不同培养基对小鼠卵母细胞体外成熟质量及发育潜能的影响

背景:近年,未成熟卵母细胞体外成熟技术的需求逐渐增加。卵母细胞成熟受多种因素影响,其中培养基的选择尤为重要,目前尚无统一方案。目的:用不同成熟培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,研究其对卵母细胞质量及发育潜能的影响。方法:用G-1^(TM)PLUS培养基、CZB培养基和M16培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,并以体内成熟卵母细胞为对照组,比较各组间的体外受精和早期胚胎发育能力。对于各组成熟后卵母细胞,采用免疫荧光方法评估线粒体功能,共聚焦显微镜实时成像系统检测钙震荡情况。结果与结论:①3组之间第一极体排出率无明显差异(P>0.05);②G-1^(TM)PLUS组体外受精率(52.86±11.24)%高于M16组(37.76±6.70)%和CZB组(30.62±5.51)%;CZB组的囊胚率(36.23±6.63)%低于对照组(78.16±4.17)%、G-1^(TM)PLUS组(55.75±7.63)%和M16组(53.36±6.33)%;③与对照组相比,仅CZB组的纺锤体长宽比增加;④CZB组线粒体功能差于对照组、G-1^(TM)PLUS组及M16组,并出现CZB组线粒体异常凝集现象;⑤受精后CZB组及M16组的钙震动频率显著高于G1组和对照组。综上所述,在小鼠卵母细胞体外成熟过程中,G-1^(TM)PLUS、CZB及M16培养基的体外成熟率无差异,但G-1^(TM)PLUS培养基有更高的受精率和囊胚形成率。

抗着丝点抗体阳性患者体外受精结局分析

目的:通过观察抗着丝点抗体(ACA)阳性患者体外受精-胚胎移植和自然试孕结局,探讨此类患者的生育策略。方法:采用病例对照研究回顾性分析2016年6月至2023年6月在浙江省人民医院接受体外受精-胚胎移植治疗且有抗核抗体(ANA)谱检查结果的3955例患者的临床资料。根据ACA结果将所纳入患者分为ACA阳性组和ACA阴性组。采用倾向评分匹配方法对两组进行1∶3配对,分别比较两组体外受精的胚胎结局;并采用自身对照分析不同授精方法和是否应用免疫抑制剂对结局的影响;对ACA阳性患者体外受精失败后的自然试孕和疾病进展进行随访。结果:ACA阳性患者34例,占总病例数的0.86%,占ANA阳性体外受精患者数的2.51%。无论是接受常规体外受精(c-IVF)还是卵胞质内单精子注射(ICSI)的患者,ACA阳性组卵母细胞成熟度和受精情况均与ACA阴性组有明显差异(均P<0.01),且ACA阳性组授精后第三日(D3)次优胚数和D3优胚数均减少(均P<0.05)。5例ACA阳性患者自身ICSI周期相比c-IVF周期双原核(2PN)率未提高(P>0.05),D3优胚数和D3次优胚数减少(均P<0.05)。12例ACA阳性患者经过免疫抑制剂治疗1~2个月后再行c-IVF/ICSI,用药前后获卵和受精情况均未改变(均P>0.05),2PN胚胎卵裂率改善(P<0.05)。ACA阳性组与ACA阴性组移植胚胎数相近,但ACA阳性组胚胎着床率、临床妊娠率显著低于ACA阴性组(均P<0.05),流产率差异无统计学意义(P>0.05)。27例ACA阳性患者体外受精失败后尝试自然试孕或人工授精,共获临床妊娠7例。结论:血清ACA阳性会干扰卵母细胞的成熟和正常受精过程,使用ICSI和免疫抑制剂不能改善受精结局,但ACA阳性患者有可能获得自然妊娠。

