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Microcystin-LR detection based on indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay 被引量:1
1
作者 SHENG Jianwu HE Miao +2 位作者 YU Shaoqing SHI Hanchang QIAN Yi 《Frontiers of Environmental Science & Engineering》 SCIE EI CSCD 2007年第3期329-333,共5页
Microcystins(MCs)are a group of closely related toxic cyclic heptapeptides produced by common cyanobacte-ria,which cause lots of accidents and threatens human health.In this paper,an indirect competitive enzyme-linked... Microcystins(MCs)are a group of closely related toxic cyclic heptapeptides produced by common cyanobacte-ria,which cause lots of accidents and threatens human health.In this paper,an indirect competitive enzyme-linked immu-nosorbent assay(ic-ELISA)was established and used to detect microcystin-LR(MC-LR)in drinking and surface waters.The concentration of coating antigen was 5 mg/mL,the dilution of monoclonal antibody MC10E7 was 1:3000,the dilution of enzyme tracer(goat anti-mouse IgG-peroxidase)was 1:3000,the standard concentration of MC-LR ranged from 0.001 mg/L to 30 mg/L,and o-phenylenediamine was used as substrate.The assay showed high relativity with high performance liquid chromatography(HPLC)with a correlation coefficient of more than 99%.The relative standard deviation was less than 10%,the detection limit was achieved down to 0.01 mg/L and up to 5.1 mg/L.The quantitative detection range was from 0.03 mg/L to 3 mg/L,and the antibody had high specificity for[4-arginine]microcystins.It performed well in spite of the influence of the real samples. 展开更多
关键词 MICROCYSTIN-LR monoclonal antibody indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay(elisa) detection
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水体中微囊藻毒素-LR的间接竞争ELISA检测 被引量:14
2
作者 盛建武 何苗 +2 位作者 余少青 施汉昌 钱易 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1166-1170,共5页
在自制包被完全抗原浓度为5μg/mL、单克隆抗体工作稀释度为1:3000、酶标二抗鼠工作稀释度为1:3000、微囊藻毒素-LR浓度在0.001-30μg/L、显色底物为邻苯二胺,采用间接竞争酶联免疫吸附试验对水体中的微囊藻毒素-LR进行检测,结... 在自制包被完全抗原浓度为5μg/mL、单克隆抗体工作稀释度为1:3000、酶标二抗鼠工作稀释度为1:3000、微囊藻毒素-LR浓度在0.001-30μg/L、显色底物为邻苯二胺,采用间接竞争酶联免疫吸附试验对水体中的微囊藻毒素-LR进行检测,结果表明,该方法与高效液相色谱的检测结果相关系数大于0.99,多次重复实验相对标准偏差小于10%,最低检测限能达到0.01μg/L。定量检测区间为0.01~3μg/L,该方法对[4-精氨酸]微囊藻毒素能特异性识别,对来自实际水样中的干扰有相当的耐受力. 展开更多
关键词 微囊藻毒素-LR 单克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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牛乳过敏原β-乳球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:23
3
作者 布冠好 郑喆 +1 位作者 郑海 罗永康 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期71-76,共6页
