臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中检出NDM-1型金属β内酰胺酶基因

目的调查对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌中NDM-1型金属β内酰胺酶基因的存在情况。方法应用改良Hodge试验和EDTA协同试验对2007～2010年本院收集的对碳青霉烯类抗菌剂敏感性降低的肠杆菌和鲍曼不动杆菌进行碳青霉烯酶筛选。PCR法扩增NDM-1基因,并对PCR扩增阳性产物进行DNA测序分析。对NDM-1基因阳性菌株用PCR方法检测armA和rmtB16S rRNA甲基化酶基因,VIM、SPM、IMP和KPC碳青霉烯酶基因以及Ⅰ类整合子。Etests法进行药敏试验。结果 70株肠杆菌中10株Hodge Test和EDTA协同试验阳性,55株鲍曼不动杆菌中6株EDTA协同试验阳性。其中1株臭鼻克雷伯和3株鲍曼不动杆菌PCR扩增出NDM-1型金属β内酰胺酶基因目的片段,经测序比对为NDM-1型基因。其中1株臭鼻克雷伯和1株鲍曼不动杆菌检测出armA型16S rRNA甲基化酶基因,1株鲍曼不动杆菌检测出2000 bp左右的Ⅰ类整合子,未检出除NDM-1型外的其他碳青霉烯酶基因。NDM-1基因阳性菌除对替加环素、多黏菌素B敏感外,对其他检测的抗菌剂均耐药。结论臭鼻克雷伯和鲍曼不动杆菌中存在NDM-1型金属β内酰胺酶基因,有的携带armA型16S rRNA甲基化酶基因和Ⅰ类整合子,为该地区首次报道。

清开灵注射液提取物及清开灵注射液与抗生素联合对含blaNDM-1超级细菌的抑菌效果

目的体外初步研究清开灵注射液主成分提取液和清开灵注射液与抗生素联合用药分别对含产新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase1,NDM-1)基因的耐药细菌(blaNDM-1细菌)的抑菌性。方法采用琼脂稀释法和K-B法对清开灵注射液主成分板蓝根、金银花、栀子、黄芩苷4种药物提取液和清开灵注射液与抗生素联合用药分别对耐药超级细菌进行抑菌实验。并测定各提取液的最小抑菌浓度(MIC)值。结果清开灵主成分提取液对含blaNDM-1基因的耐药细菌均有不同程度的抑制效果,其中以黄芩苷为最好,对含blaNDM-1基因的耐药菌不动杆菌属/乙酸钙不动杆菌(WD)、鲍曼不动杆菌(WX)、嗜麦芽寡养单胞菌(WJ)和大肠杆菌pGEX-4T-NDM-1/DH5α(GST-NDM-1)的MIC分别为0.015、0.020、0.005、>0.020g/mL,而各提取液的MIC值的大小依次为黄芩苷、金银花、栀子、板蓝根;清开灵注射液与抗生素联合用药后,对含blaNDM-1基因多重耐药菌的抑菌效果非常明显,大大提高了各类抗生素单独用药的抑菌能力,其中以与青霉素类(青霉素G、美洛西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦)效果最好,抑菌效果提高10倍左右,其他抗生素类药物抑菌效果都有不同程度的提高。结论清开灵注射液主成分提取液和清开灵注射液与抗生素联合用药对含blaNDM-1耐药基因细菌都有很好的抑菌效果,此研究为药物开发及对blaNDM-1超级耐药细菌的用药和治疗提供了理论依据。

NDM-1阳性细菌实时荧光LAMP方法的建立及应用

目的建立一种实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法快速检测新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)阳性细菌。方法根据NDM-1基因序列设计4套引物并进行优化,对LAMP反应中的荧光染料SYTO-9浓度进行优化,同时考察该方法的检出限和特异性。利用本方法检测72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌。结果本研究建立的实时荧光LAMP方法,其荧光染料SYTO-9的最佳浓度为4μmol/L;63℃恒温扩增35 min可检出101拷贝/μL的标准阳性模板;特异性较好;对72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌检出的阳性率为16.7%(12/72),12株NDM-1阳性细菌经测序验证,准确率为100%。结论本研究建立的检测NDM-1阳性细菌的实时荧光LAMP方法具有快速、操作简便、特异性好、敏感性高、准确、可靠等优点,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合临床NDM-1阳性细菌的快速检测。

细菌耐药性——21世纪全球关注的热点

抗生素的发展史就是一部人与细菌的战斗史。超级细菌就是指对大多数临床应用的抗生素具有耐药性的细菌。目前临床遭遇的超级细菌一般指的就是ESKAPE。这6个字母分别代表了6种著名的耐药菌——耐万古霉素肠球菌，耐甲氧西林的金葡菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠杆菌。