浅色黄姑鱼线粒体16S rRNA基因片段序列特征分析

PCR扩增100个浅色黄姑鱼个体的线粒体16SrRNA基因片段序列,得到大约620bp的扩增产物。将其中5个个体的扩增产物进行测序和同源比对,得到468bp可供比对分析的片段。比对结果表明,5条序列包括两个单倍型,两个单倍型之间有1个碱基突变。PCR-RFLP分析结果显示,两个种群的100个样品中98%的个体为其中一种单倍型,只有2%的个体呈另一种单倍型,表明这两个种群的遗传多样性较低。两个单倍型平均碱基组成为:T22.0%,C26.3%,A29.8%,G21.9%,GC含量平均为48.2%。与GenBank中石首鱼科7属9种的11条同源序列比对,得到429个比对位点,其中包括69个简约信息位点、55个单突变子和16个插入/缺失位点。聚类分析显示,浅色黄姑鱼与黄姑鱼亲缘关系较近,与形态分类相符。

印度尼西亚阿拉弗拉海浅色黄姑鱼生物学特性初步研究

根据2008年8月-11月印尼阿拉弗拉海单船探捕调查的浅色黄姑鱼生物学数据，对浅色黄姑鱼的生物学特性进行了分析。结果为：性成熟度为Ⅱ-Ⅲ期的占79．83％；摄食等级主要为0级和1级，占66．56％；雌雄性比接近1．4：1；体长范围为11．5～52．0cm，优势体长组为17．5～21．5cm和25．5～33．5cm，在经纬度上体长分布差异明显；在优势体长组中，15．5～17．5cm、25．5～32．5cm优势体长组内的雄性个体出现频率明显高于雌性，而在其他体长组内，雌性占优势。

脯氨酸对浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积及相关基因表达的影响

鱼鳔富含胶原蛋白,而脯氨酸(Pro)是胶原蛋白合成所需的底物。本试验旨在研究饲料中添加不同水平Pro对浅色黄姑鱼生长、胶原蛋白沉积及相关基因表达的影响。试验选用450尾初始体重为(8.64±0.14) g的浅色黄姑鱼,随机分为6个组,分别投喂添加0、5、10、15、20和25 g/kg Pro的等氮等脂饲料,每组3个重复(网箱),每个重复25尾鱼。试验期8周。试验结束后,测定浅色黄姑鱼的生长性能、各组织中的胶原蛋白及氨基酸含量以及与胶原蛋白代谢相关的基因相对表达量。结果表明:饲料中添加不同水平Pro对浅色黄姑鱼生长性能没有显著影响(P>0.05),但能显著促进鱼鳔中胶原蛋白沉积(P<0.05),同时显著影响鱼鳔中部分氨基酸含量(P<0.05),特别是与胶原蛋白代谢相关的氨基酸。通过鱼鳔胶原蛋白含量估算出饲料中Pro最适添加水平为14.88 g/kg。另外,鱼鳔中Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、Ⅰ型胶原蛋白α2链(COL1A2)和脯氨酰4-羟化酶亚基α1(P4HA1)基因的相对表达量随着饲料中Pro添加水平的提高而提高(P<0.05)。综上所述,饲料中添加Pro促进了浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白的沉积,最佳的添加水平为14.88 g/kg,且Pro促进鱼鳔胶原蛋白沉积潜在受到Ⅰ型胶原蛋白α链基因的调控。

缅甸安达曼海浅色黄姑鱼生物学特性的初步研究

2012年10月—2013年1月在缅甸安达曼海域探捕期间,根据随机选取的650尾浅色黄姑鱼Nibea coibor样本生物学数据,对该鱼种的生物学特性进行了分析。结果表明:浅色黄姑鱼全长为138～459 mm,平均全长为243 mm,体长为109～381 mm,平均体长为200 mm,体质量为25～868 g,平均体质量为214g;全长(TL)与体长(BL)的关系式为TL=0.8626BL-8.4845(R2=0.9536),雌、雄个体间全长和体长分布均无显著性差异(P>0.05);体质量(BW)与体长(BL)的关系式为BW=0.0001BL2.713(R2=0.9159);雌性与雄性之比为1.19∶1,性成熟度以Ⅱ期和Ⅲ期为主;摄食等级以2、3级为主,占总样本数的69.69%,摄食等级为1～4的个体平均体长间无显著性差异(P>0.05)。

