液相色谱质谱法测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物残留量的不确定度评定

为了评定液相色谱质谱法(LC-MS/MS)测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物残留量的不确定度,试验依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》,结合数学模型和实验过程,分析测量不确定度的来源,评定各因素不确定度的分量。结果表明:鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物残留量测定结果为4.2μg/kg,其扩展不确定度为0.46μg/kg,结果表示为(4.26±0.46)μg/kg,k=2。影响LC-MS/MS测定鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物残留量测量不确定度的主要因素为标准溶液配制、回收率和标准曲线拟合。该评定模型适用于此方法,可通过选择合格、有效的标准物质、较少标准溶液配制过程,优化前处理方法,选择适合浓度梯度的标准曲线等措施降低不确定度,保证检测结果的准确、可靠。

混合型阴离子交换固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定饲料中尼卡巴嗪含量的研究

研究旨在建立一种利用混合型阴离子交换固相萃取净化测定饲料中尼卡巴嗪的液相色谱-串联质谱方法。试样(配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料)经甲醇:乙腈(1:1)提取,采用混合型阴离子交换固相萃取柱(MAX)净化,用乙腈定容,C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm)分离,以乙腈和超纯水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃。待测物采用电喷雾离子源(ESI)负离子多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。不同饲料基质标准溶液中尼卡巴嗪浓度在0.04~50 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r 2)均在0.99以上,检测限为0.02 mg/kg,定量限为0.05 mg/kg。饲料中尼卡巴嗪含量在0.05~500 mg/kg(预混饲料为0.05~10000 mg/kg)范围内回收率为83.3%~105%,相对标准偏差(RSD)为2.4%~7.6%。该方法灵敏度高、准确性及重现性好,适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料中低含量和高含量尼卡巴嗪的分析。

高效液相色谱- 串联质谱法检测鸡肌肉中尼卡巴嗪、地克珠利和托曲珠利的主要代谢物残留量

本研究建立鸡肌肉中尼卡巴嗪、地克珠利和托曲珠利的主要代谢物残留量的高效液相色谱-串联质谱检测方法,进行预处理后,取上清液用高效液相色谱-串联质谱法检测,在3.0~10.0μg/kg范围内,3种抗球虫药物的代谢物残留量呈良好线性关系,相关系数均>0.999,回收率在87.5%~109%,相对标准偏差在1.39%~2.04%。本法灵敏、准确,适用于鸡肌肉中尼卡巴嗪、地克珠利和托曲珠利的代谢物残留量的测定。

鸡肉中尼卡巴嗪残留基体标准样品的研制

为填补我国尼卡巴嗪药物残留基体标准样品的空白,建立了鸡肉中尼卡巴嗪残留基体标准样品的研制方法。通过在饲料中添加尼卡巴嗪药粉喂养白羽肉鸡,使药物在鸡体内自然代谢,得到尼卡巴嗪残留阳性动物。取鸡前胸肉制成肉糜,经均质、冷冻干燥、粉碎、筛分、包装、辐照灭菌等处理,制备了355份含有尼卡巴嗪残留的鸡肉冻干粉。按照国家标准样品的规范,进行了均匀性检验、稳定性检验、定值和不确定度分析。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定样品中的尼卡巴嗪含量,以8家具有资质的实验室进行协同定值。结果表明本批标准样品的均匀性和稳定性良好,在-70、4、25、50℃下能稳定保存14天,在-18℃下保存的稳定性可达12个月,符合国家标准样品的相关要求。最终确定标准样品中尼卡巴嗪的标准值为(157.7±11.0)μg·kg^(-1)(k=2)。该标准样品可用于尼卡巴嗪的检测方法优化、检测实验室的能力评价,对于食品中尼卡巴嗪残留检测具有重要意义。

