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烟草SKP1基因cDNA的克隆分析及原核表达 被引量:7
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作者 张付云 白雪芳 +1 位作者 杜昱光 张玉奎 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期693-696,共4页
应用DDRT-PCR法获得可被壳寡糖诱导的枯斑三生烟SKP1基因cDNA的3′端序列,通过5′RACE扩增该基因cDNA的5′端,进而扩增此基因cDNA的全长,通过同源性比较分析表明,与本塞姆氏烟草的SKP1基因同源性达81%,其cDNA全长653bp(GenBank登录号:AY... 应用DDRT-PCR法获得可被壳寡糖诱导的枯斑三生烟SKP1基因cDNA的3′端序列,通过5′RACE扩增该基因cDNA的5′端,进而扩增此基因cDNA的全长,通过同源性比较分析表明,与本塞姆氏烟草的SKP1基因同源性达81%,其cDNA全长653bp(GenBank登录号:AY702087),其中编码区位于73~540bp,编码一条155个氨基酸的多肽。经预测该多肽的分子量为17527.78Da,等电点为4.57,定位于细胞质,功能结构域分析结果显示在4~105位氨基酸有一明显的Skp1结构域,其E值为1.25e-52,因此推断该基因为枯斑三生烟的SKP1基因。将该基因编码区亚克隆到原核表达载体pET23b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达出与预测分子量一致的蛋白。为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 枯斑三生烟SKP1基因 克隆 序列分析 表达
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烟草受精前后胚囊中钙调素的免疫细胞化学定位 被引量:4
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作者 傅缨 陈以峰 +2 位作者 梁世平 杨弘远 周嫦 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1998年第8期683-687,共5页
应用辣根过氧化物酶标记抗体的光镜免疫细胞化学技术和胶体金标记抗体的电镜免疫细胞化学技术定位烟草(Nicotianatabacumvar.macrophyla)胚囊成员细胞中的钙调素,比较了不同类型细胞之间钙调素的分布... 应用辣根过氧化物酶标记抗体的光镜免疫细胞化学技术和胶体金标记抗体的电镜免疫细胞化学技术定位烟草(Nicotianatabacumvar.macrophyla)胚囊成员细胞中的钙调素,比较了不同类型细胞之间钙调素的分布特点,并探讨了受精前后钙调素在胚囊中分布的变化规律。 展开更多
关键词 烟草 胚囊 钙调素 免疫细胞 化学定位
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受精前后烟草卵细胞内玉米素和三类酸性植物激素分布的免疫金电镜观察 被引量:5
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作者 陈以峰 梁世平 +1 位作者 杨弘远 周燮 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第11期1145-1149,共5页
用胶体免疫金电镜技术观察了受精前后烟草(Nicotianatabacumvarmacrophylla)卵细胞内玉米素(t-Z)、GA7与GA4、(+)ABA与IAA分布的变化。受精前卵细胞内有大量t-Z,主要位于细胞核、内质网与线粒体上;与卵细胞相邻的助细胞合点... 用胶体免疫金电镜技术观察了受精前后烟草(Nicotianatabacumvarmacrophylla)卵细胞内玉米素(t-Z)、GA7与GA4、(+)ABA与IAA分布的变化。受精前卵细胞内有大量t-Z,主要位于细胞核、内质网与线粒体上;与卵细胞相邻的助细胞合点端及中央细胞珠孔端亦有较多t-Z。受精后,合子与宿存助细胞t-z显著减少,正加厚的合子细胞壁中有t-Z分布。未受精卵细胞内GA7与GA4及(+)ABA减少,IAA更少。合子内GA7与GA4及(+)ABA略有增加,IAA仍然很少。初步讨论了上述植物激素与受精作用的关系。 展开更多
关键词 受精 卵细胞 植物激素 免疫金电镜 烟草 玉米素
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烟草未受精中央细胞及其它胚囊细胞的离体分裂 被引量:1
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作者 傅缨 孙蒙祥 +1 位作者 杨弘远 周嫦 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第8期778-781,共4页
自70年代中期以来,未传粉子房和胚珠的离体培养已在多种植物中取得成功,得到的单倍体植株来源于胶囊中的卵细胞、助细胞以及反足细胞。而分离的未受精胚囊及其成员细胞的离体培养虽屡经尝试,迄今只有Kranz等诱导了玉米未受精卵细胞分裂... 自70年代中期以来,未传粉子房和胚珠的离体培养已在多种植物中取得成功,得到的单倍体植株来源于胶囊中的卵细胞、助细胞以及反足细胞。而分离的未受精胚囊及其成员细胞的离体培养虽屡经尝试,迄今只有Kranz等诱导了玉米未受精卵细胞分裂形成小愈伤组织,至于中央细胞与其它雌配子体细胞则无离体分裂的报道。本文报道大叶烟草未受精中央细胞首次培养成细胞团及其它胚囊细胞启动离体分裂的实验结果。 展开更多
关键词 烟草 中央细胞 胚囊细胞 分离
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三生烟和心叶烟对TMV挑战接种的响应差异 被引量:1
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作者 刘开全 马学萍 张丽 《曲靖师范学院学报》 2012年第3期29-31,共3页
