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Biological Characterization and Whole Genome Sequencing of a Genotype VII Newcastle Disease Virus Strain
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作者 Sun Hualu Li Xiqing +5 位作者 Bi Yunying Yu Zekun Li Sifei Liu Yang Li Mingyi Cui Xianlan 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2018年第5期300-305,310,共7页
[Objective] The aim of this paper was to study the genotype, pathogenicity and nucleotide difference between Newcastle disease virus(NDV) isolates and traditional NDV vaccine strain(La Sota). [Method] A suspected NDV ... [Objective] The aim of this paper was to study the genotype, pathogenicity and nucleotide difference between Newcastle disease virus(NDV) isolates and traditional NDV vaccine strain(La Sota). [Method] A suspected NDV strain was isolated from a chicken farm. The isolate was preliminarily determined by HA and HI tests. A pair of primers was designed based on the partial sequence of NDV F gene published in GenBank(accession No. JF950510.1). F gene was amplified by RT-PCR, cloned and sequenced. The sequencing result was compared with the F gene sequences published in GenBank, and the phylogenetic tree was constructed to analyze the genotypes. The pathogenicity of the virus was determined by mean death time(MDT) of chicken embryos, intracerebral pathogenicity index(ICPI) of one-day-old chicks and intravenous pathogenicity index(IVPI) of six-week-old chickens, respectively. Based on the NDV genome sequence published in GenBank(accession No. JF950510.1), nine pairs of primers were designed to amplify the genome sequence of the isolate, and its structure was analyzed. [Result] The length of F gene was about 500 bp, and a NDV strain of genotype VII was isolated. The MDT, ICPI and IVPI were 52.8 h, 1.675 and 2.46, respectively, indicating the isolate was a virulent strain. The whole genome sequence analysis results showed that the full genome length of the isolate was 15 192 bp, which had 6 more nu-cleotides than that of La Sota strain, and the homology between the two strains was 82.8%. [Conclusion] A virulent NDV strain of genotype Ⅶ was isolated, with low homology to La Sota strain in nucleotide sequence. 展开更多
