烟酰胺N-甲基转移酶的研究进展

烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)是一种甲基化酶,在体内能使烟酰胺(NAM)甲基化,生成N1-甲基烟酰胺(MNAM)从体内排出。近来的研究表明NNMT除了能够清除NAM外,还可以通过消耗甲基供体及生成活性代谢产物参与脂肪及肝脏等组织的多种代谢途径调节。本文对近年来研究发现的NNMT在生理和病理状态下的作用以及治疗干预新途径进行综述。

尼克酰胺N-甲基化酶基因多态性对血清同型半胱氨酸的影响

目的探讨尼克酰胺N-甲基化酶(NNMT)A/G基因多态性与血清总同型半胱氨酸(tHcy)水平的关系,及其与叶酸和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T多态性的相互作用。方法采用横断面研究,选择日本某公司健康男性员工221例(40～64岁)为研究对象,应用LightTyper溶解曲线法和PCR-RLFP的方法分别检测NNMT A/G和MTHFR/C677T基因型。结果NNMT A/G各基因型受检者的血清tHcy水平间差异无统计学意义(P=0.254)。低叶酸水平者中NNMT GG基因型者与A等位基因携带者(GG和AA+AG)的tHcy水平间差异有统计学意义(P=0.029),而这种差异在中、高叶酸水平者间均无统计学意义(P值分别为0.428、0.871);叶酸与NNMT A/G基因多态性存在相互作用(P=0.008)。低叶酸水平者NNMT A/G和MTHFR C677T两种基因型存在相互作用(P=0.034),携带NNMT GG基因的MTHFR TT基因型者其tHcy浓度与其他基因型个体间差异有统计学意义(P<0.001)。结论NNMTA/G多态性不是影响日本健康男性血清tHcy水平的独立危险因素,但其可能与叶酸、MTHFR C677T多态性存在相互作用而影响血清tHcy水平。

烟酰胺-N-甲基转移酶在胃癌中高表达并与预后负相关:基于生物信息物信息学方法

目的探讨烟酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在胃癌中的表达、生物学功能和临床病理学意义。方法运用公共数据库GEO、Oncomine及TCGA分析筛选与胃癌分型和临床预后相关的基因;利用STRING、GSEA、DAVID、Cytoscape等软件分析预测与候选基因相关的分子通路,构建蛋白质相互作用关系网络;通过q RT-PCR分析候选基因在28例胃癌和配对癌旁组织中m RNA的差异表达;CCK8增殖实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室细胞运动实验等分析NNMT表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果NNMT在多个数据库分析中呈高表达且与胃癌预后负相关;通路分析显示,NNMT高表达与细胞外基质受体和细胞黏附分子等细胞粘附相关通路以及细胞因子受体等分子通路相关;而NNMT低表达可能与碱基错配修复和核黄素代谢等生物过程相关。蛋白相互作用分析显示,NNMT可能与AURKA等16个差异表达的蛋白存在相互作用关系,且与TAGLN、PTRF、AKAP12、IGF2BP2蛋白存在较高的共表达趋势。在临床组织标本中,q RT-PCR结果显示,胃癌组织中NNMTm RNA的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。在胃癌细胞系中,NNMT的过表达可显著促进细胞增殖、侵袭和迁移,而NNMT敲除可对细胞增殖、侵袭和迁移产生明显的抑制作用。结论NNMT在胃癌中异常高表达并促进胃癌细胞的增殖、侵袭和转移;NNMT高水平表达与胃癌患者预后呈负相关,提示NNMT可能为胃癌预后相关分子。

小鼠烟酰胺N-甲基转移酶基因的克隆及其表达

目的克隆和表达小鼠烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)基因。方法设计特异引物,利用逆转录PCR克隆小鼠NNMT编码cDNA序列,并进行序列测定;然后通过PCR扩增,双酶切回收cDNA片段定向重组到载体pEGFP-N3中,采用PCR和酶切鉴定重组表达质粒;最后将其转染到真核细胞中,通过Western杂交检测其表达,用激光共聚焦显微镜检测其细胞分布。结果经RT-PCR获得了小鼠NNMT的编码cDNA序列,经测序证实克隆序列完全正确;PCR和酶切鉴定表明绿色荧光蛋白(GFP)标记的NNMT表达质粒pNNMT-GFP成功构建;转染至HEK293T细胞中,Western杂交检测到绿色荧光蛋白融合的NNMT特异表达,显微观察表明NNMT分布在细胞质中。结论成功构建了NNMT的表达质粒,并在小鼠中实现其表达。

