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6株鸽源新城疫病毒广东分离株F、HN基因的克隆及遗传进化分析
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作者 云骜 张思远 +2 位作者 成子强 林举攀 杨家兴 《中国家禽》 北大核心 2024年第2期106-112,共7页
为研究广东省鸽源新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,试验于2021—2022年从广东6家疑似感染NDV的鸽场采集病鸽临床样品,进行RT-PCR诊断、病毒分离鉴定和动物回归试验,并对分离毒株进行生物学毒力测定以及F基因、HN基因的同源性和遗传进化... 为研究广东省鸽源新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,试验于2021—2022年从广东6家疑似感染NDV的鸽场采集病鸽临床样品,进行RT-PCR诊断、病毒分离鉴定和动物回归试验,并对分离毒株进行生物学毒力测定以及F基因、HN基因的同源性和遗传进化分析。结果显示:共分离到6株鸽源NDV,对幼鸽进行分组攻毒14 d后,发病率均为100%,死亡率为60%~80%;6株毒株的F蛋白裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117/112R-R-R-K-R-F117,具有NDV强毒株的典型分子特征,和分离毒株ICPI的测定结果共同表明6株毒株均为强毒株;6株毒株均为NDV的ClassⅡ基因Ⅵ.2.1.1.2.2型;与传统疫苗株La Sota的同源性较低,且F、HN蛋白氨基酸出现多处位点变异。研究表明,广东省鸽源NDV流行以Class Ⅱ基因Ⅵ.2.1.1.2.2型为主,常用的疫苗株La Sota可能对广东地区流行的鸽源NDV保护效果不佳。 展开更多
关键词 鸽源新城疫病毒 F基因 hn基因 遗传进化分析
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Phylogenetic Analysis of HN Gene of Eight Pigeon NDV Isolates in Guangxi
2
作者 Lu Bingxia Liang Jiaxing +10 位作者 Duan Qunpeng Chen Zhongwei Jiang Dongfu Lu Jingzhuan Zhou Yingning Bi Bingfen He Ying Qin Yibin Li Bin Su Qianlian Zhao Wu 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2018年第2期136-138,共3页
[Objective] The paper was to provide a basis for scientific prevention and control of pigeon Newcastle disease(ND).[Method] The HN gene of eight pigeon NDV strains isolated from different pigeon farms in Guangxi wer... [Objective] The paper was to provide a basis for scientific prevention and control of pigeon Newcastle disease(ND).[Method] The HN gene of eight pigeon NDV strains isolated from different pigeon farms in Guangxi were amplified by RT-PCR,sequenced and analyzed.The molecular evolution characteristics of HN gene of pigeon NDV isolates in Guangxi was discussed.[Result] The nucleotide sequence length of HN gene of the eight NDV isolates was 1 716 bp,encoding 571 amino acids.They belonged to virulent group C,and the gene length characteristic of HN gene accorded with virulent strain.Analysis of nucleotide homologies indicated that the eight NDV isolates shared higher homology with genotype VIb,ranging from 90.4% to 99.5%.Phylogenetic tree analysis demonstrated that the genetic relationship between the eight NDV strains in Gangxi and the NDV isolates from Guangxi,Guangdong,Jilin,Liaoning,Yunnan and Heilongjiang during 2011 and 2013 was close.They were located in the same cladogram branch.[Conclusion] We assume that the eight pigeon NDV isolates in Guangxi all belong to the gene class II genotype VI b NDV. 展开更多
