银杏内酯对胚基底前脑NOS、AChE阳性神经元发育的影响

目的 探讨银杏内酯对胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育的影响。方法 实验分成银杏组、NGF组、BDNF组和单纯对照组 ,取孕 17dSD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 96孔培养板和 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成份的DMEM培养液 ,于体外培养 18d后 ,96孔培养板行MTT比色分析测定光吸收值 (OD值 ) ,以检测培养的神经元活力。2块 2 4孔培养板分别行NADPH d和AChE组化染色 ,显微镜下计数各组每孔中的NOS和AChE阳性神经元数 ,并用CMM 30 1图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理 ,数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果 银杏组MTT比色分析的OD值和NOS、AChE阳性神经元数、细胞面积、细胞周长等指标均明显地好于单纯对照组 ,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。

体外培养新生大鼠海马神经元的图象分析

目的:研究体外培养海马神经元不同时期的形态学变化。方法:用图象分析方法,研究体外培养的新生Wistar大鼠海马神经元在不同时间的形态、细胞数密度、面数密度、长度密度以及分支数密度的发育性变化情况。结果:体外培养的海马神经元呈梭形、锥体形、多角形多形性生长。随着培养时间的延长,细胞数密度和面数密度保持不变,突起长度密度和分支密度逐渐增加,突起上膨体样结构数密度增加。结论:体外培养的新生大鼠海马神经元在离体1～14d,随着培养时间的延长,细胞突起、分支数目以及膨体样结构逐渐增多,细胞间连接增加,呈现形态和功能成熟过程。

NGF对新生大鼠隔神经元的神经营养作用

本实验观察了神经生长因子（ＮＧＦ，２．５ｓ）对无血清培养新生大鼠隔神经元生长发育的作用。结果证明，ＮＧＦ能促进新生大鼠隔神经元的存活，增加神经元胞体面积和直径，增加隔培养神经元中ＡＣｈＥ阳性神经元的数目。流式细胞分析显示，ＮＧＦ使神经元平均蛋白含量增加。以上结果表明：ＮＧＦ对新生大鼠隔神经元的生长发育具有促进作用。Ｐ＜０．０１３．ＮＧＦ增加隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径图像分析结果可见：在前７ｄ，在神经元胞体面积、最长径和最短径等方面两组之间无明显差别，但在培养１４、２１和３０ｄ时，ＮＧＦ组培养神经元的平均胞体面积、最长径和最短径均大于对照组，经统计学处理有显著意义（表２）。表２对隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径的影响（ｘ±ｓ）注：Ｎ＝３０与同时期对照组相比＊Ｐ＜０．０５Ｐ＜０．０１４．ＮＧＦ促进新生大鼠隔细胞的总量白合成用ＦＡＣＳ４４０流式细胞仪测定隔细胞的平均蛋白含量，结果表明：在培养３、７、１４和２１ｄ时，ＮＧＦ组培养细胞的平均蛋白含量均显著高于对照组（表３，Ｆｉｇ．１）。表３ＮＧＦ对隔神经元蛋白合成的影响（ｘ±ｓ）往：Ｎ＝５与同时期对照组相比 ＊Ｐ＜０．０５５．ＮＧＦ提高隔神经元的ＡＣｈＥ?

新生大鼠下丘脑GnRH免疫反应性神经元的体外发育

应用神经细胞培养、免疫细胞化学、图像分析等技术，研究了新生大鼠下丘脑促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）神经元的体外发育规律。培养１ｄ即可见ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元；１～３ｄ，ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元生长最快，胞体和突起的平均生长速度分别为４５．５９μｍ２／ｄ和１９．３９μｍ／ｄ，染色加深；培养７ｄ，ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体截面积、胞体染色强度和突起长度均达最高峰，分别为１７１．２１±４３．１７μｍ２，０．２８９±０．０３４，８７．０１±２２．３３μｍ；培养１４ｄ，ＧｎＲＨ－ＩＲ神经元的胞体大小和突起长度维持在７ｄ时的水平，但染色减弱。结果提示，培养第１周是ＧｎＲＨ神经元体外发育成熟的关键时期。

新生大鼠下丘脑多巴胺能神经元的体外发育

为了探讨下丘脑多巴胺（ＤＡ）能神经元的体外生长发育特性，取新生大鼠下丘脑神经元进行分散培养。用酪氨酸羟化酶（ＴＨ）抗血清和免疫细胞化学ＡＢＣ法显示ＤＡ能神经元，并进行图像分析。结果发现，培养１ｄ时即可见ＴＨ－免疫反应性（ＩＲ）神经元。此后，ＴＨ－ＩＲ神经元数量增加，迅速生长。至培养７ｄ时，ＴＨ－ＩＲ神经元的数量、胞体截面积、胞体染色强度和突起长度均达最高峰，且多极神经元所占比例增多，神经元之间建立起多种细胞间接触。培养１４ｄ时，ＴＨ－ＩＲ神经元的胞体大小和突起长度维持在７ｄ时的水平，但数目减少，染色减弱。结果表明，在体外培养条件下，下丘脑ＤＡ能神经元的形态和功能在第１周内发育趋于成熟，并可维持到第１４ｄ左右。

体外培养脑神经细胞的计算机测量

利用IBM PC/AT兼容机及PIP 1024 B图像板,开发了测量体外培养脑神经细胞的系统软件,该系统可以在6～7分钟内完成一个高倍视野的细胞测量,可自动连续测量24～40个视野。每个细胞的胞体面积、直径、周长,突起平均数及突起总长度,以平均值和标准差表示。可对组间结果进行比较及t值测定。应用该系统我们测定了鸡胚大脑半球神经细胞在低密度无血清培养条件下,1、2、3、5天各项指标的变化。

银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响

目的:探讨银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响及可能的作用机制。方法:实验分银杏组、神经生长因子(NGF)组、脑原神经营养因子(BDNF)组和单纯对照组。取孕17天SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于96孔培养板和2块24孔培养板中,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成分的DMEM培养液。于体外培养18天后,96孔培养板行MTT比色分析测定光密度值(A值),以检测培养的神经元活力。2块24孔培养板分别行NADPH-d和AchE组织化学染色,显微镜下计数各组每孔中一氧化氢合酶(NOS)、AchE阳性神经元数目,并用CMM-301图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理,数据用方差分析、SNK检验作统计学处理。结果:银杏组MTT比色分析的A值和NOS、AchE阳性神经元数目、细胞面积、细胞周长等指标均优于单纯对照组,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。结论:银杏内酯在促进大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育方面具有类似NGF或BDNF的作用。

人酸性成纤维细胞生长因子支持原代培养下丘脑神经元的存活和突起生长

初步研究了人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对无血清培养条件下新生大鼠下丘脑神经元的突起生长和促生存作用。结果可见,在此培养物中加入纯化的aFGF后,神经元的存活数增加,神经突起生长,数目增多,aFGF的这种作用在一定范围内呈剂量效应关系。实验还表明,aFGF可增加神经元胞体直径和体积,流式细胞分析亦表明神经元蛋白总量提高。本结果提示,纯化的aFGF对在神经内分泌中占重要地位的下丘脑也有神经营养作用。其作用机制尚有待进一步研究。