检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了牛乳中... 检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了牛乳中β-乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法(ELISA)。确定了包被抗原质量浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶6 400,酶标二抗稀释度为1∶10 000。结果达到批内误差3.87%,批间误差6.51%;检测的线性范围为0.05~1.00μg/mL,标准曲线回归方程y=-1.930 2x-0.124 1,相关系数为0.994 5,说明所建立的方法灵敏度高,具有良好的准确性和重复性。 展开更多
关键词 牛乳 Β-乳球蛋白 过敏原 多克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用 被引量:7
4
作者 孙法良 刁有祥 +2 位作者 孙宁 马艳芳 纪巍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1813-1819,共7页
【目的】制备抗氟苯尼考(FFC)的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫... 【目的】制备抗氟苯尼考(FFC)的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1:102400。最佳包被抗原浓度为0.5μg·ml-1,最佳抗体工作浓度为1:6400,酶标二抗的工作浓度为1:20000。回归方程Y=-0.1516X+0.788(R2=0.9859),检测范围为0.18~500ng·ml-1,检出限为0.18ng·ml-1,批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反应试验中,抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%,与其它药物交叉反应率均小于0.01%,表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18~500ng·g-1在鸡肉中添加,回收率为84.14%~106.1%,变异系数为2.1%~5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体,建立了鸡肉中氟苯尼考残留检测的ELISA方法。结果表明,所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。 展开更多
关键词 氟苯尼考 残留检测 间接竞争 elisa 鸡肉 食品安全
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基于Arah6的花生间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:4
5
作者 闫飞 周宁菱 +4 位作者 罗春萍 鲁俊华 李欣 吴志华 陈红兵 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期303-306,共4页
建立了基于花生主要过敏原蛋白Arah6的间接竞争酶联免疫检测法,实现了对食物中花生的定量检测。利用花生过敏原Arah6纯品免疫新西兰大白兔,制得兔抗Arah6的多克隆抗体,以Arah6纯品作为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的... 建立了基于花生主要过敏原蛋白Arah6的间接竞争酶联免疫检测法,实现了对食物中花生的定量检测。利用花生过敏原Arah6纯品免疫新西兰大白兔,制得兔抗Arah6的多克隆抗体,以Arah6纯品作为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗,确定了包被抗原质量浓度为1μg/mL,一抗最佳稀释度为1:50000,酶标二抗稀释度为1:5000。此检测方法对Arah6的定量检测范围为16.5~10000ng/mL(折合成含花生的含量,约为165ng/mL~100μg/mL),抑制方程为抑制率I=21.418lgC-6.0633(C为Arah6的质量浓度,单位ng/mL),IC50为414.6ng/mL,相关系数R2=0.9989。该检测方法灵敏度高,检测范围广,适用于食品中花生现场快速检测。 展开更多
关键词 花生过敏原 ARA h 6 多克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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两种鮰爱德华菌ELISA快速检测方法的建立与应用 被引量:3
6
作者 张显昱 李强 +3 位作者 李明 黄华 叶仕根 李华 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期175-182,共8页
为了对水产动物致病菌鮰爱德华菌进行早期、快速地检测,以鮰爱德华菌单克隆抗体5D11作为检测抗体,分别建立了间接ELISA和竞争ELISA两种快速检测鮰爱德华菌的方法,并用棋盘滴定法进行了条件的优化。结果显示,间接ELISA实验中采用37℃过... 为了对水产动物致病菌鮰爱德华菌进行早期、快速地检测,以鮰爱德华菌单克隆抗体5D11作为检测抗体,分别建立了间接ELISA和竞争ELISA两种快速检测鮰爱德华菌的方法,并用棋盘滴定法进行了条件的优化。结果显示,间接ELISA实验中采用37℃过夜这种包被方法能有效促进酶标板对细菌的吸附作用,单克隆抗体和二抗的最佳稀释倍数分别为1∶80和1∶1 000,病原菌的检测灵敏度为5×106cells/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,并且可用于对鮰爱德华菌标准菌株及其分离株的快速检测;同时采用棋盘滴定法确定了竞争ELISA实验中包被抗原-抗体最佳工作组合为5×108~1∶80、抗体和竞争抗原比例为3∶7,并制作出了相关系数为0.990 1的标准曲线,该方法特异性强,最低检出限106cells/mL,可在一定范围内对鮰爱德华菌进行定性和定量检测,弥补了间接ELISA的不足。 展开更多
