基于脑肠轴理论探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对癫痫患者胶质纤维酸性蛋白、神经肽Y及S100B的影响

目的基于脑肠轴理论探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对癫痫患者胶质纤维酸性蛋白、神经肽Y及S100B的影响。方法纳入2018年1月—2020年1月癫痫患者114例作为观察对象,随机分为两组,对照组57例选用电子生物反馈技术;联合组57例选用柴胡加龙骨牡蛎汤联合电子生物反馈技术,持续治疗3个月。比较临床疗效及癫痫生活质量评定量表(epilepsy quality of life scale-31,QOLIE-31)、不良反应,治疗前后测定血清胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)及S100B水平。结果对照组有效率82.46%(47/57)低于联合组94.74%(54/57),有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比,两组治疗后血清GFAP、NPY及S100B水平均降低,而且联合组治疗后血清GFAP、NPY及S100B水平低于对照组,有统计学意义(P<0.05)。对照组综合质量、情绪、总体健康、药物影响、认知功能、社会功能、精力及对发作担忧评分低于联合组,有统计学意义(P<0.05)。两组患者不良反应率分析,无统计学意义(P>0.05)。结论柴胡加龙骨牡蛎汤有疏利肝胆,和解少阳之功,对癫痫患者的疗效显著,可以降低神经细胞因子,提高生活质量,值得推广。

重组人神经肽Y融合蛋白的表达、纯化及生物信息学分析研究

目的在大肠杆菌中表达人神经肽Y,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-NPY转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析NPY蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-NPY重组质粒的DE3菌,表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了NPY的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-NPY在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对NPY蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。

羟苯磺酸钙治疗脑梗死的疗效及其对C反应蛋白、神经肽Y和皮质醇水平变化的影响

目的观察羟苯磺酸钙治疗脑梗死的疗效及其对血清C反应蛋白(CRP)、神经肽Y(NPY)和皮质醇动态变化的影响。方法选择2011年6月—2012年6月我科住院的脑梗死患者60例,按随机数字表法分为普通治疗组和羟苯磺酸钙治疗组,每组30例,普通治疗组行基础治疗,羟苯磺酸钙治疗组在基础治疗的基础上加用羟苯磺酸钙0.5 g/次,口服,3次/d。两组均连续治疗14 d。观察两组患者治疗前后CRP、NPY、皮质醇及美国国立卫生院脑卒中量表(NIHSS)评分的变化。结果两组患者的血清CRP、NPY水平在治疗后第7天时均高于治疗前和治疗后第14天(P<0.05),且治疗前水平高于治疗后第14天(P<0.05);皮质醇水平在治疗后第7天低于治疗前(P<0.05),治疗后第14天低于治疗后第7天(P<0.05)。组间比较显示,两组治疗后第7、14天时CRP和NPY水平间差异均有统计学意义(P<0.05),皮质醇和NIHSS评分间差异均无统计学意义(P>0.05)。脑梗死患者治疗前和治疗第7天时NIHSS评分与CRP、NPY和皮质醇水平呈正相关(P<0.05),治疗后第14天时NIHSS评分与CRP和NPY水平呈正相关(P<0.05)。结论脑梗死患者血清CRP、NPY和皮质醇水平明显增高,炎症反应、缺血和应激是病情发展的重要机制,羟苯磺酸钙治疗可以降低患者血清CRP、NPY和皮质醇的水平。

PTD-NPY融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY。PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶SacI线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中。阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。经过120h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性。获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础。

PGP9.5和NPY肽能神经在成人睾丸组织中的分布

目的:研究蛋白基因产物9.5(proteingeneproduct9.5,PGP9.5)肽能神经和神经肽Y(neuropeptideY,NPY)肽能神经在成人睾丸组织中的分布情况。方法:成年男性睾丸标本4例,将其制成5!m厚冰冻切片,运用ABC免疫组织化学方法检测睾丸组织中PGP9.5与NPY肽能神经纤维的分布。结果:PGP9.5肽能神经纤维主要分布于睾丸间质中,其与曲细精管及Leydig细胞存在较为紧密的联系;NPY肽能神经纤维主要分布于睾丸血管周围,生精小管管周也可见部分分布,NPY神经纤维分布密度低于PGP9.5神经纤维。结论:人睾丸组织内分布着PGP9.5和NPY肽能神经纤维,精索神经通过这些神经纤维实现其对精子发生过程的调控。