关键词 newcastle disease virus(ndv) f gene virulent strain Whole genome
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鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建 被引量:53
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作者 姜永厚 陈奖励 +3 位作者 宋秀龙 童光志 孔宪刚 刘忠贵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期81-84,共4页
利用已克隆到的新城疫D2 6株F基因和鸡IL_2基因 ,经过载体改建 ,将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上 ,经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL_2的重组质粒 。
关键词 新城疫 f基因 鸡IL-2 重组dna疫苗
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鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究 被引量:14
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作者 李楠 孙一敏 赵宝华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期445-450,共6页
根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1·66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核... 根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1·66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为88·1%、84·9%和83·8%。将HeB02株F基因插入真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达质粒pSV-F,通过脂质体转染COS-7细胞,SDS-PAGE分析可见表达的特异蛋白条带;Western blot、ELISA和中和试验检测结果表明:真核表达的蛋白与抗新城疫病毒的抗体发生特异性反应,说明F蛋白具有很好的免疫原性。采用活体电击法以真核表达质粒pSV-F免疫3周龄SPF鸡,剂量为50μg/只,3周后加强免疫1次,5周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的F基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,攻毒前后每周分别以喉拭子进行病毒分离和HI效价测定。结果显示对照组在攻毒前一直没有检测到抗体效价,攻毒后检测效价为3·0log2±1·40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗组和实验组免疫后第2周检测到抗体效价,第5周最高,HI效价分别为8·3log2±1·30和7·2log2±1·23,攻毒1周后HI效价分别达9·8log2±1·55和8·9log2±1·77,极显著高于对照组(P<0·01)。免疫组未分离到新城疫病毒,对照组全部分离到新城疫病毒。表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 展开更多
关键词 新城疫病毒 f基因 克隆和表达 dna疫苗
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真核表达NDV F基因重组质粒的构建及其在CEF细胞中的转染
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作者 刘兆球 姜世金 常维山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期444-446,共3页
通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将... 通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将该重组质粒命名为pcDNANDVZF。将pcDNANDVZF在脂质体作用下转染CEF细胞 ,用间接免疫荧光试验检测 ,结果证明pcDNANDVZF可在CEF细胞中大量表达F蛋白。 展开更多
关键词 真核重组表达质粒 新城疫病毒f基因 转染
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鸡源NDV WF00C株F基因的测序与蛋白特性分析
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作者 胡元庆 路振香 +2 位作者 张训海 金光明 陈会良 《安徽科技学院学报》 2009年第1期9-14,共6页
