Neurocan基因蛋白表达及其抗体制备与检测的实验研究

目的制备Neurocan蛋白，用此蛋白免疫动物制备抗血清，并对抗血清进行检测，最终使待参与DNA疫苗构成的Neurocan蛋白所产生的抗体能与脑内创伤区的相应抑制性蛋白抗原结合，从而减轻抑制因子对神经生长的抑制作用，促进神经再生。方法合成Neurocan基因，构建原核表达质粒PET30a-Neurocan，转化大肠杆菌BL21，异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达目的蛋白，并经SDS—PAGE、Western blot鉴定。Neurocan蛋白免疫兔制备免疫血清。ELISA法检测抗血清效价，以兔免疫前血清为阴性对照：Western blot检测抗血清特异性，以免疫血清为-抗，山羊抗兔-AP为二抗，NBT／BCIP显色。结果合成的Areurocart基因经酶切鉴定、PCR鉴定及测序鉴定，显示序列正确。原核表达Neurocan蛋白经过SDS-PAGE鉴定，条带大小约为55000，与计算出来的大小一致；经Westem blot鉴定，目的蛋白能与his抗体特异性结合，说明是Neurocan基因的表达产物。抗血清经ELISA法检测，抗血清效价达到1：100万；经Western blot检测，目的条带明显。结论Neurocan蛋白原核表达成功；通过Neurocan蛋白免疫兔可得到特异性抗体，此抗体能与Neurocan蛋白特异性结合，为DNA疫苗的进一步研制奠定了基础。