关键词 PIGEON newcastle disease virus (NDV) hn gene Phylogenetic analysis
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Epitope variation in the Newcastle disease virus HN gene under antibody immune selective pressure in cell culture 被引量:2
3
作者 GONG YanYan CUI ZhiZhong 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2011年第5期474-479,共6页
The influence of antibody immune selective pressure on Newcastle disease virus (NDV) HN and F gene mutations was studied in cell cultures.NDV field strain TZ060107 was inoculated into chicken embryo fibroblast cells a... The influence of antibody immune selective pressure on Newcastle disease virus (NDV) HN and F gene mutations was studied in cell cultures.NDV field strain TZ060107 was inoculated into chicken embryo fibroblast cells and continuously passaged with (group A) or without (group B) anti-NDV monospecific serum.Each group contained three independent passage series.HN and F genes were amplified and sequenced for the 10th,20th,30th,40th and 50th generations of each serial passage,and compared with the original strain.The results demonstrated that increased HN gene mutations were observed in group A with the antibody than in group B without the antibody.The nonsynonymous (NS) to synonymous (S) mutations ratio was 6 for group A,significantly higher than 3.4 in group B.In group A with the antibody,there were five stable NS mutations in HN gene,three of which (related to aa#353,521 and 568) were related to known epitopes.There were two stable NS mutations in F gene in group A,but no stable NS mutations in group B.The NS/S ratios of F gene were less than 2.5 for both groups A and B.Our results suggested that the antibody strongly influenced HN gene mutations,while the F gene was less influenced by the same antibody. 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 细胞培养 hn基因 选择压力 抗体 抗原表位 免疫 基因突变
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新城疫病毒HN和F基因遗传变异相关性的研究 被引量:39
4
作者 秦卓明 马保臣 +4 位作者 何叶峰 王友令 崔治中 徐怀英 袁小远 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期227-232,共6页
选取国内1999-2005年发生的NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆测序,结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的NDV序列,利用DNAStar软件,对其不同毒株的F或HN基因片段... 选取国内1999-2005年发生的NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆测序,结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的NDV序列,利用DNAStar软件,对其不同毒株的F或HN基因片段和全长、F和HN基因全长分别进行遗传变异的研究,利用统计学软件SPSS8.0进行同源性相关分析。结果表明:不同NDV毒株F或HN基因片段与其全长之间,核甘酸r≥0.973,氨基酸:0.911≤r≤0.968,遗传变异高度相关,但F与HN基因全长之间核甘酸的遗传变异呈现弱相关(r=0.312)。国内NDV野毒株之间HN核甘酸高度同源(同源率97%以上),而与LaSota同源率仅为79.2%-80.7%,且显示出明显的地域性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 hn基因 同源性 遗传变异 相关性