用鸡源新城疫病毒凤阳分离株WF00C对9-10日龄SPF鸡胚的尿囊腔接种,成功增殖了该病毒,采用一步法RT-PCR技术扩增WF00C病毒的F基因,获得了1条1.7kb的特异性条带。用PCR产物直接测序。测序结果表明,扩增片段大小为1782bp,含有1个1662bp的... 用鸡源新城疫病毒凤阳分离株WF00C对9-10日龄SPF鸡胚的尿囊腔接种,成功增殖了该病毒,采用一步法RT-PCR技术扩增WF00C病毒的F基因,获得了1条1.7kb的特异性条带。用PCR产物直接测序。测序结果表明,扩增片段大小为1782bp,含有1个1662bp的开放性阅读框,编码554个氨基酸。核苷酸同源性分析表明:WF00C株与国内外其他NDV F基因的同源性为84.8%-97.5%,其中与国内标准强毒株F48E9的同源性为87.1%,说明WF00C与国内外的传统毒株有较大变异。与Taiwan95株和J株的同源性为94.1%和97.5%,说明WF00C与Taiwan95株和J株亲缘关系较近,具有较高的相似性。F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112Arg-Arg-Gln-Lys-Arg-Phe117,表明为NDV的强毒株。蛋白疏水性和抗原性分析表明与标准强毒株相比没有太大的变异。 展开更多
关键词 鸡源ndv f基因 序列测定 病毒毒力 同源性分析
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NDV F与ChIL-18融合基因“自杀性”质粒的构建
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作者 刘勤妮 聂奎 《安徽农学通报》 2008年第5期21-24,共4页
根据GeneBank公布的鸡新城疫病毒(NDV)Lasota株F基因和鸡源性白细胞介素18(ChIL-18)基因序列分别设计特异性引物,且在鸡NDV F基因引物上游引入BamHⅠ位点、下游引入SalⅠ位点,在Ch IL-18基因引物上游引入SalⅠ位点、下游引入HindⅢ、Bam... 根据GeneBank公布的鸡新城疫病毒(NDV)Lasota株F基因和鸡源性白细胞介素18(ChIL-18)基因序列分别设计特异性引物,且在鸡NDV F基因引物上游引入BamHⅠ位点、下游引入SalⅠ位点,在Ch IL-18基因引物上游引入SalⅠ位点、下游引入HindⅢ、BamHⅠ位点。以鸡新城疫病毒Lasota株RNA为模板RT-PCR扩增其F基因,将F基因插入pMD18-T的BamHⅠ与SalⅠ位点中。同时扩增上游带有SalⅠ位点、下游带有HindⅢ、BamHⅠ位点的ChIL-18基因,并将其插入到含有F基因的pMD18-T质粒的SalⅠ、HindⅢ位点之间,从而使NDV F基因与ChIL-18基因形成具有一个完整阅读框的融合基因,然后将融合基因片段定向克隆到pSFV单一启动子(CMV)下游,构建成F-ChIL-18融合基因重组"自杀性"质粒pSFV-F-ChIL-18。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒f基因 鸡源性白细胞介素18 甲病毒载体 核酸疫苗
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4株NDV分离株F基因的克隆与序列分析 被引量:7
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作者 沈志强 管宇 +7 位作者 刘吉山 李峰 吴信明 赵蕾 王艳 徐守振 鲍卫超 王辉暖 《动物医学进展》 CSCD 2005年第4期78-83,共6页
对4 株具有一定代表性的NDV(新城疫病毒)分离株的F基因进行RT PCR(反转录聚合酶链反应)扩增和序列分析,根据基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中1 株属于弱毒株,3 株属于强毒株;核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明,3株强毒株与C... 对4 株具有一定代表性的NDV(新城疫病毒)分离株的F基因进行RT PCR(反转录聚合酶链反应)扩增和序列分析,根据基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中1 株属于弱毒株,3 株属于强毒株;核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明,3株强毒株与Clone30 基因核苷酸序列的同源性在83.6%~84.0%之间,与F48 E9典型NDV强毒株同源性在86.5.6%~88.3%之间,推导的氨基酸序列同源性与Clone 30 株在85.9%~87.0%之间,与F48E9典型NDV强毒株在89.1%~91.3%之间;利用MegAlign软件绘制了NDV 的系统发育进化树,结果表明, 3株分离强毒株为Ⅶ基因型,弱毒株为基因Ⅱ型。 展开更多