关键词 鮰爱德华菌 检测 间接elisa 竞争elisa
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达氟沙星间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:3
7
作者 李振华 斯坎达尔.买合木提 +1 位作者 魏东 张乃生 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第6期79-81,共3页
将达氟沙星(danofloxacin,DFLX)与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联分别作为免疫原与包被原,达氟沙星为竞争的半抗原,建立间接竞争ELISA检测方法。试验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25μg/L,多抗(DFLX-PcAb)工作浓度... 将达氟沙星(danofloxacin,DFLX)与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联分别作为免疫原与包被原,达氟沙星为竞争的半抗原,建立间接竞争ELISA检测方法。试验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25μg/L,多抗(DFLX-PcAb)工作浓度为1∶10000,酶标二抗的工作浓度为1∶4000,最适检测范围为0.1~10 ng/L,最低检测限为0.2 ng/L,批内和批间变异系数分别为3.81%和6.25%。得到回归方程y=0.7975-0.125x(R2=0.989)和标准曲线,从而建立了DFLX的快速检测残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ci-ELISA)。 展开更多
关键词 达氟沙星 残留检测 间接竞争elisa
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农产品中玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用 被引量:2
8
作者 王东 王刚 饶力群 《安徽农业科学》 CAS 2014年第20期6764-6766,6837,共4页
[目的]建立快速、有效检测农产品中玉米赤霉醇(ZER)残留量的方法。[方法]试验以人工合成的ZER为包被原,ZER为竞争半抗原,两者与一定量的抗玉米赤霉醇单克隆抗体反应,应用间接竞争ELISA法建立玉米赤霉醇单克隆抗体快速检测农产品中... [目的]建立快速、有效检测农产品中玉米赤霉醇(ZER)残留量的方法。[方法]试验以人工合成的ZER为包被原,ZER为竞争半抗原,两者与一定量的抗玉米赤霉醇单克隆抗体反应,应用间接竞争ELISA法建立玉米赤霉醇单克隆抗体快速检测农产品中ZER含量的半定量检测,同时对该ELISA试剂盒进行了调试。[结果]试验建立检测ZER的ELISA方法,其最适包被浓度为1:5000,抗体最适工作浓度为1:2500,酶标二抗的最适工作浓度为1:5000。试剂盒检测限为0.5ng/ml,添加回收率在70.0%-116.0%,变异系数小于20%,在2~8℃条件下可保存90d。[结论]该试验建立的方法可应用于玉米、小麦、高粱等中的玉米赤霉醇的检测,应用前景广阔。 展开更多
关键词 玉米赤霉醇 单克隆抗体 间接竞争 检测限 elisa
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奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:1
9
作者 邵谱 杨正涛 +1 位作者 张乃生 周虚 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第18期7653-7654,7776,共3页
[目的]为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础。[方法]采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原,建立了检测奶牛孕酮含量的间接竞争EHSA方法。[结果]检测奶牛孕酮的间接竞争EHSA的最佳反应条件确定为:最佳包被浓度为100ng/ml,碳酸盐缓冲液... [目的]为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础。[方法]采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原,建立了检测奶牛孕酮含量的间接竞争EHSA方法。[结果]检测奶牛孕酮的间接竞争EHSA的最佳反应条件确定为:最佳包被浓度为100ng/ml,碳酸盐缓冲液的包被效果较好,以4℃过夜+37℃2h佳,最佳封闭液为2%山羊血清,酶标抗体的工作浓度为0.13μg/ml。建立的标准曲线方程为y=-1.8444x-0.1401(R^2=0.9817),检测范围为0~20ng/ml,最低检测限为0.58ng/ml。该标准曲线的批内变异系数和批间变异系数分别为2.22%和2.37%。[结论]该研究建立了定量检测奶牛孕酮的间接竞争EHSA方法。 展开更多
关键词 奶牛孕酮 间接竞争elisa 定量检测
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间接竞争ELISA方法快速检测猪肉组织中的氯丙嗪 被引量:6
10
作者 王敏 王玮 +3 位作者 吕青骎 徐幸莲 周光宏 李春保 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期172-177,共6页