浅色黄姑鱼鳃结构及其呼吸面积的研究

应用扫描电镜技术对体重范围在4.75～35.51g的浅色黄姑鱼(Nibea coibor)鳃结构及鳃小片进行了观察与呼吸面积计算,研究体重、体长与呼吸面积之间的相关关系。结果表明,浅色黄姑鱼的平均相对呼吸面积为4.01±1.62cm.2g-1。体重与一侧鳃丝总数的相关性N=28.81+158.45lnW(R2=0.9670,P<0.01)较体长与一侧鳃丝总数的相关性N=17.31L1.4542(R2=0.8241,P<0.01)更为显著。单位mm鳃小片的数目随着体重的不断增加显著减少,N=49.971W-0.3909(P<0.01)。单个鳃小片的面积随体重的增大而显著增加,a=0.3199W0.2528(P<0.01)。总呼吸面积随体重的增大而显著增加,A=11.559W0.7109(P<0.01)。相对呼吸面积随体重的增大而显著减小,RA=11.561W-0.2904(P<0.01)。

浅色黄姑鱼脑垂体cDNA文库的构建

以浅色黄姑鱼脑垂体为材料,应用SMART^(TM) cDNA library construction技术,构建以真核表达载体pcD- NA3．1(+)为基础的浅色黄姑鱼cDNA文库。利用含Sfi I B酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一链,利用含Sfi I A酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD PCR引物合成双链cDNA,双链cDNA用Sfi I酶切和过柱分级分离后,与引入Sfi I酶切位点的pcDNA3．1(+)-Sfi I载体进行连接,转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,构建成脑垂体全长cDNA文库。经过质量鉴定,得到的原始cDNA文库含有约1×10~5个重组子,重组率为90%,插入cDNA片段长度范围约为0．4～3kb。研究为深入开展浅色黄姑鱼的生长发育相关基因的研究奠定了良好的基础。

抑制TGF-β/Smads通路对Hyp促进浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积的影响

【目的】探讨Hyp对浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积的影响及其作用机制,为优质鱼胶的生产提供营养调控策略。【方法】将300尾浅色黄姑鱼(体质量(11.621±0.154) g/尾)随机分为Hyp空白组、Hyp添加组、SIS3干扰组、氧化苦参碱干扰组,每组3个重复,每重复25尾鱼,Hyp空白组饲喂日粮中不添加Hyp,其他3组均饲喂添加9.70 g/kg(前期试验确定的最佳添加量)L-羟脯氨酸的日粮,进行为期8周的饲养试验,SIS3、氧化苦参碱干扰组试验鱼在1月后分别腹腔注射转化生长因子(TGF-β)/Smads通路抑制剂SIS3和氧化苦参碱注射液100μL/尾(SIS3和氧化苦参碱的计量分别为2和10 mg/kg)进行干扰试验,每周注射1次,直至试验结束。试验结束后,测定各处理组中浅色黄姑鱼生长指标(特定生长率、饲料系数、鳔体比、存活率、肥满度)、鱼鳔胶原蛋白含量,以及胶原蛋白代谢相关基因(COL1A1、COL1A2、P4Hα(Ⅰ)、P4Hα(Ⅱ)、P4Hα(Ⅲ))和TGF-β/Smads通路关键基因(TGF-β、TGF-βRT、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7)的表达,分析鱼鳔中胶原蛋白差异化沉积是否受TGF-β/Smads通路的调控。【结果】Hyp能显著促进浅色黄姑鱼生长及鱼鳔中胶原蛋白沉积,能显著上调COL1A1、COL1A1基因的表达,显著下调P4Hα(Ⅲ)的表达;SIS3显著降低了鱼鳔胶原蛋白沉积;SIS3和氧化苦参碱对胶原蛋白代谢相关基因及TGF-β/Smads信号通路关键基因表达无显著影响。【结论】TGF-β/Smads信号通路可能不是调控Hyp促进鱼鳔胶原蛋白沉积的主要途径。Hyp作为胶原蛋白分解产物,其促进胶原蛋白沉积可能与其抑制胶原蛋白降解有关。