用TMV溶液分别感染三生烟和心叶烟,36h,24h和12h后挑战接种同一浓度的TMV溶液,对其产生枯斑的数目和大小进行了分析比较.结果表明:在感染病毒后同一间隔时间挑战接种TMV,三生烟各处理叶片上形成的全叶枯斑数显著少于心叶烟;两品种烟草... 用TMV溶液分别感染三生烟和心叶烟,36h,24h和12h后挑战接种同一浓度的TMV溶液,对其产生枯斑的数目和大小进行了分析比较.结果表明:在感染病毒后同一间隔时间挑战接种TMV,三生烟各处理叶片上形成的全叶枯斑数显著少于心叶烟;两品种烟草感染病毒36h后挑战接种TMV产生的全叶平均枯斑数与其他各处理组的差异都极为显著. 展开更多
关键词 感染 三生烟 心叶烟 TMV 挑战接种
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贝莱斯芽孢杆菌LJ02中植物免疫蛋白的筛选及其功能 被引量:4
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作者 魏艳侠 李卓然 +4 位作者 张斌 苑瑜瑾 于玮玮 常若葵 王远宏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第16期3451-3460,共10页
【目的】贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)LJ02菌株能够诱导黄瓜等植物产生免疫抗病反应。本研究从生防菌LJ02中分离鉴定具有激发植物免疫活性的蛋白分子,通过验证其功能,进一步解析免疫蛋白的免疫信号通路。【方法】用硫酸铵沉淀... 【目的】贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)LJ02菌株能够诱导黄瓜等植物产生免疫抗病反应。本研究从生防菌LJ02中分离鉴定具有激发植物免疫活性的蛋白分子,通过验证其功能,进一步解析免疫蛋白的免疫信号通路。【方法】用硫酸铵沉淀法处理LJ02菌株发酵液,离心获得LJ02蛋白粗提物,将其经凝胶层析后再利用半制备高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分离,收集不同峰值处的蛋白组分。以烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)为靶标进行活性组分的筛选,从而获得具有免疫活性的组分。液相质谱联用仪(LC-MS)检测分析活性组分后发现,在组分F-23中含鞭毛蛋白(flagellin,Flg^(LJ02))。将鞭毛蛋白Flg^(LJ02)进行原核表达并纯化,经过敏性坏死反应(hypersensitive reaction,HR)和抗病试验验证其免疫功能。为确定其主要免疫信号通路,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测水杨酸(salicylic acid,SA)和乙烯(ethylene,ET)途径的相关合成酶基因ICS1、PAL、ACS1以及免疫相关抗性基因NPR1、PR-1、EIN2和EIN3,通过免疫相关抗性基因的相对表达量解析鞭毛蛋白Flg^(LJ02)免疫信号转导途径。【结果】HPLC层析分离出贝莱斯芽孢杆菌LJ02菌液产生的60个外泌蛋白组分(F-1—F-60),免疫烟草接种TMV后,观察分析发现组分F-20、F-23、F-41、F-44具有显著的免疫抗病效应,其中组分F-23抗TMV效果最为显著,其抑制率为81.7%。经过质谱数据分析发现该组分包含鞭毛蛋白Flg^(LJ02)等7种物质。选择鞭毛蛋白Flg^(LJ02)为研究对象构建表达载体,转化大肠杆菌BL21,诱导表达后破碎细胞,获得粗提蛋白。将粗提蛋白过柱、透析纯化后的Flg^(LJ02)渗入珊西烟(Nicotiana tabacum var.xanthi)叶片,24 h后能观察到过敏性坏死反应。将Flg^(LJ02)稀释为终浓度50、100、200μg·mL^(-1)的稀释液后预处理珊西烟叶片,24 h后接种TMV,其对TMV的枯斑抑制率分别为65.6%、76.1%、88.1%。用鞭毛蛋白Flg^(LJ02)处理珊西烟,其SA途径和ET信号途径的免疫抗病相关基因ICS1、PAL、NPR1、PR-1、ACS1、EIN2、EIN3的相对表达量在24—48 h均显著上调。【结论】贝莱斯芽孢杆菌LJ02外泌的鞭毛蛋白Flg^(LJ02)可以激发珊西烟植株的免疫防御反应,提高烟草植株对TMV的抗病性。 展开更多
关键词 贝莱斯芽孢杆菌 鞭毛蛋白 免疫蛋白 珊西烟 烟草花叶病毒
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不同烟草种质感染番茄斑驳花叶病毒的细胞病理特征
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作者 李月月 张水英 +4 位作者 周文鹏 张天毅 兰平秀 谭冠林 李凡 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期92-101,共10页
番茄斑驳花叶病毒(tomato mottle mosaic virus,ToMMV)比同属烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)和番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)在茄科作物上的侵染性更强,为明确受ToMMV侵染后烟草不同表现症状对应的细胞病理学特征。... 番茄斑驳花叶病毒(tomato mottle mosaic virus,ToMMV)比同属烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)和番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)在茄科作物上的侵染性更强,为明确受ToMMV侵染后烟草不同表现症状对应的细胞病理学特征。本文构建了ToMMV的侵染性克隆载体,分别对感染ToMMV的不同烟草组织中的病毒粒子及不同表现症状的烟草细胞超微结构进行了观察分析。结果表明ToMMV为长度约220~310 nm,直径约16~18 nm的杆状粒子,感染ToMMV的珊西烟(Nicotiana tabacum var.Xanthi nc)种子也可携带病毒。ToMMV病毒粒子以分散或整齐分层排列于细胞质或液泡内。感染ToMMV的珊西烟和黄花烟(N.rustica)细胞均产生多泡体结构、大量次级小囊泡以及髓鞘样结构,线粒体嵴减少或消失。其中,症状表现为花叶、畸形的珊西烟叶片细胞中叶绿体变化较大,有膜破碎、大量液泡进入的现象;线形叶细胞中多泡体结构和次级小囊泡数量更多;而表现为系统性坏死的黄花烟叶片细胞中叶绿体变化较小。本研究ToM-MV侵染性克隆的构建和不同烟草被感染后的细胞病变观察为进一步研究ToMMV的致病机理以及与寄主的互作等提供了重要条件和依据。 展开更多