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新城疫不同毒株交叉鸡胚中和指数及其与F和HN基因变异的相关性 被引量:13
5
作者 秦卓明 徐怀英 +4 位作者 欧阳文军 王友令 王莉莉 袁小远 谭雷涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期226-233,共8页
选取13株国内2001~2004年分离的新城疫流行病毒(Newcastle disease virus,NDV),经蚀斑纯化,克隆其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(HN)基因,结合疫苗株La Sota、Clone30和国内标准强毒株F_(48)E_9等的基因序列,进行遗传变异分析。利用... 选取13株国内2001~2004年分离的新城疫流行病毒(Newcastle disease virus,NDV),经蚀斑纯化,克隆其融合蛋白(F)和血凝素.神经氨酸酶(HN)基因,结合疫苗株La Sota、Clone30和国内标准强毒株F_(48)E_9等的基因序列,进行遗传变异分析。利用纯化的病毒制备特异阳性血清,进行鸡胚交叉中和试验,确定不同NDV毒株之间的抗原相关性,并与NDV不同毒株之间的HN和F基因核苷酸(氨基酸)同源性进行相关比较。结果表明:病毒中和指数与HN基因的核苷酸(氨基酸)同源性显著相关(P<0.01,r=0.35),与F基因呈弱相关(P<0.05,r=0.20),而与F基因前374bp的核甘酸同源性不相关。这表明,NDV的分子变异已经对NDV的抗原性变异产生了影响,研制新型的疫苗成为必然。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 hn基因 抗原性 相关性
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新城疫病毒F_(48)E_8株 HN基因在杆状病毒系统中表达 被引量:10
6
作者 李太元 殷震 +2 位作者 金宁一 丁壮 王兴龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期334-336,共3页
目的 采用新型杆状病毒表达系统(Bac to Bac系统)在昆虫细胞Sf-9中进行新城疫病毒F48 E8株HN基因表达。方法NDV F48 E8株 HN基因插入到转座载体 pFast Bac Ⅰ,构建重组转座载体 pFast HN,转化到感受态细胞 DH10后,将目的基因转座到穿梭... 目的 采用新型杆状病毒表达系统(Bac to Bac系统)在昆虫细胞Sf-9中进行新城疫病毒F48 E8株HN基因表达。方法NDV F48 E8株 HN基因插入到转座载体 pFast Bac Ⅰ,构建重组转座载体 pFast HN,转化到感受态细胞 DH10后,将目的基因转座到穿梭载体Bacmid中,经筛选获得重组Bacmid HN转染到Sf-9昆虫细胞,并进行检测。结果 表达产物经SDS-PAGE、Westem blot检测获得蛋白特异带,相对分子质量约63000。结论NDVF48E8株HN基因能通过新型杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf-9中进行表达,表达量约为细胞总蛋白的10%。 展开更多
关键词 新城疫病毒F48E8株 hn基因 杆状病毒系统 表达
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新城疫病毒HN基因的遗传变异与HI相关性的研究 被引量:15
7
作者 秦卓明 王友令 +4 位作者 马保臣 欧阳文军 贾强 袁小远 崔治中 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期379-384,共6页
选取国内1999~2004年分离的新城疫野毒10株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆和测序,结合在GenBank中发表的LaSota、F48E9和Clone30等参考序列,对其氨基酸序列进行遗传变异分析,绘制系统... 选取国内1999~2004年分离的新城疫野毒10株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆和测序,结合在GenBank中发表的LaSota、F48E9和Clone30等参考序列,对其氨基酸序列进行遗传变异分析,绘制系统发育树。利用SPF鸡在隔离器中分别制备上述NDV毒株的单因子阳性血清,进行血凝抑制(HI)交叉试验,计算NDV不同株之间的HI相关系数(r)。利用统计学软件SPSS8.0对NDV不同株之间的HN氨基酸同源率和HI相关系数(r)进行相关比较。结果表明:NDV野毒间氨基酸高度同源,同源性为96.5%~99.8%,而与LaSota、F48E9和Clone30同源率仅为87.4%~89.9%;所有野毒均缺乏1个潜在的糖基化位点;HN基因的氨基酸同源性与HI相关系数显著相关(P〈0.01,r=0.55)。 展开更多