不同年龄牦牛睾丸蛋白基因产物9.5和神经肽Y的分布比较

目的探讨蛋白基因产物9.5（PGP 9.5）和神经肽Y（NP-Y）在不同年龄牦牛睾丸的分布特征。方法采取睾丸摘除术收集3～4月龄睾丸9对,3、4岁牦牛睾丸10对,10～12岁牦牛睾丸7对,常规石蜡包埋、切片,免疫组织化学SP法观察PGP 9.5和NP-Y在不同年龄牦牛睾丸的分布特点。结果 PGP 9.5和NP-Y显著分布于幼龄及青年牦牛睾丸Leydig细胞及间质血管周围或血管壁内,两者在青年牦牛睾丸初级精母细胞为阴性,其余生精细胞为阳性;且阳性信号在睾丸体最强,其次为头部,尾部最弱;各年龄段Sertoli细胞中NP-Y为阳性表达,PGP 9.5均为阴性;老龄牦牛睾丸血管PGP 9.5阳性信号明显,而NP-Y基本无表达。结论青年牦牛睾丸组织PGP 9.5及NP-Y的显著分布对睾丸生殖功能调节发挥着重要的调控作用;提示NP-Y在老龄牦牛睾丸血管的分布显著降低。

蝎毒耐热蛋白对原代培养海马神经元NPY表达的影响

探讨具有抗癫痫反复发作作用的蝎毒耐热蛋白(scorpion venom heat-resistant protein,SVHRP)对大鼠海马神经元神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)表达的影响。采用免疫细胞化学ABC法与HPIAS系列彩色病理图文定量分析系统相结合,检测NPY-免疫阳性产物(NPY-IR)表达的变化,用RT-PCR技术观察NPY mRNA表达水平的变化。终浓度范围为0.2、2、20和200μg/ml的SVHRP分别与培养10d的海马神经元共孵育24h后,NPY阳性神经元的反应强度明显增强,具有剂量-反应关系。终浓度为20μg/ml的SVHRP分别与培养10d的海马神经元共孵育3、6、9、12和24h,NPY阳性反应强度增强,并呈时间-反应关系。RT-PCR结果显示,20μg/ml的SVHRP与原代培养海马神经元共孵育24h后,NPY mRNA的表达明显增加。以上结果提示SVHRP可诱导原代培养海马神经元NPY阳性反应和NPY mRNA的表达。

腰腹部推拿对压力性尿失禁大鼠尿道组织NPY和PGP9.5表达的影响

目的:观察压力性尿失禁大鼠尿道组织神经肽Y(NPY)及蛋白基因产物9.5(PGP9.5)表达的变化以及腰骶部推拿和腹部推拿对其产生的影响,为压力性尿失禁的推拿手法治疗提供一定的研究依据。方法:取SUI模型大鼠、正常大鼠、腹部推拿治疗大鼠、腰骶部推拿治疗大鼠的尿道标本并用免疫组化的方法检测标本中NPY、PGP9.5的表达情况。结果:通过模拟产伤和绝经可以获得压力性尿失禁的动物模型。免疫组化染色显示,NPY和PGP9.5存在于尿道组织中,且模型对照组与空白对照组、腹部推拿组以及腰骶部推拿组相比较,模型组中NPY和PGP9.5染色强度显著降低(P<0.05)。腹部推拿组与腰骶部推拿组NPY的阳性表达差异无统计学意义。腹部推拿组比腰骶部推拿组PGP9.5的阳性表达显著降低(P<0.05)。结论:腰腹部推拿对SUI的治疗作用可能与其对神经损伤的修复有关。体现了"从阴引阳,从阳引阴"理论。