尼克酰胺-N-甲基转移酶在肺腺癌间质中的表达及其生物学功能

目的探讨尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在肺腺癌间质中的表达水平及过表达NNMT对肺腺癌细胞生物学功能的影响。方法(1)收集150例肺腺癌患者手术切除的组织标本。免疫组织化学染色检测癌组织和间质细胞中NNMT的表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征及预后间的关系。(2)分别转染过表达NNMT质粒(NNMT组)和对照质粒(control组)构建稳定表达NNMT的肺成纤维细胞系HFL-1,采用荧光定量PCR(qPCR)、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法(Western blot)检测NNMT表达水平。(3)收集过表达NNMT及control组HFL-1细胞的培养上清,分别和肺腺癌A549、PC9细胞进行共培养,通过细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell侵袭实验以及划痕愈合实验比较2种培养液对A549、PC9细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。结果(1)免疫组化染色显示,150例患者组织标本中65例癌细胞中NNMT呈高表达,83例间质细胞中NNMT呈高表达。有淋巴结转移和病理分期Ⅲ~Ⅳ期患者肿瘤间质细胞中NNMT高表达比例较高,且肿瘤间质中高表达NNMT患者的总生存率明显低于低表达者。(2)成功构建了稳定过表达NNMT的HFL-1细胞,Western blot、qPCR、细胞免疫荧光染色均提示NNMT组NNMT表达高于control组。(3)细胞共培养结果显示,与control组相比,表达NNMT的肺成纤维细胞系的培养液可以显著促进A549和PC9细胞的增殖、克隆形成、迁移以及侵袭。结论肿瘤间质表达的NNMT与肺腺癌的恶性进展密切相关,可能是肿瘤靶向生物治疗的潜在靶点。

不同运动模式的减肥效果与烟酰胺N-甲基转移酶表达的相关性

目的:分析不同运动模式对大鼠的减肥效果以及脂肪和肝脏组织中烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)表达的影响。方法:根据不同的运动训练模式,将60只DA大鼠随机分为安静对照组、有氧运动组和无氧运动组各20只,在运动前和运动训练6周结束后,对3组大鼠的体重、体长进行测量,并对Lipschitz指数进行计算;运动训练6周结束后,采用Western blot免疫印迹法测定根部和脂肪组织NNMT蛋白的表达。结果:6周运动训练结束后,与安静对照组比较,有氧运动组、无氧运动组大鼠的体重、Lipschitz指数均有明显的降低,组间差异有统计学意义(P<0.05);6周运动训练结束后,与安静对照组比较,有氧运动组、无氧运动组大鼠脂肪组织的NNMT蛋白表达均明显提高,而肝脏组织中的NNMT蛋白表达均明显降低,其中无氧运动组脂肪组织的NNMT蛋白表达提高程度明显大于有氧运动组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:有氧和无氧运动训练对大鼠均能产生明显的减肥效果,并且分别对脂肪和肝脏组织NNMT蛋白表达产生明显的提升和抑制作用,而无氧运动对脂肪组织NNMT蛋白表达的提升程度明显强于有氧运动。

烟酰胺N甲基转移酶在食管癌中的表达及机制研究

目的探讨烟酰胺N甲基转移酶(NNMT)在食管癌中的表达及机制。方法采用免疫组化法检测84例食管癌及癌旁正常组织中NNMT的表达,将siRNA NC(对照组)、siRNA NNMT(siRNA组)转染到EC9706食管癌细胞,Realtime PCR检测NNMT mRNA表达,CCK-8实验检测细胞活力,Hoechst染色检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测NNMT、Wnt1a、β-catenin、CyclinD1、MMP-9蛋白表达。结果NNMT在食管癌组织(59/84,70.23%)中的阳性表达显著高于癌旁正常组织(4/84,4.69%)(χ^(2)=76.825,P<0.05)。与对照组比较,siRNA组NNMT mRNA[(0.56±0.05)vs(1.00±0.10),t=5.903,P<0.05]及蛋白表达量[(0.74±0.07)vs(1.56±0.16),t=7.321,P<0.05]均下调,细胞活力[(0.39±0.04)vs(0.62±0.06),t=5.832,P<0.05]降低,细胞凋亡率[(32.46±3.24)%vs(3.31±0.32)%,t=6.431,P<0.05]提高,细胞侵袭数目[(32.47±3.25)vs(189.32±18.90),t=6.321,P<0.05]减少,Wnt1a[(0.41±0.04)vs(0.15±0.01),t=5.842,P<0.05]、β-catenin[(0.34±0.03)vs(0.17±0.02),t=5.216,P<0.05]、CyclinD1[(1.12±013)vs(0.39±0.04),t=6.438,P<0.05]、MMP-9[(0.87±0.09)vs(0.31±0.03),t=5.128,P<0.05]表达量均下调。结论NNMT在食管癌组织中高表达,下调NNMT可以抑制EC9706食管癌细胞增殖与侵袭,与阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。

