德宏水牛与尼里拉菲水牛及其杂交水牛的细胞遗传学研究

为了弄清河川型水牛与沼泽型水牛杂交后代的核型,以及与其育性和亲本核型的关系,用外周血液淋巴细胞培养法对尼里拉菲水牛、德宏水牛及尼里拉菲水牛×德宏水牛F1代公牛进行淋巴细胞培养,制作染色体标本,并进行G-带染色;利用BEION染色体核型分析系统对染色体标本分别进行染色体核型分析,确定其染色体核型。根据染色体核型分析结果,并结合其育性,分析染色体核型与其育性的关系。结果显示,尼里拉菲水牛核型为2n=50,XY;德宏水牛核型为2n=48,-4,-4,-9,-9,+t(4;9),+t(4;9),XY;尼里拉菲水牛×德宏水牛F1代公牛核型为:2n=49,-4,-9,+t(4;9),XY。

尼里—拉菲奶水牛的RAPD分析

以尼里—拉菲奶水牛基因池为模板,从22条10 bp的随机引物中筛选出17条具有清晰多态条带的引物,从中选取5条,对尼里—拉菲奶水牛基因组DNA进行RAPD扩增,结果得到53条带,其中12条表现多态,多态频率23.85%;根据N e i氏公式计算品种内的遗传相似指数F的平均值为0.9500,遗传距离指数D的平均值为0.0500。

尼里-拉菲水牛及海子水牛瘤胃产甲烷菌多样性比较

试验旨在比较尼里-拉菲水牛及海子水牛瘤胃液中产甲烷菌的多样性,选取成年雌性尼里-拉菲水牛及海子水牛各3头作为试验动物,采用口腔导管法收集瘤胃液,提取瘤胃液总DNA,采用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增16S rDNA,构建16S rDNA基因克隆文库。结果显示,从尼里-拉菲水牛和海子水牛中分别获得73、100条有效序列,均以Methanobrevibacter属为主。其中尼里-拉菲水牛有70条序列(17个OTUs)与已知菌的16S rDNA序列相似性≥97%,占总序列的95.89%,有3条序列(3个OTUs)与已知菌16S rDNA序列相似性处于93%~96%;海子水牛有70条序列(15个OTUs)与已知菌16S rDNA序列相似性≥97%,占总序列的70%,有30条序列(18个OTUs)与已培养菌16S rDNA序列相似性处于84%~96%。尼里-拉菲水牛和海子水牛瘤胃中的SGMT簇序列、RO簇序列所占总序列比例分别为76.71%、21.91%和76.00%、19.00%。系统进化树分析表明,所有序列分别聚集于两大分支上,其中海子水牛有16个OTUs代表序列和尼里-拉菲水牛8个OTUs代表序列聚集在进化树顶端的同一分支上,且系统发育距离与古菌中任何已知相似序列都相隔较远。综上所述,在本试验同等日粮条件下,尼里-拉菲水牛及海子水牛瘤胃内产甲烷菌序列均以Methanobrevibacter属为主,两水牛品种的SGMT簇序列比例基本一致,但尼里-拉菲水牛中的RO簇序列比例更高,海子水牛瘤胃内存在更多的未知产甲烷菌。