NO对小鼠卵母细胞及胚胎发育的影响

目的评价外源性NO对小鼠卵母细胞体内成熟、体外受精及胚胎发育的影响。方法受试雌性小鼠超排卵期间分别腹腔注射NO供体硝普钠(SNP)1.0、5.0和10.0 mg/kg,对照组雌性小鼠注射等量的生理盐水。注射hCG 15 h后处死小鼠,收集卵母细胞进行体外受精和胚胎培养,观察卵母细胞的成熟度、受精率、早期胚胎的发育能力及其形态学变化。结果5.0 mg/kg SNP组M期卵母细胞和M期卵母细胞的比例较对照组和1.0 mg/kg SNP组升高(P<0.05,P<0.01),而受精率降低(P<0.01),10.0 mg/kg SNP组小鼠在注射药物20min后全部死亡;5.0 mg/kg SNP组2-细胞胚胎以后各阶段胚胎的卵裂率低于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P<0.01),并被阻滞在桑葚胚期;5.0 mg/kg SNP组形态异常胚胎的比例高于对照组和1.0 mg/kg SNP组(P<0.01)。结论较高浓度NO抑制卵母细胞体内成熟、体外受精及早期胚胎发育并影响胚胎的质量。

淫羊藿苷对猪早期胚胎体外培养一氧化氮及丙二醛水平的影响

目的研究淫羊藿苷(ICA)单体对猪体外受精早期胚胎体外发育过程中培养液内一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)生成量的影响,探讨其与猪胚胎体外发育效果的关系。方法以NCSU-23培养液为对照组,以添加0.6mg/L淫羊藿苷为实验组(ICA组),通过硝酸还原酶法和硫代巴比妥酸法测定猪体外受精卵体外培养0～48h、48～120h、120～168h培养液滴中NO和MDA水平。结果 ICA组(342枚受精卵)48h卵裂率(74.84%vs63.32%)、120h桑囊率(45.08%vs34.10%)、168h囊胚率(23.38%vs18.04%)均极显著高于对照组(349枚受精卵)(P<0.01)。在猪体外受精卵体外培养0～168h整个过程中,培养液内NO、MDA水平总体均呈上升趋势,但在胚胎发育3个阶段中ICA组平均每枚胚胎NO生成量高于对照组,MDA生成量则低于对照组(P>0.05)。结论 ICA有利于促进猪体外受精早期胚胎的体外发育,可能与其在一定程度上提高NO水平,并同时抑制MDA的生成有关。

人体外与体内成熟卵母细胞发育潜能及妊娠结局的观察

目的观察体外成熟(IVM)与体内成熟人卵母细胞的发育潜能和妊娠结局。方法69例多囊卵巢或多囊卵巢综合征不育患者,分别行IVM治疗49个周期(IVM组)和体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗29个周期(IVF组)。结果IVM组卵母细胞成熟率为65.4%。IVM组和IVF组受精率和卵裂率分别为62.1%和77.2%,60.2%和91.2%,两组受精率无显著性差异(P>0·05),IVM组较IVF组卵裂率降低非常显著(P<0.01)。IVM组和IVF组临床妊娠率和种植率分别为26.5%和12.6%,41.4%和22.9%,IVM组临床妊娠率和种植率较低,但两组无显著性差异(P>0.05)。IVM组和IVF组卵母细胞受精后D2≥4细胞和D3≥6细胞胚胎数占受精卵数(2PN)的比例分别为24.5%和19.4%,67.0%和66.4%,IVM组较IVF组胚胎发育速度慢,两者有非常显著性差异(P<0.01)。IVM组D3优质胚胎形成率(23.7%)较IVF组(58.2%)为低,亦有非常显著性差异(P<0.01)。结论人卵母细胞IVM将成为一种选择性的辅助生殖技术。人卵IVM较体内成熟卵母细胞受精后2PN至卵裂期发育阻滞发生率高,胚胎发育速度慢和优质胚胎形成率低。