NNMT在大肠腺癌与大肠腺瘤的表达对比及对大肠腺癌短期生存的影响

目的:探究与分析烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)在大肠腺癌与大肠腺瘤的表达差异及对大肠腺癌短期生存的影响。方法:选取2017年2月-2019年2月福建省立医院南院外科手术或内镜下取材的正常大肠黏膜组、大肠腺瘤组及大肠腺癌组,各50例。对比NNMT mRNA及其蛋白在正常大肠黏膜组、大肠腺瘤组及大肠腺癌组组织中相对表达量,分析NNMT表达与大肠腺癌临床病理因素的关系,对比不同NNMT表达情况下大肠腺癌患者短期生存期。结果:大肠腺瘤组、大肠腺癌组NNMT mRNA及其蛋白表达量均高于正常大肠黏膜组,大肠腺癌组NNMT mRNA及其蛋白表达量均高于大肠腺瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同NNMT表达情况大肠癌患者的组织学分级比较,差异有统计学意义(P<0.05)。大肠腺癌患者均接受为期3年的随访,NNMT阳性表达患者3年生存率为50.00%(14/28),低于NNMT阴性表达患者的90.91%(20/22),差异有统计学意义(χ^(2)=9.475,P=0.002)。结论:NNMT在大肠腺瘤与大肠腺癌组织中的表达存在明显的差异性,NNMT阳性表达患者的短期生存率较低。

鼻咽癌细胞体外诱导肿瘤相关成纤维细胞形成并上调NNMT表达

目的:探讨烟酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中的表达。方法:分别采用条件培养基(CM)和Transwell小室两种共培养模式建立CAFs体外诱导模型,将人胚肺成纤维细胞MRC-5与鼻咽癌细胞系5-8F共培养48 h,显微镜下观察细胞形态学变化。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测NNMT及CAFs相关标志物[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)及波形蛋白(Vimentin)]基因表达,CCK-8法检测细胞增殖能力。分离纯化头颈肿瘤来源CAFs,RT-qPCR和Western blotting法检测CAFs相关标志物及NNMT的表达。结果:两种共培养模式均能成功诱导并上调MRC-5细胞中NNMT、α-SMA、FAP、FSP-1、Vimentin基因表达(P<0.05),其中Transwell小室共培养模式诱导效果较好。鼻咽癌细胞系5-8F-CM亦能促进MRC-5细胞生长;头颈肿瘤来源的CAFs中FAP、FSP-1、Vimentin、IL-6、NNMT表达量均升高(均P<0.05)。结论:Transwell小室共培养模式是体外诱导CAFs形成的良好建模方式,NNMT在CAFs中的表达上调。

