Comparison of the Serum Proteins and Immune Responses of Velogenic Newcastle Disease Virus Infected Chickens and Ducks

The effect of velogenic Newcastle disease virus (vNDV) on the immune responses and serum proteins was investigated in six-week-old ducks and chickens. Results showed that weight loss was markedly significant (p < 0.05) from days 3 - 21 (PI) in chickens and mild (p < 0.05) on days 3 and 15 PI in ducks. The antibody response obtained showed significant (p < 0.05) increase in infected chickens (IC) than those of the infected ducks (ID). While the total serum protein and serum globulin increased significantly (p < 0.05) in IC on days 7 and 14 PI, they decreased significantly (p < 0.05) in ID only on day 21 PI. The immune responses and serum protein values in this experiment X-ray showed less susceptibility of ducks when compared with the chickens. This may be related to marked anorexia and severe dehydration observed in the latter consequent upon serum concentration. Ducks could be maintaining the endemicity of Newcastle disease (ND) as reservoir host.

北京油鸡新城疫抗体消长规律及免疫基准线的建立

试验旨在建立北京油鸡保种场的新城疫抗体基准线,对不同日龄(0、21、42、84、105、147、168、252、315日龄)的北京油鸡采集血清样品,采用血凝抑制试验进行鸡新城疫抗体检测,测定抗体消长规律,确定免疫基准线。结果显示:0日龄时雏鸡受母源抗体影响,新城疫抗体滴度在8.8~9.0 Log2;21日龄时母源抗体基本消退,降至3.5~3.8 Log2,抗体合格率为48.3%;42日龄抗体缓慢上升,达到6.8 Log2,抗体合格率为100.0%;84日龄达到9.7 Log2,105日龄达到高峰10.2 Log2;147~315日龄鸡群抗体维持在较高水平,均在8.0 Log2以上。根据上述数据得出,北京油鸡新城疫抗体基准线为0日龄在7.8~10 Log2,21日龄在2.0~5.4 Log2,42日龄在4.9~8.3 Log2,84日龄在7.7~12.0 Log2,105日龄在9.0~11.1 Log2,147日龄在8.6~11.0 Log2,168日龄在8.3~11.1 Log2,252日龄在5.4~10.3 Log2,315日龄在7.1~11.4 Log2。研究表明,建立新城疫抗体基准线可有效评估疫苗免疫效果,及时调整免疫程序,保证鸡群健康。

鸡TIFA和TRAF6蛋白的分子特征及其基因在免疫器官中的表达特性

【目的】明确鸡肿瘤坏死因子受体相关因子相互作用的具有叉形头相关结构域蛋白(TIFA)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的分子特征及其基因在鸡免疫器官中的表达特性,为后续深入研究TIFA和TRAF6相互作用调控家禽病毒NDV复制的作用机制提供理论依据。【方法】采用生物信息学软件结合实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,通过分析鸡TIFA和TRAF6蛋白的理化性质、二级结构、三级结构、氨基酸同源性和结构域保守性及其在1~6月龄白来航鸡和新城疫病毒(NDV)感染SPF鸡后第3~5天的免疫器官(脾脏、胸腺和法氏囊),分别检测鸡免疫器官中TIFA和TRAF6基因的表达水平,进而研究鸡TIFA和TRAF6蛋白的分子特征及其基因在免疫器官中的表达特性。【结果】鸡TIFA和TRAF6蛋白分别含有187和545个氨基酸残基,相对分子量约为21.8和61.9 kDa,其二级结构均主要由无规则卷曲和α-螺旋组成。氨基酸同源性分析结果表明,鸡与火鸡TIFA和TRAF6蛋白的氨基酸同源性最高,分别为97.3%和98.2%,而与猪TIFA及小鼠TRAF6蛋白的氨基酸同源性最低,分别为51.1%和74.7%。同时,鸡TIFA蛋白的FHA结构域及TRAF6蛋白的RING、Zinc finger和MATH结构域均在禽类中保守性高。RT-qPCR分析结果表明,鸡TIFA和TRAF6基因在1~6月龄鸡免疫器官中均存在表达,但在脾脏中的相对表达量最高(47.94和10.84),而在法氏囊中最低(8.08和2.01),其中,TIFA基因在1月龄鸡免疫器官中表达量最高(22.15),在6月龄时最低(1.11),呈先减后增再减趋势,整体表达趋势呈倒“N”型模式;TRAF6基因在4月龄鸡免疫器官中表达量最高(7.13),在5月龄时最低(1.05),呈先降后升再降再升趋势,整体表达趋势呈“W”型模式。在NDV感染SPF鸡后的免疫器官中,TIFA和TRAF6基因的相对表达量均显著高于对照,其中,TIFA基因在第3天的鸡脾脏、第4天的鸡胸腺和法氏囊中的表达量最高,而TRAF6基因则在第3天的鸡脾脏、第5天的鸡胸腺和法氏囊中的表达量最高。【结论】鸡TIFA和TRAF6蛋白在禽类中的保守性高,两者在不同月龄鸡和NDV感染鸡的免疫器官中呈不同的表达水平和表达变化趋势,其参与的先天性免疫应答可能在抵抗NDV感染过程中发挥一定作用。