[目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno... [目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),同时优化检测条件并对该方法进行评价。[结果]采用自行制备的特异性鼠抗CPZ单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原包被稀释倍数为1∶10000,单克隆抗体浓度为1μg·mL-1,酶标二抗稀释倍数为1∶1000,最低检测限为0.51 ng·mL-1,线性检测范围为1.37~111.11 ng·mL^-1。线性回归直线方程为y=-1.2526x+2.8532,相关系数(R 2)为0.9866,总变异系数(CV)为6.97%,空白猪肉添加回收率为96.90%~118.79%。[结论]建立的间接竞争ELISA方法特异性强,灵敏度、精密度、准确度和重现性良好,可用于猪肉组织中CPZ残留的快速检测。 展开更多
关键词 氯丙嗪 猪肉 单克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA方法的建立 被引量:4
11
作者 唐颂 李岩松 +5 位作者 尚翠玲 胡盼 卢士英 任洪林 柳增善 周玉 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第4期300-304,共5页
本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(8... 本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(80))为11~292 pg/mL,检测限(IC_(10))为6 pg/mL。玉米赤霉烯酮在玉米面中的加标回收率为81.29%~105.80%。本研究建立的ic-ELISA方法与赭曲霉素A、黄曲霉素B_(1)、呕吐毒素、伏马毒素B_(1)、T-2毒素无交叉反应,可用于玉米面中玉米赤霉烯酮的初筛检测。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 真菌毒素 检测 间接竞争酶联免疫分析(ic-elisa)
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氯霉素间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量:2
12
作者 郭秀丽 赵丽花 +3 位作者 庞永宏 梁建飞 牛斌 魏东 《河南科技学院学报(自然科学版)》 2020年第3期22-26,共5页
为了对动物性食品中氯霉素(CAP)进行快速检测,以CAP与卵清蛋白(OVA)偶联合成的CAP-OVA为包被抗原,CAP为竞争的半抗原,通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA检测方法.结果显示:最佳包被抗原质量浓度为0.25μg/mL,单克隆抗体稀释倍数为1∶3... 为了对动物性食品中氯霉素(CAP)进行快速检测,以CAP与卵清蛋白(OVA)偶联合成的CAP-OVA为包被抗原,CAP为竞争的半抗原,通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA检测方法.结果显示:最佳包被抗原质量浓度为0.25μg/mL,单克隆抗体稀释倍数为1∶32000,酶标二抗稀释倍数为1∶4000,最低检测限为1.01 ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.80%和6.30%,建立的回归方程为y=-10.7x+66.042(R2=0.9969),建立了快速检测氯霉素残留的间接竞争ELISA法. 展开更多
关键词 氯霉素 残留检测 间接竞争elisa
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莱克多巴胺ELISA间接非竞争检测方法的建立
13
作者 周鑫魁 洪霞 +3 位作者 钱滢文 高志莹 吴永宝 刘琦 《中外食品工业(下)》 2014年第2期15-20,共6页
本快速测定方法使用甲醇提取液超声波提取动物源性制品中莱克多巴胺,采用样品与抗体预混的间接非竞争法测定样品中的莱克多巴胺。没有采用常规的间接竞争法,而是预先混合抗体和待测物质,使得检出限底,达到0.0044ng/mL,其含量在0.0... 本快速测定方法使用甲醇提取液超声波提取动物源性制品中莱克多巴胺,采用样品与抗体预混的间接非竞争法测定样品中的莱克多巴胺。没有采用常规的间接竞争法,而是预先混合抗体和待测物质,使得检出限底,达到0.0044ng/mL,其含量在0.0044~11ng/mL浓度范围内呈良好线性关系,相关系数R2=0.9799,回收率在65%~89%之间,具有较好的稳定性、重现性和回收率,能满足实验室的检测要求。 展开更多
关键词 elisa 莱克多巴胺 间接非竞争法 低检出限
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伏马菌素B1免疫学检测方法的研究 被引量:4
14
作者 许金俊 陈飞 +5 位作者 秦爱建 陶建平 彭金彪 邵红霞 金文杰 戴先礼 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1118-1122,共5页
目的制备抗伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)单克隆抗体,在此基础上建立一种可用于定量检测玉米中FB1含量的间接竞争ELISA方法。方法人工合成免疫原BSA-FB1和包被抗原OVA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的单抗,并对... 目的制备抗伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)单克隆抗体,在此基础上建立一种可用于定量检测玉米中FB1含量的间接竞争ELISA方法。方法人工合成免疫原BSA-FB1和包被抗原OVA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的单抗,并对其特性进行鉴定。以OVA-FB1作为包被抗原,FB1为竞争抗原,两者与一定量的抗FB1单抗竞争反应,建立检测FB1的间接竞争ELISA方法,对玉米样品进行初步检测应用。