尼克酰胺-N-甲基转移酶在多种肿瘤组织中的表达及其在甲状腺乳头状癌中的预后价值

目的探讨尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在多种肿瘤组织中的表达及其在甲状腺乳头状癌中的预后价值。方法收集2016年1月至2021年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院和浙江中医药大学附属第三医院168例结直肠癌、75例胃癌、178例肺癌、15例肝癌、60例甲状腺癌、7例前列腺癌、74例乳腺癌、14例肾癌的手术切除组织石蜡样本,其中58例甲状腺乳头状癌及另外19例甲状腺炎组织样本收集时间为2016年1月至12月。制备免疫组织化学试剂盒,并进行性能测试。选择胃癌、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌组织标本及癌旁组织标本(距肿瘤边缘3 cm)和正常组织标本(距癌旁组织边缘5 cm以上)。采用免疫组织化学试剂盒检测正常组织标本、不同肿瘤组织及其癌旁组织中NNMT蛋白的表达;使用X-tile软件结合甲状腺乳头状癌肿瘤组织和癌旁组织NNMT诊断肿瘤的受试者工作特征曲线,明确NNMT诊断肿瘤的最佳临界值为41.5,NNMT蛋白低表达为<41.5,高表达为≥41.5。比较不同临床病理特征甲状腺乳头状癌患者的NNMT蛋白表达情况;采用Kaplan-Meier法分析甲状腺乳头状癌患者的总生存;采用Cox比例风险模型对总生存的影响因素进行多因素分析。结果制备的免疫组织化学试剂盒有效期至少为12个月,具有良好的批内、批间重复性及良好的稳定性和特异性。NNMT蛋白在结直肠组织、肺组织、甲状腺组织、前列腺组织、乳腺组织、肾组织以及胃组织中均不表达或偶见低表达。NNMT蛋白在结直肠癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、甲状腺癌、肺癌、前列腺癌组织中均高表达;在相应的癌旁组织中均低表达。甲状腺炎组织、甲状腺乳头状癌组织以及癌旁组织中NNMT蛋白高表达率分别为15.79%(3/19)、68.97%(40/58)、31.03%(18/58),甲状腺乳头状癌组织NNMT蛋白高表达率高于甲状腺炎组织和癌旁组织。甲状腺乳头状癌患者中,NNMT蛋白高表达组40例,低表达组18例。不同年龄、性别、分化程度、肿块长径、TNM分期、淋巴结转移情况、血清抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平患者的NNMT蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。58例患者中位总生存时间为18.5个月,5年总生存率为90.0%;肿块长径≥2 cm患者的总生存较肿块长径<2 cm患者差(P<0.001);有淋巴结转移患者的总生存较无淋巴结转移患者差(P=0.041);NNMT蛋白高表达患者总生存较低表达患者差,血清TgAb高水平患者总生存较血清TgAb低水平患者差,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。肿块长径(HR=35.56,95%CI 2.64~478.25,P=0.007)、NNMT蛋白表达(HR=308.12,95%CI 2.21~42958.20,P=0.023)、血清TgAb水平(HR=142.85,95%CI 1.88~10854.25,P=0.025)为甲状腺乳头状癌患者总生存的独立影响因素。结论NNMT在多种肿瘤组织中高表达。NNMT表达与甲状腺乳头状癌患者的预后相关,NNMT高表达的患者较低表达患者预后差。

GATA结合蛋白3和烟酰胺-N-甲基转移酶在胃癌组织的表达及其临床意义

目的:探讨GATA结合蛋白3(GATA3)和烟酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在胃癌组织的表达,其各自与胃癌患者临床特征的关系。方法:选取2019年1月至2023年2月广东医科大学附属医院收治的88例胃癌患者组织及对应癌旁组织标本,采用免疫组织化学方法检测组织标本中GATA3和NNMT表达水平,应用χ^(2)检验分析其表达与胃癌患者临床特征的关系。结果:胃癌组织中GATA3表达率为40.91%(36/88),明显低于对应癌旁组织[77.27%(68/88)],差异有统计学意义(χ^(2)=24.068,P<0.01)。GATA3表达水平与胃癌患者组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(χ^(2)=5.892、4.346、4.676,P<0.05),GATA3表达水平与胃癌患者年龄、肿瘤大小、性别无明显相关(χ^(2)=0.050、0.004、1.411,P>0.05)。胃癌组织中NNMT表达率为71.59%(63/88),明显高于对应癌旁组织[36.36%(32/88)],差异有统计学意义(χ^(2)=21.980,P<0.01)。NNMT表达水平与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小明显相关(χ^(2)=4.130、5.8420、5.965,P<0.05),NNMT表达水平与胃癌患者年龄、组织学分化程度、性别无明显相关(χ^(2)=0.034、0.060、0.144,P>0.05)。结论:胃癌组织中GATA3低表达、胃癌组织中NNMT高表达,GATA3和NNMT均为胃癌患者预后不良的影响因素。

尼克酰胺N-甲基转移酶作为潜在的肿瘤标志物的研究进展

已知临床应用肿瘤标志物可有效提高肿瘤的早期诊断、预后判定和靶向治疗效果。近年来,基因芯片和蛋白组学技术的广泛开展有力地推动了新的肿瘤标志物的发现和鉴定。尼克酰胺N-甲基转移酶(nicotinamide N-methyltransferase,NNMT)即是在这些技术的推动下新近被筛选并鉴定的蛋白之一,其在多种肿瘤组织中差异表达,且研究发现它与肿瘤细胞增殖、转移及耐放化疗等多种特征性生物学功能密切相关,提示NNMT可作为潜在的肿瘤辅助诊断、个体化和靶向治疗的标志物。本文就NNMT作为潜在的肿瘤标志物的最新研究进展进行综述。