反相高效液相色谱法测定饲料中尼卡巴嗪含量

用二甲基甲酰胺 (DMF)提取试样中的尼卡巴嗪 ,经碱性氧化铝层析柱过柱纯化、浓缩 ,并用洗脱液溶解、定容 ,用高效液相色谱仪C18反相柱 ,在波长 36 5nm、流速 1mL/min条件下对饲料中尼卡巴嗪含量进行测定。通过对氧化铝活性、层析柱高度、流动相等检测条件对比试验 ,建立的理想检测条件为 :10 5℃恒温干燥 2h处理高度 6cm的氧化铝柱 ,采用的流动相甲醇∶水为 80∶2 0。应用建立的测试方法 ,对饲料添加 10 0mg/kg尼卡巴嗪进行 30次重复试验。结果表明 ,尼卡巴嗪回收率在 91.9%～ 10 7.5 %之间 ,标准偏差 4 .0 %。研究还表明 ,饲料中其它常用的抗球虫药盐霉素、马杜霉素。

尼卡巴嗪对鸡球虫的生物活性及对鸡生长的影响

研究了尼卡巴嗪对鸡球虫的生物活性及肉鸡生长的影响。结果表明,对于6种艾美尔球虫,用球虫净500mg/kg处理感染用药组存活率均为100%,相对增重率大于83.7%,病变值小于7.5,卵囊值小于1,ACI指数超过180,说明球虫净对鸡球虫具有很高的生物活性。饲喂尼卡巴嗪与马杜拉霉素混剂对肉鸡的平均饲料消耗率没有明显的影响。尼卡巴嗪对鸡羽热应激有增强作用。尼卡巴嗪40.00mg/kg+马杜拉霉素3.75mg/kg和尼卡巴嗪44.00mg/kg+马杜拉霉素4.13mg/kg的混合物的平均死亡率比较低(19.6%)。此饲喂量对肉鸡的平均增重与对照组相当。尼卡巴嗪不同复配剂的肉鸡球虫病攻毒试验表明,尼卡巴嗪具有良好的配伍性。

高效液相色谱法测定水产品中4,4′-二硝基均二苯脲的残留量

建立了一种测定水产品中尼卡巴嗪标志残留物-4，4’-二硝基均二苯脲残留量的方法。样品用乙腈提取，正己烷去脂，高效液相色谱．紫外检测器检测。4，4’-二硝基均二苯脲在添加10～500ug／kg的范围内，回收率为81．7％～92．7％，批内和批间相对标准偏差小于9．2％和2．3％，方法检出限为10ug／kg。

尼卡巴嗪混悬液的研制及其对鸡球虫病的疗效

以尼卡巴嗪为原料,纯化水为溶媒,利用胶体磨采用分散法成功研制出尼卡巴嗪混悬液,并对制剂进行了稳定性研究。所有参试样品的外观性状、沉降体积比、再分散性、相对含量等指标均无明显变化,表明该制剂稳定性良好。试验了尼卡巴嗪混悬液对鸡柔嫩艾美耳球虫病的疗效。结果表明,对经口一次人工感染1.0×105个/只柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的雏鸡按100kg饮水中分别添加100g/L尼卡巴嗪混悬液25、50、100mL的剂量混饮连续给药5d,其保护率均达100%,抗球虫指数分别为189.7、189.9、184.2,属高效抗球虫药。

高效液相色谱法测定鸡粪中尼卡巴嗪的含量

文章建立了一种测定鸡粪中尼卡巴嗪（nicarbazin）兽药残留的高校液相色谱法（紫外检测器）。采用C18柱,甲醇/水（80/20）为流动相,波长340 nm。尼卡巴嗪在浓度为0.1-5μg/mL范围内线性良好（R2=0.999 9）,线性回归方程为Y=2.43e＋004X＋4.68e＋002。样品经乙腈提取,正己烷液-液分配去除脂类物质,旋转蒸发除去乙腈,甲醇/水（80/20）溶解残渣,过0.22μm微孔滤膜,采用高效液相色谱紫外检测,外标法定量。在1-3μg/mL浓度范围内,平均加标回收率在80.2%-97.9%之间。方法的最低检出限为0.02μg/mL。该方法简便、快速,可满足畜禽废物中尼卡巴嗪残留量的检测。

尼卡巴嗪残留量测定和安全性分析

用乙腈提取试样中的尼卡巴嗪,经碱性氧化铝层析柱纯化,用反相高效液相色谱仪,在波长340nm对尼卡巴嗪含量进行测定。结果表明,尼卡巴嗪回收率在80.9%-95.7%之间。研究还表明添加125mg/kg尼卡巴嗪的饲料饲喂鸡42天后,停药7天后鸡肝中尼卡巴嗪残留量有0.18mg/kg。