中药对鸡新城疫灭活疫苗免疫效果的影响

手工乳化制备含 2 0 g/L人参皂甙、4 0g/L海藻多糖、4 0 g/L黄芪多糖、4 0 g/L芦荟多糖的鸡新城疫灭活油乳剂疫苗 ,注射免疫 2 1日龄粤黄鸡 ,即日起连续 3d按体重胸肌注射环磷酰胺 4 0mg/kg ,每日 1次 ;免疫后第 7、14、2 1、2 8、4 2d采血检测鸡新城疫HI抗体效价 ,免疫后第 14、2 8d采血检测红细胞CR1受体 (RBC CR1)花环率、免疫器官指数和血清超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果表明 ,人参皂甙、海藻多糖在免疫后期能提高鸡新城疫HI抗体效价 ,而黄芪多糖、芦荟多糖作用不明显 ;人参皂甙、黄芪多糖、芦荟多糖能显著提高鸡RBC CR1花环率 (P <0 .0 5 ) ,海藻多糖作用不显著 (P >0 .0 5 ) ;海藻多糖、芦荟多糖能显著提高血清SOD活性 (P <0 .0 5 ) ,人参皂甙、黄芪多糖作用不显著 (P >0 .0 5 ) ;人参皂甙、海藻多糖能显著提高免疫器官指数 (P <0 .0 5 ) ,黄芪多糖、芦荟多糖作用不显著 (P >0 .0 5 )。

鸡结膜结合淋巴组织(CALT)对新城疫疫苗点眼免疫应答

１８０只１日龄公雏平均分成Ａ、Ｂ、Ｃ三组。Ａ组于１日龄手术切除下眼睑结膜。Ａ、Ｂ两组于１０日龄和２０日龄用鸡新城疫Ⅱ系（ＮＤⅡ）弱毒疫苗点眼首免和二免，Ｃ组为对照组。定期收集泪液、血清、ＣＡＬＴ和哈德氏腺，比较观察其抗体ＨＩ效价消长规律与免疫组织细胞变化特点。结果，Ｃ组非免鸡泪液ＨＩ效价比血清ＨＩ效价稍低，１０至３４日龄均呈直线下降，３４至４８日龄维持在极低的水平上（１．２～２Ｌｏｇ２）。Ｂ组点眼免疫鸡，血清母源抗体ＨＩ效价下降速率减缓，并产生高滴度抗体ＨＩ效价。但泪液抗体ＨＩ效价比血清抗体ＨＩ效价高１～５Ｌｏｇ２，并维持在８～１２Ｌｏｇ２。尤其在血清抗体ＨＩ效价达到峰值之前，差异极显著（Ｐ＜０．０１）。出现上升和达到峰值的时间分别比血清早６ｄ和１４ｄ。Ａ组ＣＡＬＴ缺失鸡点眼免疫后，泪液母源抗体ＨＩ效价迅速下降，产生的泪液ＨＩ效价比正常免疫鸡低１～２Ｌｏｇ２，其哈氏腺的免疫细胞也比Ｂ组少。实验结果说明点眼免疫可产生良好的局部和全身免疫反应，ＣＡＬＴ是眼区重要的免疫应答组织之一，协同哈德氏腺完成独特的局部免疫功能。