结果获得了1株稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞(命名为5H12-C6-C2)。对间接竞争ELISA方法进行反应条件优化后,建立了检测FB1的标准曲线,回归方程为y=1.113-0.313x,相关系数R2为-0.990,最适可测范围为10ng/ml^1000ng/ml,灵敏度为90.88ng/nl,最低检测限为7.83ng/ml,方法的批内和批间平均变异系数分别为3.24%和2.45%,样品添加平均回收率为94.32%。结论成功地制备了抗FB1特异性单抗,建立了FB1的间接竞争ELISA检测方法,为进一步研制FB1检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 伏马菌素B1 单克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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诺氟沙星免疫学检测方法的建立及优化 被引量:4
15
作者 姜金庆 李广领 +3 位作者 王自良 刘兴友 杨雪峰 黄华国 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第21期148-151,共4页
采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线。对NOR的线性检测范围为0.07~31.8ng/mL,半数抑制质量浓度(IC50)和最低检测限(LOD)分别为1.5ng/mL和0.04ng/mL。检测缓冲液... 采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线。对NOR的线性检测范围为0.07~31.8ng/mL,半数抑制质量浓度(IC50)和最低检测限(LOD)分别为1.5ng/mL和0.04ng/mL。检测缓冲液中pH值和磷酸根离子浓度的最佳参数分别为7.4和10mmol/L;对甲醇和NaOH溶液(30mmol/L)的最佳调整体积分数分别为30%和10%。抗体具有广谱特异性,与环丙沙星(83.3%)、培氟沙星(78.9%)、依诺沙星(68.2%)、恩诺沙星(51.7%)和洛美沙星(41.7%)有较高的交叉反应率,可用于氟喹诺酮类药物(FQs)多残留检测方法研究。 展开更多
关键词 诺氟沙星 氟喹诺酮 间接竞争elisa 多残留检测
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粮油产品T-2毒素单克隆抗体研制及应用 被引量:2
16
作者 张亮 李培武 +3 位作者 张奇 张文 杨青青 朱建国 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期724-729,共6页
以T-2毒素与琥珀酸为原料,通过琥珀酸酐法合成出T-2毒素半抗原T-2HS,再通过活泼酯法,将T-2毒素半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)共价偶联,合成出T-2毒素人工抗原T-2HSBSA和T-2HS-OVA,以T-2HS-BSA作为免疫原,免疫Balb/... 以T-2毒素与琥珀酸为原料,通过琥珀酸酐法合成出T-2毒素半抗原T-2HS,再通过活泼酯法,将T-2毒素半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)共价偶联,合成出T-2毒素人工抗原T-2HSBSA和T-2HS-OVA,以T-2HS-BSA作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经细胞融合和阳性筛选,共获得4株T-2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别是1D6、2A8、2C5和4G3。其中2C5分泌的抗体灵敏度(IC50)最高,达0.13μg/kg,特异性强,与HT-2的交叉反应率仅为4%,与FB1、DON、ZEN无交叉反应。进一步利用该抗体建立了间接竞争ELISA检测方法,最低检测限为0.015μg/kg,检测范围(IC20-IC80)为0.05-57.6μg/kg,该方法对大豆、玉米、花生等粮油产品的检测范围为0.5-576μg/kg,在线性范围内加标回收率为93.5%-107.5%。本研究建立的检测方法可用于大豆、玉米、花生等多种粮油产品中T-2毒素的检测。 展开更多
关键词 T-2毒素 单克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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酶联免疫法检测食品中乳酸链球菌素 被引量:5
17
作者 孟茹 赵贵明 +1 位作者 贾瑜 王振宝 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期509-515,共7页
建立了酶联免疫吸附法来检测乳制品、肉制品和含乳饮料中的乳酸链球菌素含量。在抗乳酸链球菌素多克隆抗体的基础上,建立间接竞争酶联免疫吸附法。所建立的间接竞争ELISA方法的灵敏度为0.1μg/mL,标准曲线范围为0.1~62.5μg/mL,乳制品... 建立了酶联免疫吸附法来检测乳制品、肉制品和含乳饮料中的乳酸链球菌素含量。在抗乳酸链球菌素多克隆抗体的基础上,建立间接竞争酶联免疫吸附法。所建立的间接竞争ELISA方法的灵敏度为0.1μg/mL,标准曲线范围为0.1~62.5μg/mL,乳制品的检测限为1.0μg/mL,肉制品的检测限为0.5μg/g,样本的添加回收率范围在80%~120%之间,变异系数<20%。所建立的间接竞争ELISA方法及制备的相关试剂盒具备准确、快速、简便的优点,能够满足乳制品、肉制品和含乳饮料中乳酸链球菌素含量的检测要求。 展开更多
关键词 乳酸链球菌素 间接竞争酶联免疫吸附法 检测
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DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立 被引量:4