关键词 序列分析 ndv f基因 分离株 反转录-聚合酶链反应 系统发育进化树 核苷酸序列 克隆 RT-PCR 新城疫病毒 氨基酸序列 强毒株 序列同源性 裂解位点 序列比较 弱毒株 代表性 基因型 推导
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鸡新城疫病毒F基因高效真核表达质粒的构建 被引量:7
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作者 邓明俊 张彦明 +1 位作者 梁荣 段明星 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2003年第2期9-12,共4页
为进一步研究基因疫苗的免疫机制和基因疫苗的免疫效果 ,应用 DNA重组技术 ,根据载体 pc D-NA4 .0 / His Max的多克隆位点设计引物 ,对含有 NDV保护性抗原基因 F的质粒 PCR扩增。将得到的目的片段插入到载体的启动子下游 ,成功得到含有 ... 为进一步研究基因疫苗的免疫机制和基因疫苗的免疫效果 ,应用 DNA重组技术 ,根据载体 pc D-NA4 .0 / His Max的多克隆位点设计引物 ,对含有 NDV保护性抗原基因 F的质粒 PCR扩增。将得到的目的片段插入到载体的启动子下游 ,成功得到含有 NDV F基因的真核表达质粒载体 PC4 F的基因疫苗。 展开更多
关键词 新城疫病毒 f基因 真核表达质粒 基因疫苗 免疫机制 免疫效果
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减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗诱导对新城疫病毒的免疫保护 被引量:9
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作者 方维焕 梁雪芽 李建荣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期527-530,共4页
探讨了以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体传递新城疫病毒 DNA疫苗的安全性、免疫原性和可行性。将含新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株融合蛋白 ( F)基因的真核表达质粒 pc DNA3- F的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 ZJ111株 ( ZJ111/ pc D-NA3- F菌株 ) ,以... 探讨了以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体传递新城疫病毒 DNA疫苗的安全性、免疫原性和可行性。将含新城疫病毒 ( NDV) F4 8E9株融合蛋白 ( F)基因的真核表达质粒 pc DNA3- F的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 ZJ111株 ( ZJ111/ pc D-NA3- F菌株 ) ,以 10 8CFU进行首免 ,2周后二免 ,二免后 4周攻击强毒株 F4 8E9,观察其安全性和免疫原性 ,同时设只含空载体 pc DNA3的 ZJ111/ pc DNA3菌株对照及口服 PBS对照。结果表明 :重组 ZJ111/ pc DNA3- F菌株具有良好的安全性 ,对强毒株攻击的保护率达 6 4 .7%。重组 ZJ111/ pc DNA3- F菌株不仅能诱导雏鸡产生 NDV EL ISA抗体 ,而且诱导产生的法氏囊 B淋巴细胞和胸腺 T淋巴细胞增殖反应显著高于 ZJ111/ pc DNA3对照组。这些结果提示 ,减毒沙门氏菌为载体不仅可直接将 NDV F基因呈递给鸡体细胞进行表达 ,产生抗 NDV的体液免疫 ,而且还可诱导细胞免疫应答。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 dna疫苗 载体 新城疫病毒 免疫保护 免疫原性 安全性
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鸡新城疫病毒分离株F基因的分子特性分析 被引量:2
10
作者 王学艳 王晶钰 +4 位作者 刘红彦 邓小敏 温肖会 姜向阳 罗艳 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第10期1-6,共6页