不同免疫增效剂对鸡新城疫免疫效果的影响

为研究鸡转移因子、黄芪、左旋咪唑、灵芝4种免疫增效剂的功效,以鸡新城疫（Newcastle disease,ND）血凝抑制抗体效价作为指标,比较其免疫效果。试验鸡先采血测定ND抗体效价,接种注射ND-IB-EDS灭活油乳剂疫苗,再将试验鸡随机分成5组,1-4组为试验组,给予不同的免疫增效剂,5组为空白对照组。在给药后第4、6、8、10、12、14、16、18、20、22和24天分别采血,采用微量血凝抑制试验检测ND抗体效价,统计后比较其抗体效价的变化。结果表明：灵芝组抗体效价在12 d开始显著高于对照组和其他试验组（P〈0.05）,且保持较高的水平;转移因子组和黄芪组抗体效价从14 d开始均显著高于对照组和左旋咪唑组（P〈0.05）,并分别从第22和20天开始持续在较高水平;左旋咪唑组的抗体效价高于对照组,但未出现显著性差异。由此可见,不同的免疫增效剂对鸡ND疫苗的免疫增强作用各异。综合考虑,临床应用时首选鸡转移因子,其次黄芪,灵芝和左旋咪唑需酌情使用。

植物血凝素对鸡免疫功能的影响

选用罗曼蛋公鸡270羽,随机分为9组,连续3次肌肉注射不同剂量植物血凝素(PHA)后,对其血清蛋白、免疫器官指数及新城疫的攻毒保护效果进行检测.结果表明:肌注2.4 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高鸡的血液生化指标(P<0.05),极显著提高对鸡新城疫的保护率(P<0.01);肌注1.2 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高胸腺指数和新城疫攻毒保护率(P<0.05).

三种佐剂对鸡体液免疫影响的比较

佐剂是疫苗的重要组成部分,不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本试验选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂分别与灭活的新城疫病毒制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐剂对鸡体液免疫的影响。结果表明,试验组鸡抗体水平高,饲养至61日龄均未发生新城疫,其中弗氏佐剂的效果最好,蜂胶佐剂的效果次之,油佐剂的效果最次。

新城疫与传染性法氏囊病疫苗对雏鸡联合免疫的研究

将１１４只１１日龄海赛克斯褐公鸡随机分成５组：Ⅰ组为空白对照，Ⅱ组用新城疫（ＮＤ）弱毒苗和ＮＤ油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅲ组用传染性法氏囊病（ＩＢＤ）地方毒株油佐剂灭活苗免疫，Ⅳ组用ＮＤ弱毒苗、ＮＤ油佐剂灭活苗、ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活苗同时免疫，Ⅴ组在Ⅳ组的基础上增加ＩＢＤ弱毒苗免疫。５组鸡分别隔离饲养，定期测定血清ＮＤＨＩ效价与ＩＢＤ琼扩效价。选择时机用强毒攻击，观察各组鸡的保护情况。结果：（１）Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组鸡均能很好地抵抗ＮＤＶ强毒的攻击，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组鸡无论对ＩＢＤＶ人工感染，还是自然感染，均有坚强的保护力；（２）ＩＢＤ地方毒株油佐剂灭活疫苗不干扰ＮＤ疫苗的免疫应答；（３）ＩＢＤ弱毒苗对ＮＤ疫苗的免疫应答有一定影响，在免疫初期能促进机体尽快对ＮＤ疫苗产生应答，但后期ＮＤ疫苗的ＨＩ抗体降低较快；（４）ＮＤ疫苗对ＩＢＤ疫苗的免疫效果无显著影响。作者提出，对雏鸡首免（无论有、无母源抗体）可采用ＮＤ弱毒苗＋ＮＤ油佐剂灭活苗＋ＩＢＤ（地方毒株）油佐剂灭活苗同时进行免疫，至少可以保护到上笼后或开产前免受ＮＤＶ和ＩＢＤＶ的感染，既简化了免疫程序，又可减少对鸡群的应激，值得推广应用。

