Response Surface Optimization of Nigella glandulifera Freyn Seed Oil Yield by Supercritical Carbon Dioxide Extraction

Supercritical carbon dioxide （SC-CO2） extraction was employed to extract oil from Nigella glandulifera Freyn seed in this study. Response surface methodology （RSM） was applied to evaluate the effects of the process parameters （pressure, temperature, and CO2 flow rate） on oil yield of N. glandulifera seed. A Box-Behnken design was used to optimize the extraction parameters. The analysis of variance indicated that the linear coefficients of pressure and CO2 flow rate, the quadratic term coefficients of pressure and temperature and the interactions between pressure and temperature, as well as temperature and CO2 flow rate, had significant effects on the oil yield （P〈0.05）. The optimal conditions to obtain the maximum oil yield from N. glandulifera seed were pressure 30.84 MPa, temperature 40.57°C, and CO2 flow rate 22.00 L h-1. Under these optimal conditions, the yield of oil was predicted to be 38.19%. The validation experiment results agreed with the predicted values. The fatty acid composition of N. glandulifera seed oil extracted using SC-CO2 was compared with that of oil obtained by Soxhlet method. The results showed that the fatty acid compositions of oil extracted by the two methods were similar. Identification of oil compounds with gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） showed that the contents of unsaturated fatty acids linoleic acid （48.30%）, oleic acid （22.28%） and saturated fatty acids palmitic acid （16.65%）, stearic acid （4.17%） were the most abundant fatty acids in seed oil from N. glandulifera.

瘤果黑种草中黄酮类成分的分离与结构鉴定(Ⅰ)

目的研究中药瘤果黑种草(Nigella glandulifera Freyn et Sint.)全草的化学成分。方法采用正相硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱以及高效液相色谱等手段进行分离纯化,通过理化性质与光谱分析方法鉴定化合物的结构。结果从瘤果黑种草体积分数为70%的乙醇提取物中分离鉴定5个黄酮类化合物,分别为quercetin 3-[6-feruloyl-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside](1)、quercetin 3-sophorotrioside(2)、quercetin 3-glucosyl(1→2)-galactosyl(1→2)-glucoside(3)、quercetin 3-(6-feruloylglucosyl)(1→2)-galactosyl(1→2)-glucoside(4)、芦丁(ru-tin,5)。结论化合物1、2首次从黑种草属植物中分离得到,化合物3、4首次从瘤果黑种草中分离得到。并首次对化合物1的碳谱数据作了全归属。

瘤果黑种草子超临界CO_2流体萃取物的GC-MS分析

目的:研究瘤果黑种草子超临界萃取物的化学成分。方法:采用气相色谱-质谱(GC-MS)法对瘤果黑种草子超临界CO2流体萃取物的化学成分进行分析,并通过面积归一化法对各色谱峰进行定量分析。结果:从瘤果黑种草子超临界CO2流体萃取物中共鉴定出26种化合物,其中挥发性成分16种,脂肪酸10种。结论:挥发性成分以烯酸、酮为主,脂肪酸以不饱和脂肪酸为主,与其活血通经等药理作用相符。

维吾尔药黑种草子中总黄酮含量的测定

目的采用比色法测定维吾尔药黑种草子中总黄酮的含量。方法以芦丁作对照品,以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠体系为显色剂,检测波长为500 nm。结果线性范围为0.008-0.040 mg·ml^-1,平均回收率为98.2%,相对标准偏差（RSD）为0.55%。结论该法为控制维吾尔药黑种草子的内在质量提供了依据。

顶空固相微萃取气质联用分析瘤果黑种草子挥发性成分

采用顶空固相微萃取气质联用技术分析测定了瘤果黑种草子中的挥发性成分,结果共分离得到15种成分,鉴定并确认了其中的12种成分,占成分总量的94.8%,其挥发性成分主要为百里醌(47.62%)、百里香烯(23.93%)、α-侧柏烯(11.21%)、长叶烯(2.90%)。为更深入开发利用此新疆特色资源提供了科学依据。

瘤果黑种草子总皂苷提取工艺研究

目的研究瘤果黑种草子总皂苷的含量测定方法及提取工艺。方法采用比色法测定瘤果黑种草子总皂苷,并采用正交设计优选其提取工艺。结果对照品浓度在49.78～132.75μg/mL范围内线性关系良好(r=0.997 1),平均回收率为102.80%,相对标准偏差(RSD)为1.69%(n=6);瘤果黑种草子总皂苷的最佳提取工艺为8倍量的30%乙醇在70℃水浴中提取3次,1h/次。结论比色法用于测定瘤果黑种草子总皂苷含量简单可行、重复性好,提取工艺稳定可行。

黑种草子总皂苷对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:研究黑种草子总皂苷提取物(TSNG)对人宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移、凋亡和自噬等生物学行为的影响。方法:将SiHa细胞分为空白对照组和不同浓度(0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.4、1.6、1.8 mg/mL)的TSNG作用组,以及10μmol/L羟氯喹(HCQ)干预组;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的生长抑制率;划痕实验检测细胞的相对迁移率;流式细胞术Annexin VFITC/PI染色法检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核凋亡现象;单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察细胞内自噬体数量;Western blot实验检测LC3-Ⅱ和p62蛋白表达。结果:与空白对照组相比,TSNG对细胞的生长有抑制作用且呈剂量效应关系(P<0.05或0.01);0.9、1.0、1.1 mg/mL TSNG处理组细胞相对迁移率分别为(20.40±2.49)%、(15.14±0.39)%、(5.05±1.04)%,均低于空白对照组的(36.63±2.52)%(P<0.01);1.0、1.2、1.4 mg/mL TSNG处理组细胞的凋亡率分别为(39.10±0.22)%,(68.37±0.58)%和(80.93±0.12)%,均高于空白对照组的(10.73±0.82)%(P<0.05或0.01);与空白对照组比较,TSNG处理组细胞核表现出凋亡现象细胞数量增多,且细胞内自噬体数量增加,LC3-Ⅱ和p62蛋白表达上升(P<0.05或0.01);相较于TSNG作用组,HCQ预处理组LC3-Ⅱ蛋白表达无显著变化(P>0.05)。结论:TSNG对SiHa细胞体外增殖、迁移表现出明显的抑制作用,并在诱导细胞凋亡的同时阻断细胞自噬流。

