尼克酰胺-N-甲基转移酶在链脲佐菌素致糖尿病猴胰岛中的高表达及意义

目的:本文旨在明确尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在链脲佐菌素(STZ)致糖尿病猴胰腺中的表达及其定位,进而分析NNMT在β细胞损伤中的重要作用。方法:应用基因芯片技术筛选STZ致糖尿病猴胰腺组织差异表达基因,选择NNMT作为研究对象。半定量RT-PCR及Western印迹法分别从mRNA及蛋白水平验证该差异,然后应用免疫组化技术观察该蛋白在胰腺内外分泌细胞中的表达情况。结果:NNMT在正常猴胰腺中仅有微弱表达,但在STZ致糖尿病猴胰腺中其mRNA及蛋白水平均明显上调。免疫组化结果显示该差异表达主要表现在胰岛β细胞分布区。结论:NNMT可以催化对维持细胞功能极为重要的尼克酰胺甲基化,其在糖尿病β细胞内表达上调可能会引起细胞内能量代谢障碍而导致β细胞损伤。

NNMT基因重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达

目的利用pGEX-4T-2表达系统表达制备尼克酰胺N-甲基转移酶(NNMT)抗原。方法根据NCBI核苷酸数据库编码为gi:12652950人NNMTcDNA序列,设计合成编码NNMT的DNA引物,并分别在5'端和3'端设计BamHI和XhoI位点,利用RT-PCR从人肝组织中克隆NNMT基因,经T-A克隆、亚克隆至pGEX-4T-2表达载体,重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),经异丙基-β-D-硫代乳糖苷诱导表达,Glu-tathioneSepharose4B亲和层析制备融合蛋白(GST-NNMT)。通过DNA测序来证实质粒pGEX-4T-2DNNMT的正确性,SDS-PAGE电泳以及Western-blot判断GST-NNMT蛋白的准确性。结果限制性内切酶和DNA测序结果表明,编码NNMT蛋白的DNA序列准确插入到pGEX-4T-2多克隆位点,成功构建表达质粒pGEX-4T-2DNNMT。菌液超声破碎后,融合蛋白主要存在于裂解上清液中,表达量约占菌体总蛋白表达量的20%,每升菌液可表达融合蛋白约4.5mg。Western-blot证实制备的蛋白为GST-NNMT。结论成功地利用基因重组技术制备了NNMT,为制备抗NNMT单克隆抗体和ELISA试剂盒打下基础。

NNMT基因在肿瘤中的研究

烟酰胺N-甲基转移酶（NNMT）是一种S-腺苷-L蛋氨酸（SAM）依赖性胞质酶，在多种药物和异型生物质的生物转化和解毒中起重要作用。近年来研究发现，NNMT在多种肿瘤中异常表达，可能与肿瘤的发生、发展以及放化疗抵抗密切相关。