细胞黏附分子neuroplastin 65调控脂多糖诱导巨噬细胞极化

目的探究neuroplastin 65(Np65)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)调控巨噬细胞极化的影响及分子机制,拟揭示Np65在炎症中对巨噬细胞极化的作用。方法采用C57BL/6野生型小鼠和相同背景的Np65敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞进行实验。实时荧光定量PCR检测相关基因Nptn、CD80、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6、CD206、CD163、Ym1、Arg1、IL-10、CD14和TLR4表达情况,流式细胞术检测细胞表面分子CD86和CD206的表达水平,Western blot检测p38、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p65、信号传导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、Janus激酶1(Janus kinase 1,JAK1)、JAK2和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)等相关蛋白质的磷酸化变化,免疫共沉淀检测Np65与CD14或TLR4的结合情况,免疫荧光共聚焦分析Np65与CD14或TLR4分子在细胞层面的共定位情况。采用单因素方差分析和配对Student′s t检验进行统计学分析。结果LPS或IL-4单独刺激均可活化巨噬细胞并上调Np65基因表达(P<0.05)。Np65缺失导致巨噬细胞M1型极化标志物CD80、CD86以及细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达显著下调(P<0.01),M2型极化标志物CD206、CD163、Ym1、Arg1和IL-10的mRNA表达显著增加(P<0.05)。免疫共沉淀结果表明Np65与CD14相互结合,同时免疫荧光共聚焦分析显示Np65与CD14有显著的共定位现象。Np65缺失导致M1型细胞中p38、ERK和p65磷酸化水平明显下调,M2型细胞中STAT3磷酸化水平显著上升。结论Np65参与巨噬细胞向M1型极化并抑制M2型极化,其机制是通过影响巨噬细胞极化相关信号通路关键蛋白质磷酸化,调控巨噬细胞在炎症过程中的活化。