酶联免疫法测定鸡肉中尼卡巴嗪残留

为了建立鸡肉中尼卡巴嗪残留标志物4，4’-二硝基均二苯脲（DNC）残留酶联免疫（ELISA）检测方法。将N-琥珀酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酸4-硝基苯胺（SAN）与载体蛋白偶联作为抗原免疫动物，获得抗DNC抗体，在此基础上建立了鸡肉中尼卡巴嗪残留的检测方法。人工抗原中SAN与载体蛋白的结合比约为12：1，血清效价1：2000倍，鸡肉中检测限为9．2μg／kg，添加回收率在49．4％～118％之间，批内、批间变异系数均小于20％。该方法在灵敏度、精密度和准确度方面均能满足兽药残留筛选检测要求。

尼卡巴嗪原料药及制剂中4,4′-二硝基均苯二脲与2-羟基-4,6-二甲基嘧啶的HPLC法同时测定

建立了同时测定尼卡巴嗪原料药及其制剂中4,4′-二硝基均苯二脲（DNC）和2-羟基-4,6-二甲基嘧啶（HDP）的高效液相色谱法。试样用二甲基亚砜溶解,以Hypersil BDS C18为色谱柱,乙酸/乙酸铵溶液-乙腈（体积比1∶1）为流动相,HDP和DNC的检测波长分别为290、350 nm。DNC和HDP的质量浓度分别在0.354-70.9 mg/L和0.146-29.2 mg/L范围内与色谱峰面积呈良好线性关系,标准曲线方程分别为ρ=7.307×10^-5S-0.043 58和ρ=1.648×10^-5S-0.084 83,相关系数（r）分别为1.000和0.999 9。用建立的方法测定尼卡巴嗪原料药中的DNC和HDP含量,测定结果与分光光度法无显著差异,DNC和HDP的相对标准偏差均小于0.5%。

鸡蛋和鸡肉中尼卡巴嗪残留检测高效液相色谱-串联质谱法研究

建立了鸡蛋和鸡肉中尼卡巴嗪残留标示物4,4’-二硝基碳酰替苯胺（DNC）检测的高效液相色谱-串联质谱方法（HPLC-MS/MS）。液相色谱条件为：色谱柱为XBridge C18柱（150mm×2.1 mm,5μm）,流动相为甲醇＋0.1 mol/L的乙酸铵水溶液（75∶25,V/V）,柱温30℃,流速0.2 mL/min,进样量20μL。质谱条件为：电喷雾离子源（ESI-）,多反应监测（MRM）方式进行采集;DNC-D8同位素内标法定量。结果表明,DNC在10～500 ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,R2为0.999 7;鸡蛋和鸡肉中DNC残留检测方法检测限均为0.5 ng/g,定量限均为1 ng/g;鸡蛋中从2、5和10 ng/g三个添加浓度检测结果可以看出,方法平均回收率为95.9%～102.2%,批内RSD为0.9%～4.4%,批间RSD为0.3%～2.1%。鸡肉组织从100、200和300 ng/g三个添加浓度检测结果可以看出,方法平均回收率为94.0%～103.3%,批内RSD为2.0%～6.3%,批间RSD为3.1%～5.2%。

三种抗球虫药对鸡球虫病的对比疗效

为评价药物阿德呋啉对艾美耳球虫的治疗效果,本试验设70 mg/kg阿德呋啉组、121mg/kg莫能菌素组和125 mg/kg尼卡巴嗪组3个药物试验组,以及阳性和阴性对照组。除阴性对照组外,其余全部试验鸡每只接种球虫孢子化卵囊5.2万个,根据成活率、相对增重率、卵囊值、病变值计算抗球虫指数(Anticoccidial Index,ACI),进而判定药物的疗效。结果显示,121 mg/kg莫能菌素组ACI为115.6,在120以下,不宜作抗球虫药;125 mg/kg尼卡巴嗪组ACI为137.2,在120～160之间,抗球虫效力低;70 mg/kg阿德呋啉组ACI为192.9,为高效抗球虫药。