关键词 新城疫病毒 hn基因 氨基酸同源性 HI 相关性
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鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究 被引量:14
8
作者 曹殿军 刘惠莉 +3 位作者 王莉林 闵平 张莹 卢景良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期61-64,共4页
利用重组表达质粒HN-PEFL-29与鸡痘病毒FP9共转染鸡胚成纤维细胞,经蚀斑筛选,结合Southern杂交,获得含有外源HN基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经4次传代,细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合We... 利用重组表达质粒HN-PEFL-29与鸡痘病毒FP9共转染鸡胚成纤维细胞,经蚀斑筛选,结合Southern杂交,获得含有外源HN基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经4次传代,细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Western印迹表明该重组子表达产物主要位于细胞膜上,以糖基化(74kD)和非糖基化(68kD)2种形式存在,表达产物具有类似于天然NDVHN蛋白的红细胞吸附活性及神经氨酸酶活性,且这2种活性均可被NDVHN特异性单抗所抑制。对该表达产物的免疫活性研究表明:用重组病毒免疫4周龄SPF鸡的ELISA抗体水平和血凝抑制效价均高于FPV接种组,但低于LaSota弱毒活疫苗接种组。以NDV强毒株F48E9攻毒发现:接种重组病毒106pfu/只时,保护力可达80%,而104pfu/只时,保护率仅为60%,这表明该重组病毒对雏鸡具有一定的保护作用,且该保护作用与接种剂量有一定的相关性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 hn基因 重组禽痘病毒
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新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建 被引量:9
9
作者 仲大莲 余为一 +2 位作者 刘兢 李向明 郭霄峰 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期34-37,共4页
应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3... 应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3中 ,经酶切和测序鉴定 ,表明构建的重组质粒含有 NDV-HN基因片段。 展开更多
关键词 新城疫病毒 hn基因 免疫 真核表达重组质粒 构建 NDV 禽病
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中国水禽新城疫病毒F和HN基因的变异趋势 被引量:6
10
作者 徐怀英 秦卓明 +5 位作者 王友令 欧阳文军 谭雷涛 何叶峰 金维江 袁小远 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期394-401,共8页
选取中国1996-2005年的8株鹅、鸭等水禽NDV流行株,克隆其融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,参考GenBank中具有F和HN核苷酸全长的16株国内外NDV代表株、16株国内水禽流行株以及12株只具有F基因的水禽毒株序列,参照传统F基因分型方... 选取中国1996-2005年的8株鹅、鸭等水禽NDV流行株,克隆其融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,参考GenBank中具有F和HN核苷酸全长的16株国内外NDV代表株、16株国内水禽流行株以及12株只具有F基因的水禽毒株序列,参照传统F基因分型方法,分别对F和HN基因进行分型,同时进行相关比较、核苷酸和氨基酸同源性以及系统发育分析。结果表明:16株国内外代表株F和HN基因分型基本一致,但24株水禽NDV流行株中只有15株相同,符合率为62.5%,不同占37.5%(9/24)。系统发育和同源比较发现:水禽NDV流行株HN基因高度同源,同属Ⅶ型,而F基因则分属不同的基因型。通过对24株NDVF和HN基因氨基酸全长以及进行F基因分型的F基因47-420位核苷酸的同源性相关性比较证实:F基因前47-420位核苷酸的遗传变异与F基因氨基酸全长变异密切相关,r=0.916,但与HN基因的氨基酸变异不相关,显示出NDV在演变过程中F和HN基因具有相对的独立性。水禽NDV是家禽NDV的重要储存宿主,应高度重视水禽NDV的变异。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 hn基因 同源性 遗传变异 相关性
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pVVP3和pVHN核酸疫苗的构建、表达及对肿瘤细胞的作用 被引量:8
11
作者 米志强 金宁一 +4 位作者 龚伟 薛立娟 连海 解丽华 李萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期704-708,共5页