维药斯亚旦化学成分研究

目的研究维药斯亚旦的化学成分。方法采用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20等柱色谱以及高效制备液相等手段进行分离纯化,并用化学方法和光谱方法鉴定了化合物的结构。结果从斯亚旦中分离鉴定了10个化合物,分别为:五加苷K(1)、常春藤皂苷元-3-O-α-L-鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(2)、常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃木糖基(1→3)-α-L-鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(3)、quercetin-3-[6-ferulyl-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyrano-side](4)、quercetin-3-sophorotriosides(5)、quercetin-3-glucosyl(1→2)-galactosyl(1→2)-glucoside(6)、quercetin-3-(6-feruloylglu-cosyl)(1→2)-galactosyl(1→2)-glucoside(7)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖(8)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)和芦丁(10)。结论化合物1,4,5为首次从黑种草属中分离得到,化合物6为首次从该种中分离得到。

蒙药成分黑种草的分类学归属及其药效

多种重要的传统蒙药方剂以黑种草子作为主要组分,其含量在2.73%到20%之间.黑种草子的功效为解热、助消化、护牙,主要用于胃寒,肝功能减退,消化不良,肝痛,牙痛等.然而,蒙医专著对入药黑种草种没有确切的分类学鉴定.通过考证传统蒙医权威性专著,结合现代植物形态学分析探讨了蒙医黑种草的分类学归属,得出结论:古代蒙药方剂所用"哈日-赛拉"是家黑种草(Nigella sativa),由于来源不足等原因,现代蒙医用腺毛黑种草(Nigella glandulifera Freyn&Sint)代替.

酶辅助超声法提取黑种草总皂苷的工艺优化

为了提高黑种草总皂苷提取效果,本实验以黑种草总皂苷得率为评价指标,单因素考察酶制剂的选择、酶添加量、乙醇浓度、料液比、酶解超声时间、超声频率以及酶解温度,利用响应面法优化了酶辅助超声法提取黑种草总皂苷的最佳工艺。结果表明,酶辅助超声法提取黑种草总皂苷的最佳工艺条件:酶解温度60℃,乙醇浓度54%,料液比为1∶37 g/mL,酶添加量为0.98%,超声频率为60 kHz,时间为30 min,实际得率为14.09%±0.12%,模型方程理论预测值为14.17%,相对误差小于3%说明该工艺方案可行条件。

CO_2超临界萃取黑种草籽油的成分分析

采用气相色谱-质谱(GC—MS)法对黑种草籽的CO2超临界萃取物进行了成分分析。

RP-RPLC法测定维吾尔药材黑种草子中常春藤皂苷元的含量

目的:建立HPLC法测定维吾尔药材黑种草子中常春藤皂苷元的含量。方法:采用AileniZorbaxCl8柱(5μm,25mm×4.6mm);以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(87:13:0.04:0.02)为流动相,流速:1.0mL·min^(-1)。检测波长210nm;柱温:30℃。结果:常春藤皂苷元的线性范围为2.00～10.00μg·mL^(-1)(r=0.9998);平均回收率(n=6)为99.1%。结论:本法简便,灵敏,专属性强,重复性好,可用于黑种草子的药材的含量测定,控制内在质量。

维药黑种草子中活性成分HE-Ⅲ的大孔树脂纯化工艺研究

目的优选黑种草子中常春藤皂苷元-3-O-[β-D-吡喃木糖基(1→3)-α-L-鼠李糖基(1→2)-α-L-阿拉伯糖基]-28-O-[α-L-鼠李糖基(1→4)-β-D-葡糖基-(1→6)-β-D-葡糖苷](HE-Ⅲ)的大孔树脂纯化工艺。方法通过静态吸附和解吸实验筛选树脂型号,采用单因素实验和正交实验考察HE-Ⅲ的大孔树脂纯化工艺。结果采用AB-8型大孔树脂,最佳纯化工艺为上样液质量浓度0.25 g药材·mL-1,上样流速1.5 BV·h-1,洗脱乙醇体积分数70%,洗脱流速3 BV·h-1。中间体HE-Ⅲ含量达47.97%,收率为76.26%。结论优选的工艺操作简单、稳定可行、重复性好,可推广于工业化生产应用。

瘤果黑种草子总皂苷的长期毒性研究

目的:观察瘤果黑种草子总皂苷连续灌胃给药90天对大鼠产生的毒性反应。方法:给大鼠灌胃不同浓度(分别为35、157和700mg/kg)瘤果黑种草子总皂苷90天,分别于给药45天、90天及停药后17天处死10只大鼠进行血液学、血液生化学及组织病理学检查。结果:瘤果黑种草子总皂苷不同剂量组大鼠在给药及停药恢复期间外观体征、行为活动、体质量、摄食量、血液学、血液生化学及组织病理学检查均未见异常,与正常对照组比较差异均无显著性。结论:瘤果黑种草子总皂苷长期用药对大鼠无明显毒性。