热应激对摩拉和尼里-拉菲水牛血液生化指标的影响

【目的】试验旨在探究热应激条件下摩拉和尼里-拉菲水牛的血液生化指标变化规律。【方法】选取体况相近的健康摩拉和尼里-拉菲水牛各11头。试验期划分为热应激期和非应激期,并于各试验期分别进行4次采血,每次间隔1周。测定血清激素浓度、抗氧化指标和离子浓度等生化指标。【结果】摩拉水牛热应激期血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及总胆固醇(CHOL)、丙二醛(MDA)、热休克蛋白70(HSP70)、钾离子(K^(+))、钠离子(Na^(+))、氯离子(Cl^(-))含量均显著高于非应激期(P<0.05),谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、皮质醇(CORT)、瘦素(LEP)、钙离子(Ca^(2+))含量均显著低于非应激期(P<0.05);尼里-拉菲水牛热应激期血清白蛋白(ALB)、CHOL水平及谷氨酰基转移酶(GGT)活性均显著高于非应激期(P<0.05),球蛋白(GLOB)含量显著低于非应激期(P<0.05)。在热应激期,摩拉水牛ALT活性及总蛋白(TP)、GLOB、CHOL、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)含量均显著高于尼里-拉菲水牛(P<0.05),ALB、四碘甲腺原氨酸(T_(4))、K^(+)含量均显著低于尼里-拉菲水牛(P<0.05);在非应激期,摩拉水牛ALT活性、BUN、TG、葡萄糖(GLU)含量及T-AOC均显著高于尼里-拉菲水牛(P<0.05)。【结论】热应激降低了摩拉和尼里-拉菲水牛的内分泌激素水平和抗氧化能力并影响了机体电解质平衡,尼里-拉菲水牛的免疫功能也有一定下降;在热应激条件下,摩拉水牛表现出更强的清除自由基能力,尼里-拉菲水牛表现出更好的代谢、体温调节能力以及电解质代偿能力。

摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因SNPs检测及遗传多样性分析

为研究水牛蛋白激酶AMP活化的催化亚基α2(protein kinase AMP-activated catalytic subunit alpha 2,PRKAA2)基因多态性,本试验以摩拉水牛和尼里-拉菲水牛基因组DNA为模板,扩增PRKAA2基因外显子4及内含子3部分序列,通过常规测序法检测其SNP并进行遗传多样性分析。结果发现,PRKAA2基因外显子4内存在1个SNP位点(c.462G>A),PRKAA2基因内含子3部分序列存在3个SNPs位点(IVS3.557T>C、IVS3.560C>T和IVS3.565G>A)。经遗传多样性分析表明,在c.462G>A位点的野生纯合型和杂合型比突变纯合型更有优势,IVS3.557T>C和IVS3.560C>T位点的突变纯合型为非优势基因型,IVS3.565G>A位点杂合型为优势基因型。IVS3.565G>A位点在摩拉水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态;c.462G>A位点在尼里-拉菲水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态。4个SNPs位点在摩拉水牛群体中均为中度多态;c.462G>A、IVS3.557T>C位点在尼里-拉菲水牛群体中为低度多态,IVS3.560C>T、IVS3.565G>A位点为中度多态。IVS3.557T>C位点在两个水牛群体中杂合度较低。说明摩拉水牛IVS3.565G>A位点和尼里-拉菲水牛c.462G>A位点的基因型频率和基因频率遗传状态不平衡,尼里-拉菲水牛群体中IVS3.557T>C位点遗传变异小,选择潜力不高。4个多态位点可以构建5种单倍型,其中T-C-G-G是摩拉水牛群体和尼里-拉菲水牛群体的优势单倍型。综上,本研究检测的摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因上4个SNPs位点可为水牛标记辅助选择育种提供参考。

广西的尼里-拉菲水牛和摩拉水牛mtDNA D-loop区遗传多样性研究

[目的]探究引入广西南宁的尼里-拉菲水牛和摩拉水牛的mtDNA D-loop区遗传多样性与母系起源。[方法]采用PCR扩增、测序及生物信息学方法。[结果]对从广西南宁采集的52个江河型水牛(尼里-拉菲水牛25个,摩拉水牛27个)mtDNA D-loop序列与GenBank下载的20条尼里-拉菲水牛和23条摩拉水牛序列进行联合分析,共检测到112个变异位点,定义42个单倍型,发现摩拉水牛(Hd:0.934±0.027)与尼里-拉菲水牛的遗传多样性(Hd:0.929±0.017)都很丰富。NJ系统发育树显示尼里-拉菲水牛和摩拉水牛含有江河型和沼泽型水牛mtDNA支系,表明尼里-拉菲水牛和摩拉水牛引入中国后均与沼泽型水牛进行了杂交,在外貌上很难区分。[结论]引入广西南宁的尼里-拉菲水牛和摩拉水牛与沼泽型水牛存在广泛的血缘混杂现象。