镉对鸡免疫器官及ND免疫应答的影响及硒拮抗效应

在日粮中添加一定量浓度的镉及硒与之相拮抗 ,复制鸡慢性镉中毒及硒拮抗模型 ,探讨镉对鸡免疫器官及对免疫应答的影响。结果表明 :(1)镉对免疫器官发育以及细胞免疫和体液免疫功能造成了广泛的抑制效应 ;(2 )镉严重影响了ND抗体的产生 ,并在较低的水平上维持 ;(3)镉中毒组胸腺、脾脏、法氏囊免疫器官脏器指数均低于对照组 ,而硒镉拮抗组免疫器官脏器指数介于二者之间 ;(4)镉中毒组鸡的胸腺、脾脏、法氏囊免疫器官淋嘏组织广泛出现实质性的变化 ,包括淋巴细胞数量显著减少、变性、坏死、滤泡减少成无滤泡形成等 。

大肠杆菌DNA作佐剂的鸡新城疫灭活疫苗的免疫效果

用大肠杆菌DNA作为鸡新城疫灭活苗的佐剂接种 15日龄雏鸡 ,以鸡新城疫油乳剂灭活苗为对照 ,用血凝抑制实验检测病毒特异性血凝抑制抗体。结果表明 ,大肠杆菌DNA及油乳剂两种佐剂均能增强特异性血凝抑制抗体的效价 ,二者组间抗体滴度差异不显著 ,但大肠杆菌DNA佐剂组雏鸡的体重明显高于油乳佐剂组 (P <0 0 1)。

鸡新城疫消化道免疫的研究 Ⅱ、幼雏消化道免疫组织化学及功能研究

本实验采用免疫组织化学方法及酶联免疫吸附试验(ELISA)对鸡新城疫弱毒活苗消化道直接免疫后,对其免疫机制和免疫效果进行了研究。 7日龄前,雏鸡肠道无免疫球蛋白G阳性细胞出现。7日龄后出现并缓慢上升,第二次免疫(嗉囊免疫、饮水免疫)后增长明显,出现峰值。免疫组与对照组差异显著,表明雏鸡胃肠道具有保持产生局部抗体的功能,并且血清IgG抗体效价的消长与之呈现相关免疫状态。胃肠道T淋巴细胞在第一次免疫(嗉囊免疫、饮水免疫)后10天和二免后5～10天出现峰值,然后下降并稳定在一定水平,证明细胞免疫参与鸡新城疫消化道免疫。

鸡新城疫与禽霍乱二联油乳剂苗的研究

作者参考国内外学者的研究成果,试制成功了鸡新城疫(ND)与禽霍乱(FC)二联油乳剂苗(简称二联苗)。探索了使用该苗与雏鸡基础免疫的关系,确定了最佳免疫程序。试验表明:7日龄雏鸡基础免疫采用NDⅣ系+ND油苗同时免疫,2月龄时注射鸡新城疫与禽霍乱二联油乳剂苗,可获得良好的免疫效果。试验鸡注苗后5个月,ND抗体HI平均效价为6.66Log_2,攻毒保护率为100%;禽霍乱抗体IHA效价为5.82Log_2。攻毒保护率为86%。该二联苗的免疫效果明显优越于对照组。应用效果表明二联油乳剂苗安全、有效、稳定,室温下可长期保存,注射1针可预防2种疫病,具有省时、省力等优点,便于农村推广应用。

