新生SD大鼠心房肌细胞的原代培养及改良

目的:探讨新生SD大鼠心房肌细胞的原代培养及鉴定,并对其中部分步骤进行改良。方法:采用出生1~3 d的SD乳鼠,运用“两步法”提取心房肌细胞,利用心房肌细胞与成纤维细胞贴壁时间不同和Brd U能抑制成纤维细胞繁殖进行心房肌细胞纯化,并运用双色免疫荧光进行鉴定。结果:36 h后镜下可见细胞已经贴壁,并可见少数细胞出现自发搏动,72 h后细胞铺满瓶底90%,经双色免疫荧光鉴定超过95%为心房肌细胞。结论:“两步法”可缩短胰酶消化时间,Ⅱ型胶原酶+BSA联合消化可以更有效地培养出原代心房肌细胞。

环境噪音对新生大鼠身长体质量及学习记忆的影响

目的研究环境噪音对新生大鼠身长体质量及学习记忆的影响。方法选用7 d SD大鼠16只,分为高噪音组和对照组,每组8只,高噪音组的平均噪音为90 db(A)、对照组50 db(A)。分别在P10、P15、P20时进行身长、体质量的测量,P20时利用Morris水迷宫观察学习记忆功能、ELISA检测生长激素,RT-PCR、Western blot观察突触素表达。结果高噪音组身长、体质量低于同年龄对照组大鼠[身长(cm):P10(9.54±0.1)vs(9.98±0.1),P15(10.24±0.1)vs(10.79±0.1),P20(10.59±0.1)vs(11.68±0.1);体质量(g):P10(14.33±0.02)vs(14.51±0.02),P15(15.31±0.02)vs(15.68±0.02),P20(16.63±0.02)vs(16.76±0.02),P<0.05];与对照组比较,高噪音组学习能力下降,生长激素、突触素(synaptophysin,SYP)mRNA、SYP表达水平低于同年龄对照组大鼠[生长激素(pg/ml):(299.7±4.9)vs(504.9±13.14),SYP mRNA:(0.182±0.008)vs(1.056±0.011),SYP:(0.168±0.007)vs(0.432±0.025),P<0.05]。结论高噪音环境下新生SD大鼠的身长、体质量增长缓慢,学习记忆能力下降。

TGF—β1对新生缺氧缺血性脑损伤大鼠的影响

目的探讨TGF-β1对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的保护作用。方法95只新生不分性别的7日龄SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、干预组（盐水组及治疗组），模型建立成功后2小时，干预组大鼠腹腔注入10ng的盐水或TGF-β1，用免疫组织化学方法观察建立模型后2小时及给药后24小时脑组织海马CA1区锥体细胞凋亡的情况和Caspase-3表达的变化。结果建模后2小时模型组与正常对照组和假手术组比较，脑海马CA1区锥体细胞凋亡明显增加（U1=11．58、U2=11．50．均P〈0．01），Caspase-3表达增强（U1=3．49、U2=5．31，均P〈0．01）；给药后24小时模型纽与正常对照组和假手术组比较，脑海马CA1区锥体细胞凋亡明显增强（U1=14．56、U2=14．65，均P〈0．01），Caspase-3表达增强（U1=4．95、U2=5．91，均P〈0．01）；治疗组与模型组和盐水干预组比较，脑海马CA1区锥体细胞凋亡明显减轻（U1=11．39、U2=9．19，均P〈0．01），Caspase-3表达减少（U1=3．34、U2=2．83，均P〈0．01）。结论脑缺氧缺血后应用TGF-β1具有明显的保护作用，TGF-β1可显著减少新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区锥体细胞的凋亡，TGF-β1保护神经元、减轻凋亡可能是通过减少凋亡相关蛋白Caspase-3的表达起作用的。