两种杂交水牛乳脂肪酸组成的对比

对摩拉×本地、尼里-拉菲×本地两种杂交水牛乳的乳脂肪酸组成进行测定,以分析二者脂肪酸组成的差异。结果表明,摩拉×本地水牛乳脂中,短链和中链的脂肪酸、丁酸(C_(4∶0))、十四酸(C_(14∶0))和9-十六烯酸(C_(16∶1,c9))显著低于尼里-拉菲×本地水牛乳(p<0.05),而长链的脂肪酸、十八酸(C_(18∶0))、二十酸(C_(20∶0))和二十二酸(C_(22∶0))含量显著高于尼里-拉菲×本地水牛乳(p<0.05),其中总长链脂肪酸(LCFA)显著高于尼里-拉菲×本地水牛乳(p<0.05)。两个品种乳脂中饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和多不饱和脂肪(PUFA)含量无显著差异(p>0.05)。

摩拉、尼里/拉菲种公牛促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因序列多态性检测及基因型分析

为了分析摩拉、尼里/拉菲种公牛促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因的遗传多态性,试验对28头摩拉种公牛、40头尼里/拉菲种公牛采用PCR扩增、测序、高分辨率熔解曲线检测的方法对GnRHR基因进行遗传多态性检测。结果表明:摩拉、尼里/拉菲种公牛GnRHR基因存在相同的SNP位点,分别是A13 342G、T13 355G、A13 406T、T17 221C。其中前三个SNP位点位于第一内含子,最后一个SNP位点位于第三外显子,该突变位点使氨基酸编码由酪氨酸变为组氨酸。对于基因分型,摩拉、尼里/拉菲种公牛却出现不同结果,摩拉种公牛13 342位点有2种基因型AA、AG,频率分别为0.607 1,0.329 2;13 355位点有2种基因型TT、TG,频率分别为0.714 3,0.285 7;13 406位点有2种基因型AA、AT,频率分别为0.750 0,0.250 0;17 221位点有2种基因型TT、TC,频率分别为0.750 0,0.250 0。尼里/拉菲种公牛13 342位点有3种基因型AA、AG、GG,频率分别为0.300 0,0.375 0,0.325 0;13 355位点有3种基因型TT、TG、GG,频率分别为0.575 0,0.325 0,0.100 0;13 406位点产生3种基因型AA、AT、TT,频率分别为0.575 0,0.325 0,0.100 0;17 221位点有3种基因型TT、TC、CC,频率分别为0.600 0,0.325 0,0.075 0。尼里/拉菲种公牛检测群体4个SNP位点均处于HardyWeinberg平衡状态(P>0.05)。

广西冬季不同日粮对摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率和活力的影响

为了研究广西冬季不同日粮对摩拉、尼里/拉菲种公牛冷冻精液畸形率和活力的影响,找到冬季饲喂水牛种公牛的最佳日粮,本研究选择广西壮族自治区畜禽品种改良站饲养的(4~15)岁水牛种公牛36头(摩拉20头、尼里/拉菲16头),按照品种相同、年龄结构相仿的原则分为4组,分别饲喂4种不同的日粮。结果显示:摩拉种公牛试验期冻精畸形率分别为26.73%、32.67%、27.13%、16.53%,日粮4冻精畸形率显著低于日粮2(P<0.05);4组间冻精活力无显著差异(P>0.05)。尼里/拉菲种公牛试验期4组冻精畸形率分别为26.11%、40.89%、18.42%、18.46%,日粮3、日粮4冻精畸形率显著低于日粮2(P<0.05);其冻精活力分别为30.90%、28.70%、29.42%、33.81%,4组间冻精活力无显著差异(P>0.05)。分别对摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率与活力进行相关性分析可知,摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率与活力呈强负相关。综合考虑,水牛种公牛在冬季饲喂精料4kg、苜蓿干草1.5 kg、燕麦干草6.5kg、青贮玉米秸秆5kg日粮搭配方案与精料4kg、苜蓿草1.5 kg、燕麦草4.5 kg、鲜象草20 kg日粮搭配方案均能使摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精的畸形率和活力达到较好的效果。