高母源抗体下蛋雏鸡新城疫最佳免疫程序探讨

该研究旨在探讨在高母源抗体下蛋雏鸡新城疫(ND)免疫程序与免疫效果的关系。在不同日龄和不同母源抗体水平,对鸡新城疫高母源抗体的蛋雏鸡进行免疫,测定效果。结果表明,用新城疫弱毒疫苗和油乳剂疫苗同时免疫后,免疫越早,受母源抗体干扰越大,总体免疫效果越差;当ND母源抗体降到6log2左右(大约在11～13日龄)时进行首免,隔14天进行二免,鸡体产生保护水平(6log2)以上的ND抗体最快、抗体水平上的最高、维持时间最长,总体免疫效果最好。因此,母源抗体6log2时首免,14天后二免为最佳免疫程序。

不同免疫途径对商品蛋雏鸡新城疫黏膜及血清抗体的影响

通过不同的免疫途径对商品蛋雏鸡进行免疫,探讨不同的免疫途径对商品蛋雏鸡新城疫(Newcastle disease,ND)黏膜抗体及血清抗体的影响。结果表明,同时用新城疫弱毒疫苗免疫后,不同的免疫途径产生的新城疫黏膜抗体及血清抗体效价有较大差异。采用喷雾法于3日龄首免,15日龄二免,25日龄三免,鸡体产生保护水平(6 log2)以上的ND黏膜抗体和血清抗体最快、抗体水平最高、维持时间最长、总体免疫效果最好,而采用饮水免疫的试验组产生的ND黏膜抗体和血清抗体水平均不高,总体免疫效果最差。

中药复方抗鸡新城疫作用及其对雏鸡免疫内分泌调节的影响

为筛选抗鸡新城疫中药复方并观察中药复方对雏鸡免疫内分泌调节的影响,将152羽30日龄健康免疫雏鸡随机分为5组:3个中药复方组(方1、方2、方3)、病毒对照组和空白对照组.人工感染鸡新城疫病毒(NDV)后,观察鸡群的发病情况,并于试验各期随机心脏采血,测定外周血淋巴细胞转化和血清抗体、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、甲状腺素(T4)及胰高血糖素(Glu)的水平.结果表明:中药复方能延缓鸡新城疫的发病时间,减轻病理损伤,促进病鸡康复,有效降低鸡的死亡率,尤以方3效果最好.方1和方3能快速提高抗体水平;方1能提升血清IFN-γ和T4的水平,方2能提高血清IL-2的含量,方3则可提高血清IL-2、IL-6和T4的水平,3个中药复方都可降低鸡死亡高峰期血清IL-6和Glu的水平.研究表明,中药复方能快速刺激免疫鸡体内体液免疫应答,并通过免疫内分泌整体调节途径以抵抗NDV感染,不同组方原则的复方调节途径可能也不一致,但方3的效果整体上优于方1和方2.

金银花复方制剂对新城疫病毒感染雏鸡外周血液免疫学变化的影响

为研究金银花复方制剂对新城疫病毒(NDV)感染雏鸡外周血液免疫学变化的影响,采用免疫荧光试验、流式细胞术、间接ELISA法和放射免疫法对NDV感染雏鸡、金银花复方制剂治疗雏鸡的外周血液淋巴细胞数量、免疫球蛋白及细胞因子含量进行检测。结果显示,雏鸡感染NDV后,其外周血液CD4+、CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞数量及IgG、IgM、白细胞介素(IL-2)含量均较未感染雏鸡明显降低,γ-干扰素(IFN-γ)含量较未感染雏鸡明显升高,提示NDV感染能够引起雏鸡外周血液免疫功能紊乱;金银花复方制剂能够显著提高感染雏鸡外周血液CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞数量及IgG、IgM、IL-2含量,降低IFN-γ含量,表明该复方制剂能够改善NDV感染雏鸡外周血液的免疫功能。