用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性... 用pVAX1载体构建抗肿瘤核酸疫苗 .将鸡贫血病病毒 (CAV)的VP3基因和鸡新城疫病毒(NDV)HN基因插入载体pVAX1的多克隆位点 ,构建了 2个重组基因疫苗pVVP3和pVHN .转染OS732细胞 ,Western印迹及血凝试验检测HN基因表达状况及表达产物的活性 .RT PCR、DNALadder、TUNNEL染色检测VP3基因的表达及表达产物诱导OS732细胞凋亡作用 .酶切鉴定证实成功地构建了两个核酸疫苗 ,并能在真核细胞内表达 .含HN的核酸疫苗pVHN表达后具有血凝活性并致肿瘤细胞表面唾液酸含量降低 (P <0 0 5 ) .pVVP3的转染能导致OS732细胞凋亡 ,凋亡率可达87% .试验结果表明 。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 hn基因 鸡贫血病病毒VP3基因 抗肿瘤
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新城疫病毒F、NP、M和HN基因在昆虫细胞内的共表达 被引量:5
12
作者 闻晓波 闫丽辉 +2 位作者 曹殿军 刘培欣 刘春国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期257-262,共6页
为构建杆状病毒转移载体,通过PCR的方法将F48E9株新城疫病毒F基因上的Stu I位点和NP基因上的Xba I位点进行突变,扩增出全长的F、NP以及F48E9株新城疫病毒M和HN基因片段,将其克隆到pMD18-T载体,再将F、NP、M和HN基因依次亚克隆到杆状病... 为构建杆状病毒转移载体,通过PCR的方法将F48E9株新城疫病毒F基因上的Stu I位点和NP基因上的Xba I位点进行突变,扩增出全长的F、NP以及F48E9株新城疫病毒M和HN基因片段,将其克隆到pMD18-T载体,再将F、NP、M和HN基因依次亚克隆到杆状病毒转移载体pAcAB_4上,F基因和M基因均在p10启动子的操控之下,NP基因和HN基因构建到两个polyhedrin启动子下游,构建重组杆状病毒转移载体pAcAB4_4-F-NP-M-HN。pAcAB_4-F-NP-M-HN与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-F-NP-M-HN。重组杆状病毒感染Sf9细胞,72h后收集细胞和培养上清。Western blot分析显示:M、NP、F和HN蛋白在培养上清中得到了共表达,大小与预期结果一致;感染细胞内只检测到了HN蛋白的表达。这表明M、NP、F和HN蛋白在昆虫细胞内共表达可以自我装配成病毒样颗粒,并且以出芽的方式释放到培养基中。该重组杆状病毒的获得为研究新城疫病毒各结构蛋白之间的相互作用和确定病毒粒子出芽的驱动力等方面奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 杆状病毒 转移载体 表达
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新城疫病毒F_(48)E_8株HN基因的克隆和序列分析及与国外NDV HN基因的同源性比较 被引量:3
13
作者 李太元 金宁一 +5 位作者 丁壮 王兴龙 金扩世 吕杰 米志强 殷震 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期68-71,共4页
目的 克隆NDV F48E8株HN基因,与国外NDV HN基因进行比较分析。方法 提取 RNA,应用 RT-PCR一次性扩增出NDV F48E8株的全长HN基因,将该HN基因插入pKS(-)后进行克隆并测序。结果 NDV F... 目的 克隆NDV F48E8株HN基因,与国外NDV HN基因进行比较分析。方法 提取 RNA,应用 RT-PCR一次性扩增出NDV F48E8株的全长HN基因,将该HN基因插入pKS(-)后进行克隆并测序。结果 NDV F48E8株的HN基因核苷酸长度为1713bp,编码571个氨基酸,有5个糖基化位点,12个极保守的半胱氨酸残基,与 国外发表的NDV序列相符。结论NDVF18E8株HN蛋白基因与国外发表的NDV HN蛋白基因核苷酸同源性在 83.3%~89.2%之间,推导的氨基酸同源性在87.6%-91.1%之间。 展开更多
关键词 新城疫病毒 hn蛋白基因 RT-PCR 同源性 克隆 序列分析
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秦岭野鸟源新城疫病毒致病性与F、HN基因分子特征分析 被引量:5
14
作者 张渭东 王丹阳 +11 位作者 唐文雅 王兴龙 姜振国 陈胜利 幕国辉 刘海金 贺生芳 付向晶 郝华芳 刘阳坤 杜恩岐 杨增岐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期152-158,共7页
为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVP... 为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVPI分别为60.0~76.8h、0.900~1.261、0.41~0.81;对F基因(47~420bp)进行遗传进化分析,5株分离株均属于基因VIb型,F蛋白裂解位点为112 RRQKRF117;HN基因氨基酸相似性为99.5%~99.8%,与鸽源基因VI型NDV相似性为91.4%~98.0%,与LaSota、F48E9相似性分别为87.1%~87.4%、89.0%~89.3%。上述结果表明,基因VIb型NDV在秦岭地区健康野生鸟类中流行,可能源于鸽源NDV,并具有强毒力的分子特征,但对鸡的表现为中等致病力,说明野鸟NDV具有独特的分子特征和致病性。 展开更多