烟酰胺N甲基转移酶和肿瘤坏死因子受体相关蛋白1在食管癌组织的表达及临床意义

目的:观察烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)和肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在食管癌组织中的表达水平,分析NNMT和TRAP1与食管癌临床病理因素之间的关系。方法:选取2018年3月至2022年10月广东医科大学附属医院治疗的73例食管癌患者的癌组织和癌旁组织标本作为研究对象,通过免疫组织化学法检测上述组织中NNMT和TRAP1表达,采用χ^(2)检验分析NNMT和TRAP1的表达与食管癌临床病理特征的关系。结果:NNMT在食管癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织[75.34%(55/73)比21.92%(16/73)],差异有统计学意义(χ^(2)=41.703,P<0.01)。NNMT表达水平与食管癌患者淋巴结转移、TNM分期、组织学分化程度明显相关(χ^(2)=9.156、5.095、4.434,P<0.05),NNMT表达水平与食管癌患者性别、年龄无明显相关(χ^(2)=0.004、0.044,P>0.05)。TRAP1在食管癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织[65.75%(48/73)比12.33%(9/73)],两者差异有统计学意义(χ^(2)=43.774,P<0.01)。TRAP1表达水平与食管癌患者淋巴结转移、TNM分期明显相关(χ^(2)=4.544、4.561,P<0.05),TRAP1表达水平与食管癌患者组织学分化程度、性别、年龄无明显相关(χ^(2)=0.268、0.031、0.218,P>0.05)。结论:食管癌组织中NNMT和TRAP1表达水平升高,NNMT和TRAP1表达与食管癌的发生发展呈明显相关。

尼克酰胺转甲基酶、转化生长因子β1及Smad2在胃癌前病变中的表达

目的:探讨尼克酰胺转甲基酶(NNMT)、转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad2在胃癌前病变(PLGC)胃黏膜组织中的表达。方法:72只SD大鼠随机数字法分为正常组和模型组,每组36只,模型组大鼠按5 ml/kg灌胃200μg/ml N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),正常组给予等量生理盐水,造模时间8周,观察造模开始第10、22、34周大鼠胃黏膜组织变化及NNMT、TGF-β1、Smad2的表达情况,组间比较采用t检验。结果:正常组大鼠胃黏膜上皮细胞完整,腺体排列整齐,模型组随着造模时间的延长,炎性细胞浸润更加明显,腺体排列紊乱或扩张,并出现异型增生。正常组NNMT、TGF-β1、Smad2 mRNA表达量低于模型组第10天(1.00±0.10比1.37±0.13、1.00±0.10比1.32±0.12、1.00±0.10比1.29±0.13,t=5.746、5.903、5.903,P<0.01),正常组NNMT、TGF-β1、Smad2蛋白表达量低于模型组第10天(0.15±0.01比0.42±0.04、0.12±0.01比0.64±0.06、0.23±0.02比0.72±0.07,t=5.952、5.854、5.898,P<0.01)。正常组NNMT、TGF-β1、Smad2 mRNA表达量低于模型组第22天(1.00±0.10比1.67±0.13、1.00±0.10比1.62±0.16、1.00±0.10比1.59±0.16,t=5.945、6.136、6.348,P<0.01),正常组NNMT、TGF-β1、Smad2蛋白表达量低于模型组第22天(0.22±0.02比0.64±0.06、0.11±0.01比0.45±0.04、0.14±0.01比0.65±0.06,t=6.234、6.385、6.461,P<0.01)。正常组NNMT、TGF-β1、Smad2 mRNA表达量低于模型组第34天(1.00±0.10比1.86±0.19、1.00±0.10比1.82±0.18、1.00±0.10比1.76±0.17,t=6.237、6.341、6.926,P<0.01),正常组NNMT、TGF-β1、Smad2蛋白表达量低于模型组第34天(0.23±0.02比1.23±0.12、0.17±0.01比1.23±0.12、0.22±0.02比0.98±0.10,t=6.925、6.345、6.126,P<0.01)。结论:NNMT、TGF-β1及Smad2参与PLGC的发生与发展。