【目的】对新城疫病毒(NDV)分离毒株进行分子特征分析,了解免疫鸡群发生新城疫的原因。【方法】用非免疫鸡胚从病鸡肺脏中分离新城疫病毒;参考GenBank上发表的NDV的F基因序列设计引物,应用RT-PCR方法对新城疫病毒分离株进行扩增,并构... 【目的】对新城疫病毒(NDV)分离毒株进行分子特征分析,了解免疫鸡群发生新城疫的原因。【方法】用非免疫鸡胚从病鸡肺脏中分离新城疫病毒;参考GenBank上发表的NDV的F基因序列设计引物,应用RT-PCR方法对新城疫病毒分离株进行扩增,并构建克隆载体,对阳性质粒测序后进行F基因核苷酸及推导氨基酸序列分析。【结果】从发病鸡群中分离到6株NDV,分离毒株间的F基因核苷酸和F蛋白氨基酸同源性分别在99.6%-99.9%和99.1%-99.8%;分离毒株与参考毒株的F基因核苷酸和F蛋白氨基酸序列同源性分别在83.2%-87.3%和90.2%-93.8%;分离毒株F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112R-R-Q-K-R-F^117,符合强毒株的分子特征;6个分离株均属NDV基因Ⅶ型。【结论】NDV分离株的F基因已经发生明显变异,与La Sota、Clone-30、V4等常用疫苗株在遗传进化上的亲缘关系较远,这可能是免疫鸡群发生新城疫的重要原因之一。 展开更多
关键词 新城疫病毒 分离鉴定 f基因 RT-PCR 分子特性分析
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2018年广西7种鸟类的新城疫病毒病原学监测和F基因遗传进化分析 被引量:1
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作者 曾婷婷 谢丽基 +7 位作者 谢芝勋 罗思思 李孟 黄娇玲 张民秀 张艳芳 范晴 邓显文 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第12期9-13,共5页
为跟踪监测2018年广西的鸟类携带新城疫病毒(NDV)情况,本试验采集了鹧鸪、山鸡、鹌鹑、珠颈斑鸠、斑鸠、野鸭和鸽子共7种鸟类的咽喉/泄殖腔棉拭子样品共904份,对其进行NDV分离、RT-PCR鉴定和F基因遗传进化分析。结果显示,共获得17株NDV... 为跟踪监测2018年广西的鸟类携带新城疫病毒(NDV)情况,本试验采集了鹧鸪、山鸡、鹌鹑、珠颈斑鸠、斑鸠、野鸭和鸽子共7种鸟类的咽喉/泄殖腔棉拭子样品共904份,对其进行NDV分离、RT-PCR鉴定和F基因遗传进化分析。结果显示,共获得17株NDV,其中鸽源NDV 3份,山鸡源NDV 2份,鹌鹑源NDV 1份,鹧鸪源NDV 2份,斑鸠源NDV 5份,珠颈斑鸠源NDV 4份。17个毒株之间的F基因的核苷酸相似性为71.1%~100%,与弱毒疫苗株LaSota的核苷酸相似性为71.1%~99.8%,与经典强毒F48E9的核苷酸相似性为71.5%~90.2%。遗传进化分析显示,17株NDV包含CLASSⅠ基因1b亚型(2/17),CLASSⅡ基因Ⅰ型(4/17)和CLASSⅡ基因VI型(11/17)3种基因型。11株CLASSⅡ基因VI型NDV中有10株属于VIk亚型,1株属于VIj亚型,与广西地区的鸽源NDV亲缘关系紧密。表明鸟类和养殖鸽群存在NDV互相传播的现象,需要密切跟踪NDV流行分布和致病性变化情况,同时也为NDV的流行传播研究提供了科学参考。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鸟类 病原学监测 f基因进化分析
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鸵鸟源新城疫病毒TN株F基因的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 文明 伍祥龙 +3 位作者 唐源 温贵兰 汪德生 周碧君 《中国兽药杂志》 2007年第12期16-19,共4页
应用PCR技术对1株鸵鸟源新城疫病毒TN株融合蛋白基因(F基因)进行扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定,并与国内外NDV毒株对应序列进行比较分析.结果表明,TN株F基因的长度为1 662 bp,可编码553个氨基酸,其裂解位点的氨基酸序列为11... 应用PCR技术对1株鸵鸟源新城疫病毒TN株融合蛋白基因(F基因)进行扩增,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定,并与国内外NDV毒株对应序列进行比较分析.结果表明,TN株F基因的长度为1 662 bp,可编码553个氨基酸,其裂解位点的氨基酸序列为112G-R-Q-G-R-L117,为1株新城疫弱毒株;与贵州省其他禽源(包括肉鸡、蛋鸡、越南斗鸡、七彩山鸡和鸽子等)毒株间的核苷酸同源性为84.0%~89.6%,氨基酸同源性为87.5%~92.1%;与国内外NDV代表株(Lasota株、B1株、F48E9株、CH2000株和TW2000株)的核苷酸同源性为84.4%~98.6%,氨基酸同源性为88.3%~98.0%.经系统发生树分析,TN株与NDV弱毒株Lasota株和B1株在同一分支上,属于基因II型NDV. 展开更多
关键词 鸵鸟 新城疫病毒 融合蛋白基因 序列分析
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新城疫病毒贵州不同鸡源分离株F基因的克隆与序列分析 被引量:1
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作者 汪德生 伍祥龙 +3 位作者 文明 周碧君 王文亮 温贵兰 《贵州畜牧兽医》 2008年第3期13-16,共4页