高效液相色谱法测定尼卡巴嗪含量的方法建立

为了建立高效液相色谱法测定尼卡巴嗪的含量，采用WatersX—BridgeC18（150mm×4．6mm，5μm）色谱柱，乙腈-水（用磷酸调pH至3．0）为流动相，梯度洗脱，流速为1．0mL．min^-1．检测波长0～5min为297nm，5min开始为350nm，柱温30℃，进样体积为20μL。2-羟基-4．6-二甲基嘧啶（HDP）的回归方程为：Y=23452x-456，相关系数r=0．99999，4，4’-二硝基均二苯脲（DNC）的回归方程为：Y=102388x＋5296，相关系数r=0．9999，即HDP在0．29-29．12μg/mL范围内具有良好的线性，DNC在0．71～70．90μg／mL范围内具有良好的线性。该方法简便、准确、灵敏度高、重复性好，可以通过同时测定尼卡巴嗪中HDP和DNC来计算尼卡巴嗪的含量。

尼卡巴嗪的结构(之一)

本文通过一系列实验证明，尼卡巴嗪是一个典型的包含化合物，从而为修订尼卡巴嗪质量标准及对照品的制备、检验提供了有力的依据。

高效液相色谱法测定鸡组织中尼卡巴嗪标识残留物

应用高效液相色谱法测定鸡组织中尼卡巴嗪标识残留物——4,4'-二硝基均二苯脲。试样经乙腈-0.5g/mL氢氧化钾溶液提取,正己烷脱脂净化,用高效液相色谱仪(C18柱)分析,流动相为乙腈-体积分数1%乙酸溶液(53:47,V/V),流速1.0mL/min,紫外检测波长为350nm。对鸡肉、鸡肝和鸡蛋样品进行0.05～0.50mg/kg的药物添加回收实验,4,4'-二硝基均二苯脲的平均回收率为93.6%～102.0%(n=10),相对标准偏差为2.8%～10.4%,方法的定量限为0.05mg/kg。该法简便、准确,适用于鸡组织中尼卡巴嗪标识残留物4,4'-二硝基均二苯脲的检测。

尼卡巴嗪的残留检测方法进展

尼卡巴嗪是一种广谱、高效、性能稳定的饲料添加剂,用于防治鸡、火鸡等禽类球虫病,对已产生耐药性的球虫,仍有显著疗效。然而,尼卡巴嗪残留对人体存在潜在的威胁,需对其进行残留监控。综述了尼卡巴嗪残留检测方法,包括高效液相色谱法,差示脉冲极谱法,分光光度法,气相色谱法,高效液相色谱串联质谱法以及免疫色谱法。

液质联用快速检测饲料中尼卡巴嗪含量

建立了简单、快速、灵敏、节约的饲料中尼卡巴嗪含量的高效液相色谱色谱一单极质谱检测方法。分析物经二甲基亚砜（DMSO）-乙腈（ACN）（4：6，体积比）混合溶剂提取，氯化钠、硫酸镁和C18粉末净化，冷冻高速离心。采用梯度洗脱。外标法定量。在饲料中添加0．5、1．0、1．5mg／kg尼卡巴嗪进行重复性试验，结果表明，尼卡巴嗪回收率在93．7％。104．9％之间，相对标准偏差（RSD）不大于3．9％（n=6）。饲料中其它常用的抗球虫药如地克珠利、妥曲珠利及其代谢物等对该检测无干扰。

高效液相色谱-串联质谱法测定动物组织中尼卡巴嗪药物残留量

提出了高效液相色谱-串联质谱法测定动物组织中尼卡巴嗪残留量的方法。样品经N,N-二甲基甲酰胺-乙腈(10+90)混合溶液提取,饱和的正己烷脱脂后,离心分离取下层溶液过Waters Sunfire C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,3.5μm)分离,串联质谱法进行测定,同位素内标法定量。残留尼卡巴嗪的标识物4,4′-二硝基碳酰替苯胺(DNC)的质量浓度在0.010～0.200 mg.L-1范围内与其峰面积呈线性关系,方法的检出限(3S/N)为30 ng.g-1,测定下限(10S/N)为50 ng.g-1。以3类动物组织样品为基体,加入3种不同浓度水平的DNC标准溶液作回收试验,测得回收率分别在72.2%～88.6%之间,相对标准偏差(n=6)在1.63%～12.1%之间。