花烟草再生与遗传转化体系的建立

以花烟草（Nicotiana forgetiana）无菌苗植株的叶片为材料,研究不同NAA和6-BA组合培养的再生体系,得到最佳培养基配方为NAA浓度为0.1 mg/L和6-BA浓度为1.5 mg/L,此时再生率达97%、平均芽数达8.65。以卡那霉素（Km）、头孢霉素（Cef）为筛选试剂,探讨了影响农杆菌介导的花烟草遗传转化因素,表明卡那霉素敏感性浓度为20 mg/L、头孢霉素抑菌浓度为300 mg/L,在菌液OD600 nm为0.2-0.4时最适侵染时间为5 min;最适筛选培养基（MS＋0.1 mg/L NAA＋1.5 mg/L 6-BA＋300 mg/L Cef＋20 mg/L Km）、壮芽培养基Z2（MS＋0.1 mg/L 6-BA＋0.01 mg/L NAA＋300 mg/L Cef＋20 mg/L Km）、生根培养基S2（MS＋0.1 mg/L 6-BA＋300 mg/L Cef＋20 mg/L Km）。以最佳组合进行遗传转化培养,获得的生根苗经炼苗移栽后存活35个株系,用CTAB法提取植物组织DNA,经PCR检测证实外源基因已转入植物组DNA中,阳性率为71%。