关键词 秦岭野鸟 新城疫病毒 F基因 hn基因 遗传进化分析
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麻鸡新城疫病毒SX-1株F和HN基因在真核细胞中共表达研究 被引量:7
15
作者 李红丽 詹丽娥 +3 位作者 张伟业 唐娟 陆冰洋 王彩先 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期47-50,共4页
以山西省农业科学院畜牧兽医研究所预防兽医研究室克隆的pG-F和pG-HN质粒为模板,PCR扩增麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因,并以由15个柔性氨基酸构成的柔性短肽作为Linker将F及HN基因片段体外连接,插入pCI-neo真核表达载体,构建麻鸡... 以山西省农业科学院畜牧兽医研究所预防兽医研究室克隆的pG-F和pG-HN质粒为模板,PCR扩增麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因,并以由15个柔性氨基酸构成的柔性短肽作为Linker将F及HN基因片段体外连接,插入pCI-neo真核表达载体,构建麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因共表达载体pCI-F-HN,并在Vero细胞中转染表达,进行间接免疫荧光检测。结果显示,麻鸡新城疫病毒SX-1株F-HN组合基因在Vero细胞中得到较高水平的表达,在荧光显微镜下能够观察到较强的荧光,说明F-HN组合蛋白具有良好的反应原性。为下一步研究高效亚单位基因工程苗奠定基础。 展开更多
关键词 麻鸡新城疫病毒 SX-1株 F-hn基因 共表达
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新城疫病毒四平株HN蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:5
16
作者 丁壮 金宁一 +4 位作者 王兴龙 金扩世 罗坤 王宏伟 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第2期102-105,共4页
新城疫病毒 (NDV)四平株在鸡胚增殖后纯化 ,提取RNA ,然后利用特异性引物 ,经RT_PCR一次性扩增出了NDV四平株的全长HN基因。将该HN基因插入pKS(_)后测序。序列分析表明 ,该HN基因核苷酸长度为 1 742bp ,编码 5 71个氨基酸 ,序列中有 5... 新城疫病毒 (NDV)四平株在鸡胚增殖后纯化 ,提取RNA ,然后利用特异性引物 ,经RT_PCR一次性扩增出了NDV四平株的全长HN基因。将该HN基因插入pKS(_)后测序。序列分析表明 ,该HN基因核苷酸长度为 1 742bp ,编码 5 71个氨基酸 ,序列中有 5个糖基化位点 ,1 2个半胱氨酸残基。同源性分析表明 ,四平株HN基因与目前国外发表的其他NDVHN基因相比 ,核苷酸序列同源性在 83.4%_89.2 %之间 ,推导的氨基酸序列同源性在 87.6 %_91 .1 %之间。 展开更多
关键词 新城疫病毒 hn蛋白基因 序列分析 克隆
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新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备 被引量:6
17
作者 于杨 崔佳莹 +5 位作者 丁晴微 崔鹏飞 李印 邓国华 任涛 陈化兰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期94-97,共4页
为制备新城疫病毒HN蛋白的单克隆抗体,本研究采用新城疫病毒CK/AH/100/2010作为免疫原,免疫6~8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后取脾细胞与SP2/0融合,用血凝抑制(HI)方法检测筛选,具有HI活性的单抗有6株:PX1-PX6。6株单抗与AIV、EDS等其它具... 为制备新城疫病毒HN蛋白的单克隆抗体,本研究采用新城疫病毒CK/AH/100/2010作为免疫原,免疫6~8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后取脾细胞与SP2/0融合,用血凝抑制(HI)方法检测筛选,具有HI活性的单抗有6株:PX1-PX6。6株单抗与AIV、EDS等其它具有血凝活性的病毒的交叉血凝抑制试验结果表明,6株单抗具有良好的特异性。间接免疫荧光试验结果表明,PX1、PX3可与新城疫病毒CK/GD/263/2010HN抗原发生特异性反应,而其它单抗不反应。 展开更多
关键词 新城疫病毒 单克隆抗体 hn基因 HI
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新城疫病毒HN基因与鸡贫血病病毒VP3基因对小鼠黑色素瘤的联合抑制效应 被引量:3
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作者 金宁一 米志强 +4 位作者 龚伟 薛立娟 连海 李萍 解丽华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期127-129,共3页