小鼠生殖泡期卵母细胞体外培养成熟、受精和胚胎发育的研究

为研究性成熟小鼠生殖泡期(GV)卵母细胞的体外成熟,同时比较体外成熟(IVM)和体内成熟组卵子的受精、胚胎发育情况,机械法分离性成熟小鼠卵巢中的GV期卵母细胞及刺激后的成熟卵母细胞,直接培养于[α-MEM+1 mg/ml Fetuin+10％FCS+1.5 IU/ml rHCG±5 ng/mlrEGF]中,16 h后移入f-HTF+10％FCS体外受精4 h,再在M16+10％FCS中培养72 h。记录其成熟、受精和胚胎发育情况,并与体内成熟的卵子比较。结果:GV期卵母细胞在含HCG培养液中成熟率为89.68％,培养液中添加EGF后,卵子成熟率无显著上升,但受精率、卵裂率均有显著提高(P<0.05)。体内成熟卵子的受精率可达62.83％,卵裂率60.18％;IVM组受精率仅48.92％,卵裂率36.69％,明显低于前者(P<0.01)。结论:小鼠GV期卵母细胞可体外培养成熟、受精和胚胎发育。培养液中添加促性腺激素和EGF都促进卵母细胞体外成熟、受精和胚胎发育能力。但IVM组卵母细胞的受精率、卵裂率低于体内成熟组,培养系统仍需改进。

灵长类卵母细胞体外发育潜能的调控

灵长类卵母细胞细胞质成熟调控研究较为滞后 ,使得体外成熟的灵长类卵母细胞的胚胎发育潜能十分低下。提高其潜能对治疗人类不育症有重要的应用价值 ,并可推动灵长类胚胎发育的研究。基于猕猴卵母细胞质成熟调控研究 ,讨论了无血清成熟培养基中雌激素和孕激素、能量物质、氨基酸对卵母细胞质成熟的影响 ,以及动物年龄和生殖周期与发育潜能的关系。从分子水平进一步解释这些因素的作用 。

影响人类体外受精——胚胎移植成功率的某些因素分析

对137例采用hMG/hCG超排的IVF-ET的结果,分析比较了采卵时不同成熟度卵子的受精率、妊娠组与非妊娠组采卵时卵子的成熟度分布、采卵数、移植时胚胎发育阶段及移植胚胎数等差异。结果表明,采卵时成熟的卵子受精率较高,接近成熟卵子的受精率略低,未成熟卵子的受精率最低,仅达14％左右。妊娠组和非妊娠组卵子成熟度分布无显著差别(P>0.05),但妊娠组平均采卵数显著高于非妊娠组(P<0.01)。两组移植时胚胎发育阶段无显著差异(P>0.05),妊娠组可供移植胚胎数显著高于非妊娠组(P<0.01)。

EGCG用于小鼠裸卵体外培养的研究

以小鼠裸卵为体外培养对象,以添加不同浓度EGCG的HTF和TCM-199为基础培养体系,研究EGCG对小鼠裸卵体外成熟、体外受精及其后期胚胎发育的影响,并分别测定小鼠裸卵细胞内GSH浓度的变化。结果表明:在基础培养体系中添加EGCG对小鼠裸卵作用不明显,不能提高卵母细胞的成熟率,对受精率和胚胎发育率无显著影响。

蛋白质添加剂对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎体外发育的影响

为了探讨蛋白质添加剂对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎体外培养的影响，通过２３３８个卵母细胞，按２×２×２设计方法进行试验，即在体外成熟、体外受精及早期胚胎体外培养三个阶段的培养液中，添加与不添加蛋白质物质（体外成熟与体外培养为发情母牛血清，体外受精为牛血清白蛋白）。试验结果表明，在体外成熟阶段的培养液中，有无发情牛血清对牛卵母细胞的核成熟无显著影响（有血清组为８９％，无血清组为９０％）。但在体外受精阶段，受精液中含有牛血清蛋白质处理组的卵母细胞受精后，分裂率显著地高于无血清蛋白质组（Ｐ＜０．０１，８４％ｖｓ７２％）。同样，在早期胚胎体外培养阶段，含有发情牛血清的培养液大大促进早期胚胎的发育，与无血清组比较，其差异性极显著（Ｐ＜０．０１，３５％ｖｓ２１％）。同时，含血清组的胚胎孵化率亦显著地高于无血清组（Ｐ＜０．０１，６９％ｖｓ４７％）。本研究表明，蛋白质添加剂在ＩＶＦ和ＩＶＣ阶段是必需的，而在ＩＶＭ阶段则不甚重要。