较高浓度神经肽Y抑制人脂肪干细胞增殖并促进其分化

目的研究不同浓度神经肽Y(NPY)对人脂肪干细胞(h ADSC)增殖及分化的影响。方法分离h ADSC,用(10^(-6)~10^(-15))mol/L NPY诱导刺激h ADSC,MTT法检测其增殖;分别用完全培养基、NPY和胰岛素处理h ADSC,油红O染色观察h ADSC的分化;Western blot法检测各组过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、诱导细胞死亡的d FF45样效应因子C(Cidec)和受体相互作用蛋白140(RIP140)的表达水平。结果 (10^(-11)~10^(-15))mol/L NPY促进h ADSC增殖,(10^(-6)~10^(-10))mol/L NPY抑制h ADSC增殖;(10^(-7)、10^(-9)、10^(-11))mol/L NPY均诱导h ADSC分化,并增加PPARγ、C/EBPα蛋白表达,同时促进白色脂肪组织特异性标志Cidec、RIP140蛋白的表达。结论较低浓度NPY促进h ADSC增殖,较高浓度NPY抑制h ADSC增殖并促进其分化。

口腔黏膜扁平苔藓中Bax蛋白表达和血浆神经肽Y浓度的研究

目的：探讨口腔扁平苔藓（OLP）黏膜Bax蛋白的表达和血浆神经肽Y（NPY）浓度及其相互间的关系。方法选择2011年3月—2013年10月确诊的口腔扁平苔藓患者38例为观察组，正常口腔黏膜者32例为对照组。应用免疫组化染色技术对2组口腔黏膜组织进行Bax蛋白表达的检测，应用神经肽放射免疫法测定NPY的浓度。结果观察组中斑纹型、糜烂型Bax阳性率、指数均高于对照组（χ2＝12．16、22．29；t ＝8．71、15．38， P ＜0．01）；糜烂型Bax指数高于斑纹型（ t ＝4．52， P ＜0．01）。斑纹型、糜烂型NPY浓度均高于对照组（ t ＝4．91、7．46， P ＜0．01）；糜烂型高于斑纹型，差异有统计学意义（ t ＝2．18， P ＜0．05）。结论 Bax蛋白与NPY在OLP中均呈高水平，高浓度NPY可促进T细胞活化，Bax蛋白又通过活化的T细胞，引发细胞凋亡而参与OLP的发生发展过程。

电针对单纯性肥胖大鼠胰岛素抵抗及下丘脑刺鼠基因相关蛋白、神经肽Y的影响

目的观察电针对饮食诱导的单纯性肥胖大鼠体质量、胰岛素抵抗及下丘脑刺鼠基因相关蛋白(AGRP)、神经肽Y(NPY)基因表达的影响,探讨电针治疗肥胖症的相关机制。方法 50只SD雄性大鼠随机分为低脂组10只和高脂组40只,高脂组大鼠造模成功后,随机分为模型组、电针组、西药组,每组10只。电针组电针"后三里"和"曲池",每日1次,每次20 min,连续28 d;西药组予奥利司他灌胃,低脂组和模型组不做治疗。每日记录大鼠体质量,检测空腹血糖和胰岛素,RT-q PCR检测下丘脑AGRP和NPY基因表达水平,HE染色观察脂肪组织和肝脏形态。结果治疗后电针组和西药组体质量、胰岛素抵抗指数、AGRP、NPY、脂肪细胞直径均低于模型组(P<0.05),2组比较差异无统计学意义。电针组和西药组肝脏脂变情况均得到改善。结论电针通过改善胰岛素抵抗,抑制NPY和AGRP神经元的表达,达到控制体质量增长的目的。

