四株金黄色葡萄球菌标准菌株,对其增菌效果和抑制大肠杆菌(Escherichia coli)的效果进行对比。结果表明,最佳培养基配方为在基础培养基上添加L-丙氨酸1.0 g/L、甘露醇6.0 g/L、丙酮酸钠1.2 g/L。菌株在优化后培养基上增菌浊度及转接至Baird-Parker的菌落数上均有促进效果,最终菌株的OD550 nm值有0.28~0.34的增长,转接Baird-Parker后的菌落数也有10~100倍的增长,且在促进目标菌生长的同时对大肠杆菌的抑制性也没有受到影响,表明该增菌培养基选择性良好。

优化培养基组分提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数的研究

【目的】以猪链球菌2型NT15B菌株为研究对象,通过优化发酵培养基组分提高菌株活菌数,降低生产成本,为猪链球菌2型NT15B菌株的高密度培养及猪链球菌病疫苗的大规模生产和推广提供参考。【方法】试验以培养的猪链球菌2型NT15B菌株最高活菌数为筛选指标,通过单因素试验筛选菌株发酵培养基中碳源、氮源(有机氮源和无机氮源)、无机盐金属离子、磷酸缓冲液的最佳组分及浓度,并根据单因素筛选结果选择碳源浓度、有机氮源总浓度、有机氮源比例、磷酸盐缓冲液浓度4个因素各3个水平设计正交试验,并进一步进行多因素的筛选与验证。【结果】猪链球菌2型NT15B菌株发酵培养基最优条件为6.0 g/L蔗糖、1.0 g/L尿素、10 g/L酵母提取物YE7与20 g/L酵母蛋白胨Nucel 887混合氮源,1.0 g/L NaCl、9.58 g/L K_(2)HPO_(4)·3H_(2)O、1.09 g/L KH_(2)PO_(4)、1 mmol/L MgSO_(4)·7H_(2)O、0.3 g/L L-抗坏血酸。采用此最优组合,摇瓶培养猪链球菌2型NT15B活菌数最高达80.83×10^(8)CFU/mL,较优化前提高256.08%。【结论】优化后的培养基能有效提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数,降低了生产成本,为发酵罐水平的优化提供参考。

不同品种大豆培养基对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体代谢成分的影响

以不同品种大豆为培养基对蝙蝠蛾拟青霉代谢成分影响进行研究,筛选出最佳大豆品种,为蝙蝠蛾拟青霉标准化生产提供参考。首先对15个不同大豆品种培养基的主成分含量进行测定,同时对各品种大豆培养基培养的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体生物量、菌丝体腺苷含量及腺苷总量进行测定。采用非靶向代谢组学方法对不同品种大豆培养基培养的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中的代谢成分进行研究。结果表明,15个不同品种大豆豆饼中的粗蛋白和粗脂肪含量以及对应培养基培养的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体腺苷含量均有显著性差异(P<0.05),其中9号品种大豆培养基培养的菌丝体腺苷含量最高为(1089.35±25.51)mg/kg,5号的最低为(60.68±9.56)mg/kg,5号、9号和10号培养的菌丝体之间存在显著性差异(P<0.05)。代谢组学研究表明,5号、9号和10号菌丝体代谢成分相对含量差异较大。其中9号菌丝体丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸等氨基酸,水苏糖、半乳糖等糖类,以及三羧酸循环产物2-氧代丁酸、柠檬酸等代谢物相对含量显著高于5号和10号菌丝体。KEGG富集分析表明,9号培养基通过促进天冬氨酸及谷氨酸代谢通路,可增加天冬氨酸和谷氨酸含量,进而增加腺苷含量。培养基中不同品种大豆培养基对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体腺苷含量影响显著,其中9号大豆培养基培养菌丝体的腺苷含量最高。本研究为筛选培养蝙蝠蛾拟青霉最佳大豆培养基提供了参考。

基于非粮糖蜜的聚羟基脂肪酸酯发酵培养基优化与中试放大

为促进绿色生物基材料聚羟基脂肪酸酯(PHA)的发展,推进非粮糖蜜发酵等工艺标准化、规模化、绿色化运行,压缩PHA发酵成本,提高生产强度,该研究以盐单胞菌(Halomonos sp.)TD01为发酵菌株,基于非粮糖蜜原料发酵生产PHA。通过单因素试验和响应面法优化确定最佳发酵培养基配方,并调整补料培养基后进行中试放大验证。结果表明,生产PHA最佳发酵培养基配方为糖蜜添加量33.2 g/L,尿素添加量2.5 g/L,硫酸铵添加量2.2 g/L。在此优化条件下,PHA产量为3.12 g/L。通过2 L扩大发酵罐培养得到PHA总产量达到67.36 g/L,较优化前产量增长142.13%;5 kL中试发酵得到PHA总产量为51.16 g/L,较优化前产量增长了83.90%。