在 C57BL/6小鼠的左后肢肌肉注射脂质体包裹的含新城疫病毒 HN基因和鸡贫血病病毒 VP3基因的重组质粒。 2周后 ,在左后肢相同部位皮下接种 B16黑色素瘤细胞 2× 10 5个 ,致瘤 2、10 d后 ,分别肌注相同的重组质粒 .通过细胞毒 T淋巴... 在 C57BL/6小鼠的左后肢肌肉注射脂质体包裹的含新城疫病毒 HN基因和鸡贫血病病毒 VP3基因的重组质粒。 2周后 ,在左后肢相同部位皮下接种 B16黑色素瘤细胞 2× 10 5个 ,致瘤 2、10 d后 ,分别肌注相同的重组质粒 .通过细胞毒 T淋巴细胞和自然杀伤细胞 (NK)以及小鼠血清中唾液酸含量的测定 ,探讨新城疫病毒抑瘤的机制以及新城疫病毒 HN基因与鸡贫血病病毒 VP3基因的协同抑瘤效应。结果表明 ,与对照组相比 ,注射含 HN基因和 VP3基因的重组质粒可使荷瘤鼠的肿瘤体积缩小。用新城疫病毒或含新城疫病毒 HN基因重组质粒治疗的荷瘤鼠 ,NK活性、CTL 活性明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,血清中唾液酸含量低于对照组 ,但差异均不显著 (P >0 .0 5 )。从而证明新城疫病毒 HN基因能够增强小鼠对移植瘤的免疫杀伤力 ,是新城疫病毒发挥抗肿瘤作用的主要功能性基因。 展开更多
关键词 联合抑制效应 新城疫病毒 鸡贫血病病毒 hn基因 VP3基因 黑色素瘤 基因治疗 细胞免疫应答
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表达鸡新城疫病毒F、HN基因和传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒的构建及其特性研究 被引量:3
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作者 孙惠玲 王云峰 +6 位作者 苗得园 张培君 智海东 徐灵龙 王玫 童光志 汪明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期931-939,共9页
利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区,其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下,大肠杆菌... 利用同源重组将新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因以及报告基因LacZ插入鸡痘病毒(FPV)的017株的复制非必需区,其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ是在早晚期启动子LP2EP2的控制下,大肠杆菌报告基因LacZ在晚期启动子P11的控制下。经过10轮蓝斑纯化获得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及报告基因LacZ的重组鸡痘病毒,称为rFPV-F/HN/gB/LacZ。经PCR方法证明rFPV-F/HN/gB/LacZ基因组中含有NDV的F基因、HN基因和ILTVgB基因;间接免疫荧光试验和Western-blot试验表明NDV的F、HN蛋白和ILTVgB蛋白在rFPV-F/HN/gB/LacZ感染的CEF细胞中获得表达。与亲本毒相比,重组病毒在病毒的复制和致鸡胚成纤维细胞的病变方面无显著不同。这证明了在鸡痘病毒载体的一个复制非必需区可以同时插入多个禽类病原的多个外源基因,为制备多价基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 新城疫病毒 传染性喉气管炎病毒 F基因 hn基因 GB基因
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10株新城疫病毒广西分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析 被引量:9
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作者 刘加波 谢芝勋 +2 位作者 唐小飞 庞耀珊 邓显文 《畜牧与兽医》 北大核心 2005年第7期6-10,共5页
根据基因库(GenBank)新城疫病毒(NDV)的HN基因序列设计了2对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000~2003年暴发新城疫的鸡群中分离的10株NDV毒株的HN基因进行了扩增,扩增产物克隆并测序,拼接出10个NDV广西分离株的HN基因全序列,其序... 根据基因库(GenBank)新城疫病毒(NDV)的HN基因序列设计了2对特异性引物,应用RT-PCR技术对广西在2000~2003年暴发新城疫的鸡群中分离的10株NDV毒株的HN基因进行了扩增,扩增产物克隆并测序,拼接出10个NDV广西分离株的HN基因全序列,其序列全长均为1 713 bp,编码571个氨基酸,均有13个半胱氨酸残基.其中GX8/03有6个糖基化位点,而GX2/00、GX6/02、GX7/02和GX5/00有5个糖基化位点,GX1/00、GX3/00、GX4/00和GX9/03有4个糖基化位点.除GX5/00和GX10/03分离株外,其他8个NDV分离株在HN基因抗原位点Ⅰ发生变异,即347位由谷氨酸(E)被甘氨酸(G)替代,GX8/03分离株在HN基因抗原位点Ⅱ的495位由赖氨酸(K)替代谷氨酸(E).与11株已发表的NDV HN基因全序列相比较,其核苷酸同源性在79.6%~ 97.9%之间,推导的氨基酸同源性在87.2%~98.1%之间. 展开更多
关键词 新城疫病毒 hn蛋白基因 克隆 序列分析
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