养殖浅色黄姑鱼体表溃烂症病原菌的分离与鉴定

浅色黄姑鱼的高密度养殖一直受到病害的困扰,导致成鱼养殖成活率低,直接影响了浅色黄姑鱼养殖业的发展.以汕头南澳岛患皮肤溃烂症的养殖浅色黄姑鱼为材料,从其溃烂头部组织中分离得到优势菌KLg,人工感染实验证实菌株KLg为浅色黄姑鱼的致病菌.药敏试验表明菌株KLg对头孢哌酮、红霉素、头孢曲松、先锋霉素V、复达欣、头孢呋辛和氧哌嗪青霉素等7种抗生素敏感,革兰氏染色、生理生化测定等手段初步确定菌株KLg为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi),这一结果通过16S rDNA基因序列及进化树分析得到进一步确认.哈维氏弧菌是海水养殖鱼类的常见致病菌,但在浅色黄姑鱼养殖中尚属首次报道.实验结果可为我国沿海地区浅色黄姑鱼养殖中弧菌病害的防治提供重要参考.

TGF-β/Smads信号通路介导脯氨酸促进浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积

为了进一步验证转化生长因子(TGF-β)/Smads信号通路在脯氨酸(Pro)促进鱼鳔胶原蛋白沉积中的作用,研究利用TGF-β/Smads通路抑制剂干扰,分析干扰前后鱼鳔中胶原蛋白含量及相关基因转录水平的变化。根据前期实验获得的Pro最佳添加量,制定饲料配方,饲喂浅色黄姑鱼1月后,通过腹腔注射氧化苦参碱(Oxymatrine)为期1个月。在实验结束后,测量各项指标,评估干扰前后, Pro促进鱼鳔胶原蛋白沉积的效果及变化。实验结果表明:Pro能显著上调TGF-β/Smads通路中相关基因的表达,并促进鱼鳔胶原蛋白沉积,Oxymatrine干扰显著下调了TGF-β/Smads通路中相关基因(Col1α1、Col1α2、TGF-β和Smad2)表达,同时导致鱼鳔中胶原蛋白沉积下降。由此推断Pro通过激活TGF-β/Smads通路促进鱼鳔中胶原蛋白沉积,而Oxymatrine干扰抑制了TGF-β/Smads通路,导致Smad2与Col1α2启动子结合受阻,进而下调了Col1α2基因的转录,从而降低鱼鳔中胶原蛋白的沉积。综上表明, TGF-β/Smads信号通路在Pro促进浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积过程中起着重要调控作用,其中Col1α1、Col1α2、TGF-β和Smad2扮演着重要角色,研究结果可为鱼类胶原蛋白代谢的营养调控提供新思路和新方法。

养殖条件下3种石首鱼科鱼类肌肉营养成分的分析与比较

为探明石首鱼在广东相关水域养殖条件下的肌肉营养成分,对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)、浅色黄姑鱼(Nibea coibor)、双棘原黄姑鱼(Protonibea diacanthus)进行了肌肉基本营养成分和氨基酸、脂肪酸的检测。结果显示,3种石首鱼科的鱼类基本营养成分除粗脂肪外没有显著性差异,3种鱼的水分为77.44%~77.90%,粗蛋白18.32%~19.76%,粗脂肪5.36%~1.08%,灰分1.34%~1.52%。肌肉中检测出17种氨基酸,其中必需氨基酸(EAA)占总氨基酸(TAA)的35.47%~37.64%,用氨基酸评分(AAS)、化学评分(CS)以及必需氨基酸指数(EAAI)对3种鱼的氨基酸进行评价,显示必需氨基酸含量较高,氨基酸组成平衡,是优质蛋白资源。3种鱼的肌肉中检测出17~24种脂肪酸,三类脂肪酸含量的比值没有显著差异,符合人类膳食中饱和脂肪酸(ΣSFA)∶单不饱和脂肪酸(ΣMUFA)∶多不饱和脂肪酸(ΣPUFA)应为1∶1∶1的比值。用血管动脉粥样硬化指数(IA)、血栓形成指数(IT)和多烯指数(PI)对3种鱼的脂肪酸进行评价,也符合人体营养需要。结果表明,3种石首鱼的肌肉均含有较高的营养成分。