植物乳杆菌AR307发酵培养基优化研究

乳酸菌因其可以增强免疫力、促进消化、降低血清胆固醇等多种生理功能而受到了广泛关注。为进一步提升发酵乳酸菌的增殖密度,本实验以植物乳杆菌AR307为试验对象,MRS培养基为基础培养基,采用单因素及响应面试验设计对培养基进行优化。研究碳源、氮源、无机盐对菌株生长的影响,以OD_(600)为评价指标确定最佳配比。结果表明:最优碳源为麦芽糖,添加量为3.5%;最优氮源为酵母浸粉、酪蛋白胨与牛肉浸出粉,比例为1∶1∶1,添加量为2.21%;最优无机盐为磷酸氢二钾,添加量为0.75%。在此优化条件下,静置发酵24 h,植物乳杆菌AR307的OD_(600)值达到了6.4,菌体密度得到了提升,为AR307工业化发酵提供了理论依据。

乳酸干预破骨细胞条件培养基促进内皮细胞血管的生成

背景:聚乳酸作为可降解的骨组织工程支架材料被广泛用于组织再生与修复研究,在促进组织愈合与新骨形成、血管生成中具有重要作用。目的:观察聚乳酸降解终产物乳酸对破骨细胞的作用,以及乳酸干预后破骨细胞条件培养基对血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成功能的影响。方法:(1)取对数生长期的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,贴壁后分别加入含0,5,10,20 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基(含核因子κB受体活化因子配体、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基),培养5 d后分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶与细胞骨架纤维状肌动蛋白染色,培养24h后采用RT-PCR检测抗酒石酸酸性磷酸酶5 m RNA表达。(2)取对数生长期的RAW264.7细胞,贴壁后分2组培养:对照组加入破骨诱导培养基,实验组加入含10 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基,培养5 d后更换为无血清DMEM培养基继续培养24 h,离心取上清液,分别与等体积含体积分数10%胎牛血清DMEM培养基混合后作用条件培养基备用。取对数生长期的人脐静脉内皮细胞,分别与对照组、实验组条件培养基共培养,通过CCK-8、Transwell、划痕、成管实验观察细胞的增殖、迁移和成管能力,通过RT-PCR和Western Blot检测血管生成相关基因和蛋白的表达。结果与结论:(1)抗酒石酸酸性磷酸酶与肌动蛋白染色结果显示,5,10 mmol/L乳酸可促进RAW264.7细胞破骨向分化,其中以10 mmol/L乳酸的促进作用更显著;RT-PCR检测结果显示,5,10,20 mmol/L乳酸均可提高酒石酸酸性磷酸酶5 m RNA的表达,其中以10 mmol/L乳酸的提高作用最显著;(2)与对照组条件培养基相比,实验组条件培养基可促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移与成管能力(P<0.05),提高血管内皮生长因子、血管生成素1的m RNA和蛋白表达(P<0.05);(3)结果表明,乳酸诱导分化的破骨细胞条件培养基可促进内皮细胞的血管生成,机制可能与提高血管内皮生长因子、血管生成素1表达相关。

樟芝-太子参双向液体发酵培养基优化及效应分析

【目的】有效利用太子参根须副产物资源,提高樟芝(Antrodia camphorata)菌丝产量,促进活性成分合成。【方法】以太子参根须(粉末)作为培养基组分,Plackett-Burman试验筛选影响樟芝菌丝生长的关键成分,正交试验优化培养基组成。【结果】筛选试验结果表明,葡萄糖、酵母粉、蛋白胨及KH2PO4对樟芝菌丝生长有重要影响,正交试验优化的培养基组成为:太子参6 g·L^(−1),葡萄糖10 g·L^(−1),酵母粉4 g·L^(−1),蛋白胨6 g·L^(−1),KH_(2)PO_(4)1.5g·L^(−1)。利用优化培养基深层发酵,樟芝生物量达到4.73 g·L^(−1),与对照培养基及PDB培养基相比,胞内三萜含量分别提高2.75%和24.85%,胞外多糖分别提高161.11%和113.64%;发酵液中高密度无性孢子含量达1.8×10^(7)个·mL^(-1)。【结论】太子参适合作为樟芝双向液体发酵的药性成分,可有效促进樟芝菌丝生长、活性成分合成和无性孢子形成,是太子参根须副产物资源利用新途径。

产聚苹果酸出芽短梗霉的筛选、鉴定及发酵培养基优化

从自然土壤样本中筛选得到一株产聚苹果酸(PMLA)菌株,该菌株经形态学观察和分子进化分析鉴定为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)。筛选菌株同时具有聚苹果酸、普鲁兰多糖和liamocin胞外聚合物的合成能力。通过单因素和响应面试验对该菌种产PMLA的发酵培养基组分进行优化,获得较优培养基组分为葡萄糖130 g/L、硝酸钠5 g/L、玉米浆1.22 g/L、氯化钾0.5 g/L、磷酸二氢钾0.1 g/L、七水硫酸镁0.2 g/L、碳酸钙30 g/L,采用该培养基获得聚苹果酸的最大产量为25.82 g/L,比优化前提高了70.72%。