饲养模式对坝上长尾鸡免疫水平及盲肠菌群的影响

为了探讨养殖模式对坝上长尾鸡免疫水平和盲肠菌群的影响,试验选择在笼养、舍内散养、草地放养、林地放养和山地放养5种养殖模式下饲养的坝上长尾鸡,分别在70,100日龄时采集试验鸡血液,采用红细胞凝集试验(HA)和血凝抑制试验(HI)测定新城疫抗体效价;屠宰试验鸡并称量肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊重,计算免疫器官指数;取盲肠内容物,测定大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数量。结果表明:山地放养和林地放养模式新城疫HI抗体效价较高,各养殖模式下抗体水平随着日龄增大而降低。70,100日龄肝脏指数笼养模式极显著高于林地放养和山地放养(P<0.01),70日龄脾脏、胸腺、法氏囊指数山地放养>林地放养>草地放养>舍内散养>笼养,其中笼养和舍内散养模式肝脏指数与林地放养和山地放养模式比较差异极显著(P<0.01);100日龄法氏囊指数各组间差异不显著(P>0.05)。70,100日龄坝上长尾鸡盲肠大肠杆菌数量舍内散养>笼养>草地放养>林地放养>山地放养,双歧杆菌和乳酸杆菌数量山地放养>林地放养>草地放养>舍内散养>笼养。说明养殖模式影响新城疫抗体效价、机体免疫力和肠道微生物菌群数量,山地放养和林地放养模式更有利于提高坝上长尾鸡的免疫力和抗病力。

发酵灵芝对雪山麻鸡免疫功能的调节作用

为了研究发酵灵芝增强雪山麻鸡免疫功能的效果,试验将150只雪山麻鸡平均分成5组,每组30只,分别为发酵灵芝高剂量组(GFP-H组)、中剂量组(GFP-M组)、低剂量组(GFP-L组),免疫对照组和空白对照组,在10日龄时,除空白对照组外,雪山麻鸡常规免疫新城疫疫苗,免疫后当天(第0天)开始GFP-H、GFP-M、GFP-L组分别以8.4%、4.2%、2.1%比例在饲料中添加发酵灵芝,连用14 d,免疫对照组和空白对照组不给药,分别于第7,14,21,28天每组随机取5只鸡称重,心脏采血2 mL,屠宰后取脾脏、胸腺和法氏囊测定免疫器官指数,测定血清中新城疫抗体效价;测定第7,14天血清中细胞因子γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素6(IL-6)、免疫球蛋白A(IgA)和IgG的含量;采集第14天脾脏、法氏囊和胸腺进行H.E.染色,观察免疫器官的组织学变化。结果表明:与免疫对照组相比,第7天,GFP-M组胸腺指数极显著提高(P<0.01);在第14天,GFP-H组和GFP-M组法氏囊指数极显著提高(P<0.01);7~28天,GFP-H组和GFP-M组鸡新城疫抗体效价极显著提高(P<0.01)。第7,14天GFP-H组和GFP-M组INF-γ、IL-6和IgA含量极显著提高(P<0.01),第14天GFP-L组IL-6含量极显著提高(P<0.01);第7天GFP-H组及第7,14天GFP-H组和GFP-M组IgG含量极显著提高(P<0.01)。GFP-H组脾脏淋巴小结和法氏囊淋巴滤泡数量增加,胸腺皮质明显增厚。说明发酵灵芝具有增强雪山麻鸡整体免疫功能的作用,其中高剂量效果最好。

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗的免疫反应Ⅰ.局部与循环抗体检测

实验将 60只 1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C 3组。A组为CALT缺失组 ,B组为免疫组 ,C组为非免疫对照组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜 ,A、B两组于 1 2日龄结扎鼻泪管后进行点眼免疫接种新城疫克隆 30疫苗。2 3日龄时 ,收集A、B、C各实验组鸡的血清和泪液 ,做红细胞凝集抑制试验 (HI试验 )、酶联免疫吸附试验(ELISA)。比较观察各实验组雏鸡血清和泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量的变化特点。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失 ,CALT缺失鸡点眼免疫后 ,泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量比免疫组雏鸡低。但对雏鸡的抗体生成的规律并不产影响。故实验证实了CALT对眼区局部抗体的产生及其种类有重要的调控作用 。