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作者 吕丽兰 张娅 +7 位作者 陆覃昱 邹承武 甘志勇 李冬桂 吴静娜 王艺霖 李鑫生 何丽珊 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第11期2659-2666,共8页
【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全... 【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全抗原。筛选免疫小鼠,制备稳定分泌可识别DPPs抗体的单克隆细胞株,筛选出抗原和抗体最佳工作浓度组合,建立该单抗的ic-ELISA标准曲线,并分析该单抗与6种DPPs的交叉反应率,评估ic-ELISA的广谱性。利用所得抗体与喹硫磷交叉反应最强的特性对采购的柑橘和鲜橙样品进行喹硫磷添加回收试验。【结果】成功合成识别DPPs的人工抗原,包括包被抗原DPPs-OVA和免疫抗原DPPs-BSA。通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、广谱性最强的单克隆细胞株5G_(8)。以0.5μg/mL包被抗原DPPs-OVA、1.0μg/mL抗体5G_(8)2D_(5)为最佳工作浓度组合,将细胞株筛选过程中抗体识别率较高的有机磷农药——对硫磷选定为抑制标准物,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC_(50))为41.78 ng/mL,检测范围(IC_(20)~IC_(80))为3.21~239.59 ng/mL;所建立的ic-ELISA与5种DPPs(蝇毒磷、喹硫磷、甲拌磷、甲基对硫磷和倍硫磷)均存在不同程度的交叉反应,其中以喹硫磷的交叉反应率最高,达19.79%。比较ic-ELISA和气相色谱法(GC)对柑橘和鲜橙样品中喹硫磷的添加回收结果发现,ic-ELISA的添加回收率为75.80%~116.12%,GC的添加回收率介于92.5%~115.00%,2种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA经GC交叉验证准确性较高,可用于快速检测农产品中的喹硫磷残留。 展开更多
关键词 二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs) 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-elisa) 气相色谱法(GC) 农药残留检测
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恩诺沙星完全抗原的合成及兔源多抗血清的制备 被引量:1
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作者 刘莉 张家禾 +1 位作者 袁维峰 孟婷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第6期38-41,共4页
为了合成恩诺沙星(enrofloxacin,EFLX)完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX—OVA,以EFLX—BSA为免疫原免疫兔,以EFLX... 为了合成恩诺沙星(enrofloxacin,EFLX)完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX—OVA,以EFLX—BSA为免疫原免疫兔,以EFLXOVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1:51200以上,其中2号兔效价最高,达到1:204800,敏感性好,半数抑制浓度IC50为169.91ng/mL,检测范围为37.52~302.31ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 恩诺沙星 残留 检测 活化酯法 间接竞争elisa
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恩诺沙星完全抗原的制备与鉴定及其多克隆抗体的制备
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作者 丁丽军 张家禾 +5 位作者 周作红 刘莉 洪伟鸣 孟婷 管远红 左伟勇 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期661-664,共4页
通过活化酯法将小分子的恩诺沙星(EFLX)偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原试验小鼠,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA检测小鼠血清效价,以及Ci-ELISA检测抗体的特... 通过活化酯法将小分子的恩诺沙星(EFLX)偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原试验小鼠,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA检测小鼠血清效价,以及Ci-ELISA检测抗体的特异性和最低检测限。结果表明免疫原和检测原均成功合成,血清效价检测结果第一组为25600,第二组和第三组均大于51200,第二组最高;间接竞争ELISA法结果表明,所获抗体对EFLX特异性强,最低检出限为1.17 ng/mL,IC50值为54.60 ng/mL,检测范围为7.39~403.43 ng/mL。本试验所获得抗体效价高、特异性强,可以为ELISA试剂盒和胶体金试纸条研发提供良好的抗体材料。 展开更多
关键词 恩诺沙星 残留 检测 活化酯法 间接竞争elisa
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