浅色黄姑鱼Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1A2)基因的克隆及表达分析

【目的】通过克隆浅色黄姑鱼(Nibea coibor)Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1A2)基因,分析其分子特征、组织分布及表达差异,为鱼类胶原蛋白代谢机制研究奠定理论基础。【方法】通过cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得浅色黄姑鱼COL1A2基因全长序列,利用生物信息学分析方法对其进行系统分析,探讨其分子特征及组织表达谱。【结果】COL1A2 cDNA序列长5826 bp,编码1352个氨基酸。BLAST同源性比对和系统进化树分析表明:浅色黄姑鱼与大黄鱼(Larimichthys crocea)同属石首鱼科(Sciaenidae),亲缘关系最近,且两者COL1A2的氨基酸序列同源性最高(96.60%)。生物信息学分析显示:COL1A2多肽链包含脊椎动物Ⅰ型胶原蛋白的所有特征,如相同的信号肽、C-前肽和N-前肽结构域以及三重螺旋结构域等。qRT-PCR结果显示:鱼鳔中COL1A2基因的表达显著高于其他组织(P<0.05),且胶原蛋白在不同组织中的分布规律与其一致。【结论】本研究首次克隆了浅色黄姑鱼COL1A2基因(GenBank登录号:MK641513),该基因的组织表达特异性是引起胶原蛋白差异化沉积的原因之一。研究结果有助于深入探究胶原蛋白的生物合成途径及调控机制。

饲料中添加脯氨酸对浅色黄姑鱼生长、体组成及抗氧化能力的影响

为了研究饲料中添加脯氨酸对浅色黄姑鱼(Nibea coibor)生长、体组成及抗氧化能力的影响,试验选取450尾浅色黄姑鱼,随机分为6个处理组,每个处理组设3个重复,分别饲喂添加0、5、10、15、20和25 g/kg脯氨酸的试验饲粮,进行为期8周的饲养实验。结束后进行生物学指标测定,测定各实验组中浅色黄姑鱼的生长、体常规成分及抗氧化指标。结果表明:脯氨酸对浅色黄姑鱼生长性能和饲料利用率没有显著的影响,但显著影响机体的蛋白质沉积。通过全鱼粗蛋白估算出的最佳饲料脯氨酸添加量为14.73 g/kg。另外,饲料中添加脯氨酸显著提高了肝脏和血清中的还原性谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)及血清中的超氧化物歧化酶(SOD)含量,却显著降低了浅色黄姑鱼肝脏和血清中的丙二醛(MDA)含量。综上,饲料中添加脯氨酸对浅色黄姑鱼生长的促进作用不显著,但可以促进蛋白沉积和增强抗氧化能力。

印尼阿拉弗拉海浅色黄姑鱼形态性状与体重之间的关系分析

随机选取1176尾浅色黄姑鱼其中有600尾雌性和576尾雄性研究其形态性状对其体重的影响,测定性状包括其体长(X1)、躯干长(X2)、尾长(X3)、头长(X4)、体高(X5)、最大体周(X6)、体重(Y)。利用相关分析方法计算各性状间的相关系数,并通过通径分析方法计算其以体重为依变量各形态性状为自变量的通经系数和决定系数。结果表明:雌雄性浅色黄姑鱼各形态性状与体重之间相关性均达到极显著水平(P<0.01);雌性浅色黄姑鱼中各形态性状中体长、最大体周、体高、尾长、躯干长的通径系数达到极显著水平(P<0.01),而雄性浅色黄姑鱼各形态性状中体长、最大体周、头长、尾长、躯干长的通径系数达到极显著水平(P<0.01);决定系数分析结果表明雌性浅色黄姑鱼的体长和最大体周对其体重的决定程度最大;而雄性浅色黄姑鱼最大体周和躯干长对其体重的决定程度最大。经多元回归分析去除偏回归系数不显著的性状,建立多元回归方程。