血清GFAP、NPY水平与老年脑卒中后抑郁的相关性研究

目的探讨血清神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经肽Y(NPY)水平与老年脑卒中后抑郁(PSD)的相关性。方法回顾性选取保定市第二中心医院收治的215例老年脑卒中患者,采用老年抑郁评分表(GDS)分析出院后6个月是患者抑郁状况,根据抑郁发生情况和程度分组。收集患者性别、年龄、病变性质、病变类型的资料;检测入院时血清GFAP、NPY水平;采用日常生活活动量表(ADL)评价患者出院后6个月时日常活动能力;采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估患者入院时神经功能缺损状况。采用Pearson相关性分析探讨GDS评分与NIHSS评分、ADL评分、血清GFAP、NPY水平的关系;采用多因素Logistic回归分析PSD发生的影响因素。结果215例脑卒中患者出院后6个月时PSD发生率为33.95%(73/215),其中轻度抑郁39例(53.42%),中重度抑郁34例(46.58%)。PSD组入院时NIHSS评分、血清GFAP水平为(12.55±3.69)分、(24.21±6.01)μg/L,高于非PSD组[(5.77±1.73)分、(18.55±2.49)μg/L],血清NPY水平及ADL评分为(241.58±58.16)ng/mL、(46.43±10.68)分,低于非PSD组[(380.14±67.35)ng/mL、(74.79±10.93)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。中重度抑郁组患者入院NIHSS评分及血清GFAP水平为(16.17±3.58)分、(26.80±6.43)μg/L,高于轻度抑郁组[(9.38±2.88)分、(21.94±3.96)μg/L],而血清NPY水平及ADL评分为(213.16±39.66)ng/mL、(41.21±9.72)分,则呈显著低于轻度抑郁组[(266.36±60.73)ng/mL、(50.97±9.49)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。NIHSS评分、血清GFAP水平与患者GDS评分呈显著正相关,而血清NPY水平及出院后ADL评分则与GDS评分呈明显负相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,入院时NIHSS评分、血清GFAP水平是PSD发生的独立危险因素,血清NPY水平及ADL评分是GDS的保护因素(P<0.05)。结论脑卒中患者神经功能缺损状况、出院后日常生活能力是影响PSD的重要因素,同时血清GFAP、NPY水平可作为预测PSD发病及病情的参考指标。

牙鲆NPY的体外表达及体内检测

神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)被普遍认为是一种重要的促食因子,在调节鱼类的摄食行为方面起着至关重要的作用。为进一步研究牙鲆NPY蛋白的生物学功能,作者克隆了牙鲆NPY成熟肽序列(m-NPY)及含有信号肽的全长序列(f-NPY),利用原核表达系统分别进行体外重组表达,筛选出诱导剂IPTG最佳诱导浓度为0.8 mmol/L及最佳诱导时间3 h;此外,根据牙鲆NPY第49-64位氨基酸序列制备了多克隆抗体并通过Western blot验证该多抗能够有效检验重组NPY及牙鲆体内NPY的表达。研究结果为研究重组牙鲆NPY蛋白在牙鲆水产养殖产业中的应用及检测提供了依据。

重组蛋白转导域-神经肽Y融合蛋白对体外培养大鼠脂肪细胞的影响

目的探讨重组蛋白转导域-神经肽Y融合蛋白对体外培养大鼠脂肪细胞的影响。方法采用剪切消化法分离大鼠前脂肪细胞,培养液中添加重组PTD-NPY融合蛋白,检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的形态学变化、细胞中甘油三酯含量和甘油磷酸脱氢酶(GPDH)活性。结果重组PTD-NPY融合蛋白处理大鼠前脂肪细胞72 h,细胞体积增大,细胞数量增加,细胞甘油三酯含量和GPDH活性升高;重组PTD-NPY融合蛋白处理成熟脂肪细胞48h后,细胞体积明显增大,细胞内脂肪滴数量增加并融合成较大的脂滴,甘油三酯含量和GPDH活性均显著升高。结论重组PTD-NPY融合蛋白明显促进前脂肪细胞的分化,促进脂肪细胞中甘油三酯的合成与沉积。为重组PTD-NPY融合蛋白在动物生产及人类疾病治疗中的实际应用奠定理论基础。

黄芪三仙汤通过海马神经肽Y调节细胞免疫功能的实验研究

目的:探讨黄芪三仙汤调节细胞免疫功能作用机制。方法:将24只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。将1μlβ-淀粉样蛋白(Aβ)1-40(10μg/μl)在立体定向仪下注入模型组和治疗组大鼠右侧Meynert核复制阿尔茨海默病(AD)模型,治疗组用黄芪三仙汤灌胃,于4周末观察各组海马区神经肽Y(NPY)、血浆中促肾上腺皮质激素(ACTH)、血清中皮质酮(CORT)含量,胸腺指数,脾脏巨噬细胞数目的变化。结果:模型组大鼠海马组织中NPY的释放减少,血浆中ACTH和血清中CORT含量显著降低,脾脏巨噬细胞数目显著增加(P<0.01)。治疗组NPY的释放增加,血浆中ACTH和血清中CORT含量显著升高,脾脏巨噬细胞数目明显减少(P<0.01)。结论:黄芪三仙汤可以通过海马-NPY-垂体-肾上腺轴调节细胞免疫功能。