应用PCR技术扩增NDV贵州不同鸡源分离株,包括肉鸡源P1株与BY株、蛋鸡源H2株与FW株、七彩山鸡源N98株和越南斗鸡源DQ株的F蛋白基因,将该基因片段分别进行克隆和测序,并与国内外NDV参考株的对应序列进行比较分析。结果表明:6株NDV贵州不... 应用PCR技术扩增NDV贵州不同鸡源分离株,包括肉鸡源P1株与BY株、蛋鸡源H2株与FW株、七彩山鸡源N98株和越南斗鸡源DQ株的F蛋白基因,将该基因片段分别进行克隆和测序,并与国内外NDV参考株的对应序列进行比较分析。结果表明:6株NDV贵州不同鸡源分离株的F基因长度均为1 662 bp,编码553个氨基酸;分离株间核苷酸同源性为86.9%~99.7%,氨基酸同源性为91.0%~99.3%;与国内外NDV代表株(LaSota株、B1株、F48E9株、CH2000株和TW 2000株)的核苷酸同源性为84.0%~98.9%,氨基酸同源性为87.2%~98.6%;经系统发育进化树分析,DQ株、N98株、P1株和H2株为基因VIId型,而BY株和FW株为基因IX型。这些结果提示贵州省不同鸡群间存在相同NDV毒株感染的可能性,不同年份间NDV毒株发生基因型改变,而近年来贵州省流行的ND疫情主要是由NDV基因VII型引起。 展开更多
关键词 新城疫病毒 f基因 序列分析 基因型 贵州
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鹅源新城疫病毒HN基因“自杀性”DNA疫苗的构建及其免疫效果的研究
14
作者 张彦红 樊惠英 +4 位作者 蔡绍鑫 罗开健 辛朝安 廖明 任涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期842-846,共5页
为了探讨鹅源新城疫病毒"自杀性"DNA疫苗的免疫效果,将鹅源新城疫病毒HN基因片段克隆到自杀性DNA疫苗载体pSCA1中,构建了表达HN基因的自杀性DNA疫苗质粒pS-HN。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了HN基因... 为了探讨鹅源新城疫病毒"自杀性"DNA疫苗的免疫效果,将鹅源新城疫病毒HN基因片段克隆到自杀性DNA疫苗载体pSCA1中,构建了表达HN基因的自杀性DNA疫苗质粒pS-HN。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了HN基因在该细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pc-HN)分别免疫鹅,结果表明,在诱导体液、细胞免疫和攻毒保护方面,pS-HN均优于pc-HN,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅源新城疫病毒 HN基因 “自杀性”dna疫苗
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鸡IL-18真核表达质粒与新城疫病毒F基因疫苗联合免疫探讨 被引量:3
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作者 谢安新 尹会方 +4 位作者 温纳相 黄桂菊 赵明秋 郑海华 黄青云 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期82-85,89,共5页
为探讨鸡IL-18基因真核表达质粒pcDNA-chIL-18在新城疫病毒(NDV)F基因疫苗免疫中的作用,克隆了新城疫病毒标准株F48E9的F基因,构建F基因重组真核表达质粒pcDNA-F;将11日龄试验鸡分为4组,每组10只,14日龄一免,28日龄二免,分别肌注pcDNA-F... 为探讨鸡IL-18基因真核表达质粒pcDNA-chIL-18在新城疫病毒(NDV)F基因疫苗免疫中的作用,克隆了新城疫病毒标准株F48E9的F基因,构建F基因重组真核表达质粒pcDNA-F;将11日龄试验鸡分为4组,每组10只,14日龄一免,28日龄二免,分别肌注pcDNA-F、pcDNA-F+pcDNA-chIL-18、新城疫传统疫苗(14日龄NDV弱毒疫苗首免,28日龄NDV油苗二免)、生理盐水,一免疫后第7、14、21、28 d均采血进行ND抗体(ELISA)检测和T淋巴细胞转化(MTT)试验;第29 d均肌注50LD50NDV强毒F48E9株.结果显示:免疫保护效率,生理盐水组0/10,pcDNA-F免疫组3/10,pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组5/10,新城疫传统疫苗免疫组10/10;ND抗体水平,pcDNA-F免疫组与pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组无差异(P>0.05),均显著低于传统疫苗免疫组(P<0.05);T细胞转化水平,pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组明显高于pcDNA-F免疫组(P<0.05),pcDNA-F免疫组与传统疫苗免疫组无差异(P>0.05).试验结果综合显示pcDNA-F免疫试验鸡可产生一定程度的免疫保护;pcDNA-chIL-18对pcD-NA-F具有一定的免疫增强作用. 展开更多