培养基、光照强度和初始氮浓度对克里藻生长及生物活性代谢产物积累的影响

为利用克里藻JNU41高效生产油脂、亚油酸和叶黄素等重要代谢产物,对其进行培养条件的优化及代谢产物积累的评估。采用改良的BG-11(mBG-11)和BBM(mBBM)培养基,设置3组光照强度[单侧100μmol/(m^(2)·s)、单侧300μmol/(m^(2)·s)和双侧300μmol/(m^(2)·s)]和6种初始氮浓度(3、6、9、12、15、18 mmol/L)对克里藻JNU41进行培养,并测定其生长曲线、生化组成、总脂产率、脂肪酸组成及叶黄素含量。结果表明:克里藻JNU41在mBBM培养基、双侧光照强度300μmol/(m^(2)·s)、初始氮浓度6 mmol/L条件下,生物量和总脂产率最高,分别为8.38 g/L和281.71mg/(L·d);在mBG-11培养基、双侧光照强度300μmol/(m^(2)·s)、初始氮浓度3 mmol/L条件下,总脂和总脂肪酸含量最高,分别为55.12%和47.10%。克里藻JNU41主要脂肪酸组成为棕榈酸、油酸、亚油酸和亚麻酸,其中亚油酸含量最高,亚油酸最高相对含量为65.87%。此外,克里藻JNU41还积累一定量叶黄素,最高含量可达1.64 mg/g。因此,克里藻JNU41是一株可用于生产多种高附加值产物的潜力藻株。

不同培养基对小鼠卵母细胞体外成熟质量及发育潜能的影响

背景:近年,未成熟卵母细胞体外成熟技术的需求逐渐增加。卵母细胞成熟受多种因素影响,其中培养基的选择尤为重要,目前尚无统一方案。目的:用不同成熟培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,研究其对卵母细胞质量及发育潜能的影响。方法:用G-1^(TM)PLUS培养基、CZB培养基和M16培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,并以体内成熟卵母细胞为对照组,比较各组间的体外受精和早期胚胎发育能力。对于各组成熟后卵母细胞,采用免疫荧光方法评估线粒体功能,共聚焦显微镜实时成像系统检测钙震荡情况。结果与结论:①3组之间第一极体排出率无明显差异(P>0.05);②G-1^(TM)PLUS组体外受精率(52.86±11.24)%高于M16组(37.76±6.70)%和CZB组(30.62±5.51)%;CZB组的囊胚率(36.23±6.63)%低于对照组(78.16±4.17)%、G-1^(TM)PLUS组(55.75±7.63)%和M16组(53.36±6.33)%;③与对照组相比,仅CZB组的纺锤体长宽比增加;④CZB组线粒体功能差于对照组、G-1^(TM)PLUS组及M16组,并出现CZB组线粒体异常凝集现象;⑤受精后CZB组及M16组的钙震动频率显著高于G1组和对照组。综上所述,在小鼠卵母细胞体外成熟过程中,G-1^(TM)PLUS、CZB及M16培养基的体外成熟率无差异,但G-1^(TM)PLUS培养基有更高的受精率和囊胚形成率。

新时代卓越工程师联合培养基地思政育人模式与方法探索

卓越工程师联合培养基地是研究生培养单位与行业、企业等共同建立的人才培养平台,是研究生进行专业实践的主要场所,加强新时代卓越工程师联合培养基地建设十分必要。在分析思想政治教育与卓越工程师培养相结合的重要性和紧迫性基础上,阐释思想政治教育融入卓越工程师联合培养基地的模式。提出了在联合培养基地培植典型思政育人元素的方法,将政治素养、“揭榜挂帅”探索精神、优秀文化、工匠精神、工程伦理、学术诚信等融入联合培养基地建设中。所作探索可为新时代卓越工程师联合培养基地的思政育人提供参考。

海绵胶煤炱菌适宜培养基筛选试验

目的:探索在试验条件下能够培养出大型海绵胶煤炱菌子实体的培养基。方法:采用离子色谱法测定居竹伪角蚜蜜露的可溶性糖成分,再分别选用5种传统培养基、4种含蜜露糖成分的培养基、4种麸皮加蜜露糖成分的培养基培养海绵胶煤炱菌,比较该菌的子实体形态大小、分枝情况、颜色和产量等。结果:①蜜露糖主要含有海藻糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖;②5种传统培养基培养的海绵胶煤炱菌子实体产量均较低,但麸皮葡萄糖琼脂培养基(BGA)培养的子实体有较多的分枝;③含蜜露糖成分的培养基SH4培养的子实体产量为53mg/cm^(2),但分枝级数为5级;④采用麸皮加蜜露糖成分的培养基(SHBA)培养的子实体产量虽然低于SH4培养基,但形态更接近野生状态,分枝级数也提升到7级,最长8mm,各方面极显著优于普通培养基。结论:适宜海绵胶煤炱菌生长的、可以形成大型子实体、形态接近野生状态的培养基为麸皮加蜜露糖成分的培养基(SHBA)。