重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定

目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定，表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化，以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔，获得抗血清，Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌，表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白，用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体，为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。

神经肽Y对癫痫大鼠海马齿状回内FOS蛋白表达的影响

采用海人藻酸 (KA)癫痫模型 ,观察侧脑室内注射神经肽 Y (NPY)对癫痫大鼠海马齿状回内 FOS蛋白表达的影响。结果发现脑室内注射 NPY后海马齿状回内 FOS蛋白的表达较对照组降低 ,有显著性差异 (P<0 .0 1)。认为 NPY能抑制 FOS蛋白的表达 ,具有抗癫痫作用。

孕期吸入异氟醚对子代大鼠认知功能及海马GAP-43和NPY表达的影响

目的:探讨大鼠孕期吸入异氟醚对子代认知功能以及海马生长相关蛋白-43(GAP-43)和神经肽Y(NPY)表达的影响。方法:选取孕龄为18 d的SD大鼠12只,随机分为异氟醚处理组和对照组(n=6)。异氟醚组使用1.3%的异氟醚处理6 h,对照组吸入含30%氧气的空氧混合气体。待幼鼠出生4周后,使用水迷宫实验,检测幼鼠空间学习记忆能力。测试结束后,取其海马组织行免疫组织化学染色,观察GAP-43和NPY在两组仔鼠海马CA1区表达的差异。结果:在水迷宫测试中,与对照组仔鼠相比,异氟醚组仔鼠平均逃逸潜伏期时间明显延长(P<0.05)、第三象限活动时间和穿越平台次数明显减少(P<0.05)。异氟醚组仔鼠海马CA1区神经细胞内GAP-43和NPY的表达均较正常对照组明显下降,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:1.3%异氟醚处理孕18 d的大鼠6 h可导致仔鼠学习记忆功能降低,这可能与海马CA1区GAP-43和NPY表达下调有关。

大鼠脊髓背角浅层神经元中神经肽YY_1受体与生长抑素共存

用间接免疫荧光双标记方法 ,研究大鼠脊髓 层神经元中神经肽 Y Y1受体与生长抑素共存关系。结果显示在 层深部许多神经元含 Y1受体 -免疫反应性物质 ,只观察到少量的生长抑素免疫反应阳性神经元胞体 ,其中个别 Y1受体阳性神经元也含生长抑素免疫反应性物质 ;在局部使用秋水仙素后 ,大多数 Y1受体免疫反应阳性神经元含有生长抑素免疫反应性物质。推论脊髓背角 层神经元中的 Y1受体可能与生长抑素在脊髓水平的功能有关。

枸杞多糖对热暴露大鼠血浆CRH、Cor、HSP70含量及下丘脑NPY mRNA表达的影响

目的热暴露对大鼠应激器官重量和血浆中促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)和皮质醇(cortisol,Cor)和热休克蛋白70(heat shock 70 protein,HSP70)含量以及下丘脑神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)mRNA表达水平的影响及枸杞多糖(lycium barbarum polysacharides,LBP)干预作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组(CN)、热暴露组(HE)及枸杞多糖干预组(HL)。对照组置于24℃人工环境下饲养,热暴露组与枸杞多糖干预组均置于32℃的人工环境中。经14d热暴露后,取脾脏、肝脏、胸腺、下丘脑器官精确称重;检测血浆中CRH、Cor和HSP70的含量;测定大鼠下丘脑NPY mRNA的表达水平。结果与对照组相比,热暴露组和枸杞多糖干预组大鼠的肝脏器官相对重量明显降低(P<0.05),血浆CRH、Cor及HSP70的含量明显升高(P<0.05);热暴露组大鼠NPY mRNA表达水平升高(P<0.05)。与热暴露组比较,枸杞多糖干预组大鼠的血浆HSP70含量升高(P<0.05),NPY mRNA表达水平降低(P<0.05)。3组大鼠脾脏、胸腺和下丘脑的器官相对重量无明显变化(P>0.05)。结论枸杞多糖可使应激大鼠血浆中热休克蛋白70含量升高,下丘脑NPY mRNA表达下调,因此枸杞多糖对热暴露环境下的机体有保护作用。