关键词 新城疫病毒 f基因 基因疫苗 白细胞介素18基因
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一株新疆野鸟源新城疫病毒的分离鉴定、F基因克隆及遗传进化分析 被引量:2
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作者 张慧敏 木哈买提江·铁格斯 +10 位作者 史军 吴桂灵 古丽扎提·阿地理 加尔肯 苏战强 冉多良 沙依兰·卡依扎 兰玲 姚刚 刘建华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第9期2755-2760,共6页
为了解新疆野鸟新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染情况,分析其分子特征和基因变异特点,防止新城疫的暴发和蔓延,本试验用9日龄SPF鸡胚进行病毒的分离传代,HA、HI试验和RT-PCR方法对位于"东非—西亚迁徙线"福海县... 为了解新疆野鸟新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染情况,分析其分子特征和基因变异特点,防止新城疫的暴发和蔓延,本试验用9日龄SPF鸡胚进行病毒的分离传代,HA、HI试验和RT-PCR方法对位于"东非—西亚迁徙线"福海县的野鸟进行了NDV检测,分离到1株野鸟源NDV,并命名为NDV/Pintail/CH(XJ)/01/2016。结果表明,该NDV分离株F基因ORF长1 662bp,编码553个氨基酸,F基因碱性裂解位点序列为^(112)G-R-Q-G-R-L^(117),符合弱毒株特征;遗传进化分析显示,NDV/Pintail/CH(XJ)/01/2016与乌克兰鸽源分离株Doneck/3/968、比利时鸭源分离株Simeonovgrad核苷酸同源性均为99.7%,属于NDV ClassⅡ基因Ⅱ型。而上述3株病毒均与疫苗毒La Sota具有较高同源性(99.5%~99.8%)。本研究结果为家禽NDV外流进入自然环境提供了论据。 展开更多
关键词 野鸟 新城疫病毒(ndv) f基因 遗传进化分析
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密码子优化增强新城疫病毒DNA疫苗的表达水平和免疫效果 被引量:1
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作者 曾伟伟 石星明 +7 位作者 高宏博 王玫 黄婷婷 李继松 孙妍 崔红玉 童光志 王云峰 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第2期8-16,共9页
为提高新城疫病毒(Newcastl Disease Virus,NDV)F基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果。按照鸡体内偏嗜性密码子人工合成了NDV F48E9株的F基因optiF,插入到真核表达载体pVAX1中获得pVAX1-optiF。将F48E9株的F基因pVAX1-F与pVAX1-optiF... 为提高新城疫病毒(Newcastl Disease Virus,NDV)F基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果。按照鸡体内偏嗜性密码子人工合成了NDV F48E9株的F基因optiF,插入到真核表达载体pVAX1中获得pVAX1-optiF。将F48E9株的F基因pVAX1-F与pVAX1-optiF分别转染COS-7细胞,72h后间接免疫荧光和Western blot检测细胞中瞬时表达的F蛋白。将质粒pVAX1、pVAX1-F和pVAX1-opti F以200μg/只的剂量分别股四头肌多点注射18只2周龄SPF鸡,2周后加强免疫1次,同时设立PBS对照。二免2周后每组取12只鸡以105EID50的F48E9株NDV强毒进行攻毒,评价这2种DNA疫苗的免疫效果。结果表明,F基因密码子的优化可显著提高NDVDNA疫苗诱导的保护性体液免疫和细胞免疫应答水平,攻毒后所有pVAX1-optiF免疫鸡均获得保护(12/12),而pVAX1-F组保护率只有17%(2/12)。DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。与未经修饰的F基因相比,修饰后的F基因体外瞬时表达水平明显提高。 展开更多
关键词 新城疫病毒(ndv) dna疫苗 密码子优化 f基因 免疫保护
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我国部分地区鸡新城疫病毒流行株遗传变异分析 被引量:4
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作者 陆广富 吴卫东 +4 位作者 张建军 葛兆宏 王建业 王永坤 朱国强 《中国家禽》 北大核心 2010年第13期23-26,共4页