关键词 番茄斑驳花叶病毒 侵染性克隆载体 细胞病变 珊西烟 黄花烟
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Low concentrations of NaHSO_3 enhance NAD(P)H dehydrogenasedependent cyclic photophosphorylation and alleviate the oxidative damage to improve photosynthesis in tobacco 被引量:6
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作者 WU YanXia HE Wei +2 位作者 MA WeiMin SHEN YunKang MI HuaLing 《Chinese Science Bulletin》 SCIE CAS 2012年第30期3872-3877,共6页
Bisulfite at low concentrations(L-NaHSO3) increases cyclic electron transport around photosystem I(PSI) and photosynthesis.However,little is known regarding the detailed contribution of cyclic electron transport to th... Bisulfite at low concentrations(L-NaHSO3) increases cyclic electron transport around photosystem I(PSI) and photosynthesis.However,little is known regarding the detailed contribution of cyclic electron transport to the promoted photosynthesis by L-NaHSO3.In the present work,we used tobacco mutant defective in ndhC-ndhK-ndhJ(ndhCKJ) to investigate the role of NAD(P)H dehydrogenase(NDH)-dependent cyclic electron transport around PSI in an increase in photosynthesis by L-NaHSO3.After the treatment of tobacco leaves with L-NaHSO3(10 μmol L-1),the NDH-dependent cyclic electron transport,monitored by a transient post-illumination increase in Chl fluorescence and the amount of NDH,was notably up-regulated in wild type(WT).The NDH-dependent cyclic electron transport was severely impaired in ndhCKJ and was not significantly affected by treatment with L-NaHSO3.Accordingly,the NDH-dependent transthylakoid membrane proton gradient(pH),as reflected by the slow phase of millisecond-delayed light emission(ms-DLE),was increased by L-NaHSO3 in WT,but not in ndhCKJ;the enhancement of cyclic photophosphorylation(PSP) activity by L-NaHSO3 was more obvious in WT than ndhCKJ.The accumulation of both superoxide and hydrogen peroxide was reduced in WT when subjected to L-NaHSO3 treatment,but not in ndhCKJ.Furthermore,the increase of photosynthetic O 2 evolution rate by L-NaHSO3 was more significant in WT than in ndhCKJ.We therefore conclude that L-NaHSO3 alleviates the photo-oxidative damage by the enhancement of NDH-dependent cyclic PSP,thereby improving photosynthesis. 展开更多
关键词 循环电子传递 光合磷酸化 光合作用 氧化损伤 脱氢酶 NAD 低浓度 烟草
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