苦马豆素诱导新生SD大鼠大脑皮质神经细胞凋亡

为阐明苦马豆素(SW)对新生SD大鼠大脑皮质神经细胞凋亡的影响,利用新生SD大鼠大脑皮质神经细胞体外原代培养模型,采用倒置相差显微镜、扫描电子显微镜及荧光显微镜观察SW对神经细胞的形态学损伤,运用流式细胞仪检测神经细胞凋亡率。结果显示,与对照组比较,各试验组神经细胞密度降低,神经网络减少且部分断裂;细胞表面粗糙,可见大量突起的小泡;细胞核出现浓缩、碎裂及新月形变化;随攻毒剂量的增加,神经细胞凋亡率呈明显上升趋势,与对照组相比,差异显著(P<0.05)。结果表明,SW能诱导新生SD大鼠大脑皮质神经细胞发生凋亡,这可能是SW导致动物神经毒性损伤的作用机制之一。

SD大鼠的繁殖性能及子代生长发育情况

目的对浙江省医学科学院实验室已有生殖毒性资料进行统计分析,以研究SD大鼠繁殖性能特征,分析仔鼠在断乳前的生长发育情况,并比较雌雄仔鼠生长发育的差异。方法对已有历史数据即8个批次两代繁殖毒性试验对照组数据进行统计分析。观察终点包括受孕情况、产仔情况、窝重、窝大小、断乳前仔鼠体重,采用excel软件对相关数据进行统计学分析。结果 SD大鼠妊娠周期为22～25 d,交配行为集中分布在第1个动情周期。交配成功率为94.27%（87.50%～100.00%）,受孕率为92.19%（87.50%～100.00%）,活产率为98.81%（95.24%～100.00%）,出生存活率为94.67%（87.78%～99.14%）,哺育成活率为95.85%（89.74～98.82%）。出生0、4、7、14、21 d仔鼠平均体重分别为（6.54±0.64）g、（10.66±1.72）g、（16.74±2.42）g、（32.93±5.28）g、（51.64±6.59）g。其中雌性仔鼠的平均体重分别为（6.40±0.58）g、（10.48±1.62）g、（16.47±2.32）g、（32.41±4.02）g、（50.72±6.49）g,雄性仔鼠的平均体重分别为（6.68±0.70）g、（10.86±1.84）g、（17.05±2.55）g、（33.05±4.37）g、（52.59±7.05）g;两者差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SD大鼠各项繁殖指数均较高,适合用于开展生殖毒性试验。研究发现,哺乳期雌雄仔鼠体重已存在明显的差异,分别将雌雄仔鼠体重等相关参数进行统计分析,能更好地反映大鼠生殖毒性研究结果。

MiR-15b及血管内皮生长因子在新生大鼠新型支气管肺发育不良发病机制中的作用

目的探讨miR-15b及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在大鼠新型支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)发病机制中的作用。方法将100只新生SD大鼠随机分为BPD组和对照组各50只,BPD组置于60%氧气浓度的氧舱中,对照组置于常压空气中,分别于生后第1、7、14、21天观察肺组织形态学变化,并测量辐射状肺泡计数(radial alveolar counts,RAC)、肺泡间隔厚度(alveolar septal thickness,AST);实时定量PCR检测miR-15b的表达,Elisa检测肺组织中VEGF表达水平。结果随着氧气暴露时间的延长,BPD组出现肺泡数目减少、逐渐失去正常肺泡结构、肺泡间隔明显增宽等表现。BPD组与对照组相比,第7、14、21天RAC值[(6.19±0.29)个比(6.86±0.92)个、(5.35±0.67)个比(9.75±0.34)个、(3.96±0.45)个比(10.04±0.52)个]均明显降低(P<0.05);BPD组与对照组相比,第7、14、21天AST值[(6.87±0.41)μm比(6.43±0.31)μm、(8.94±0.25)μm比(5.36±0.26)μm、(9.61±0.30)μm比(4.55±0.32)μm]均明显升高(P<0.05);BPD组与对照组相比,在第7、14、21天miR-15b表达水平[(1.12±0.11)比(0.84±0.09)、(1.33±0.09)比(0.73±0.07)、(1.66±0.15)比(0.45±0.10)]均明显升高(P<0.05);BPD组与对照组相比,第7、14、21天VEGF浓度[(10.89±1.67)pg/ml比(23.86±4.38)pg/ml、(8.75±1.28)pg/ml比(53.94±3.49)pg/ml、(4.66±1.12)pg/ml比(70.37±3.10)pg/ml]均明显降低(P<0.05)。结论miR-15b和VEGF共同参与了大鼠新型BPD的发生及发展。