将近年来从不同地区临床病例中分离鉴定的10株鸡新城疫病毒(NDV)流行株,用RT-PCR方法分别扩增出大小为535 bp的F基因重要功能区,并克隆到pGEM-T载体上,经酶切分析结合核苷酸序列测定而确诊。10株分离株核苷酸序列同源性达到81.9%~99.4%... 将近年来从不同地区临床病例中分离鉴定的10株鸡新城疫病毒(NDV)流行株,用RT-PCR方法分别扩增出大小为535 bp的F基因重要功能区,并克隆到pGEM-T载体上,经酶切分析结合核苷酸序列测定而确诊。10株分离株核苷酸序列同源性达到81.9%~99.4%,其中8个分离株F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为:112R-R-Q/R-K/R/R/F117,为NDV强毒株,且具有基因Ⅶ型的典型特征,即在101位和121位氨基酸残基分别为K(赖氨酸)和V(缬氨酸);其余2株病毒F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为:112G-R-Q-G-R-L117,表明它们为NDV弱毒株,在13位和17位氨基酸分别为M(蛋氨酸)和I(异亮氨酸),属于基因Ⅱ型。根据上述测序结果并参照已发表NDV F基因序列绘制出遗传进化树,遗传进化树显示,上述8个强毒株和台湾95年分离株同源性较高,而2个弱毒株与La Sota株同源性较高。 展开更多
关键词 新城疫 腿因 基因Ⅶ型
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2008-2009年部分地区新城疫病毒分离株的进化分析 被引量:3
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作者 尤永君 王延树 +5 位作者 梁武 杨保收 李建丽 邹立宏 王和平 乔健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期85-89,共5页
本研究旨在从分子水平上掌握中国新城疫病毒的变异情况和新城疫的流行规律,对2008-2009年从中国部分省市养殖场分离的9株新城疫病毒毒株,采用RT-PCR方法扩增其F和HN基因,经克隆和测序,对所得序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,9... 本研究旨在从分子水平上掌握中国新城疫病毒的变异情况和新城疫的流行规律,对2008-2009年从中国部分省市养殖场分离的9株新城疫病毒毒株,采用RT-PCR方法扩增其F和HN基因,经克隆和测序,对所得序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,9株分离株有8株为基因Ⅶ型,1株为基因Ⅱ型,F基因开放性阅读框架(ORF)为1662bp,强毒株同La Sota的核苷酸同源性为83.5%~84.2%。HN基因开放性阅读框架(ORF)为1716或1734bp,强毒株在538位缺失1个糖基化位点。结果表明,近年流行的ND疫情主要是由基因Ⅶ型NDV引起,F和HN基因的变异可能与频繁的疫苗免疫选择压力有关。 展开更多
关键词 新城疫病毒 f基因 HN基因 序列分析 基因型
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贵州省新城疫分子流行病学研究 被引量:1
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作者 高颖 殷俊磊 +3 位作者 伍祥龙 周碧君 文明 温贵兰 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2010年第2期145-147,共3页
应用RT-PCR技术对贵州省不同时期不同禽源NDV分离株(肉鸡源P1株与BY株、蛋鸡源H2株与FW株、七彩山鸡源N98株、越南斗鸡源DQ株、鸵鸟源TN株及鸽源GZ株)F蛋白基因进行扩增、克隆和测序分析,结果表明:8株NDV贵州分离株F基因长度均为1 66... 应用RT-PCR技术对贵州省不同时期不同禽源NDV分离株(肉鸡源P1株与BY株、蛋鸡源H2株与FW株、七彩山鸡源N98株、越南斗鸡源DQ株、鸵鸟源TN株及鸽源GZ株)F蛋白基因进行扩增、克隆和测序分析,结果表明:8株NDV贵州分离株F基因长度均为1 662 bp,可编码553个氨基酸;NDV贵州分离株间核苷酸同源性为84.0%-99.7%,氨基酸同源性为87.5%-99.3%;与国内外NDV参考毒株(LaSota株、B1株、F48E9株、CH2 000株和TW2 000株)的核苷酸同源性为84.2%-98.9%,氨基酸同源性为87.2%-98.6%;GZ株和TN株为基因II型,DQ株、N98株、P1株和H2株为基因VII型(均为VIId亚型),BY株和FW株为基因IX型。表明,不同时期NDV贵州分离株的基因型不同,近年流行的ND疫情主要是由基因VII型NDV引起,与国内其他省市ND流行趋势基本一致。 展开更多
关键词 新城疫病毒 f基因 序列分析 基因型 贵州
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