外源NO对香菇热胁迫的缓解机制研究

为探究外源NO对香菇热胁迫的缓解机制,以香菇L135菌株为试验材料,研究外源添加NO对香菇菌丝高温胁迫下氧化损伤的缓解效应。结果表明,高温胁迫明显抑制了香菇菌丝的生长,导致菌丝蜷曲甚至断裂,添加适宜浓度(800μmol·L^(-1))的NO供体(SNP)处理可以有效缓解热胁迫条件下的形态伤害;外源添加SNP处理组与未添加处理组相比,菌丝细胞内过氧化氢及丙二醛的含量均显著下降,热激48和72 h分别下降了17.48%、35.24%和16.70%、19.87%,且胞内超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性均显著提高。综上,添加800μmol·L-1的外源NO能够有效缓解香菇热胁迫,为进一步阐明食用菌抗高温胁迫机制奠定了理论基础。

支气管哮喘与NO浓度的检测研究及临床意义

目的检测支气管哮喘患者在症状急性发作时经口腔呼出气中NO浓度及血浆中NO的浓度,研究NO浓度与哮喘严重程度和治疗效果的关系。方法选择支气管哮喘急性期发作患者30例,测定在急性发作期呼出气体中NO浓度、血浆中NO浓度;经过舒利迭吸入治疗,一吸,一日两次,治疗1个月后再次分别测定NO的浓度。结果支气管哮喘症状急性发作期组患者呼出气以及血浆中NO浓度均明显高于缓解期和正常对照组。结论呼出气体中NO浓度以及血浆中NO的检测为临床哮喘的诊断及治疗效果的判断提供参考。

隔药饼灸对高脂血症兔血浆ET、NO含量的影响

目的研究隔药饼灸对高脂血症兔血浆内皮素(ET)和一氧化氮(NO)含量的影响,阐明隔药饼灸对高脂血症兔ET、NO的调节作用。方法用胆固醇高脂饮食喂养法建立兔高脂血症模型,运用隔药饼灸进行治疗。采用放射免疫法测定治疗后ET的含量,硝酸还原酶法测定NO的含量。结果隔药灸组血浆ET的含量明显低于模型组(P<0.05),但隔药灸组与直接灸组ET含量无统计学差异(P>0.05)。4组血浆NO的含量虽然有模型组<空白组<隔药饼灸组<直接灸组的趋势,但4组之间两两比较经统计学处理无显著性差异(P>0.05)。结论隔药饼灸和直接灸组均对高脂血症兔血浆ET具有明显调节作用,且二者作用相近。对NO的调节作用不明显。

米诺环素对衰老痴呆大鼠脑组织eNOS、iNOS表达的影响

目的观察米诺环素(minocycline)对衰老痴呆大鼠学习记忆和脑组织eNOS、iNOS表达的影响,探讨米诺环素对衰老痴呆脑保护作用机制。方法Wistar大鼠随机分组:假手术组(S组)、痴呆模型组(M组)、米诺环素治疗组(MT组)。酶联免疫吸附法和免疫组织化学法检测大鼠脑组织eNOS、iNOS的含量,行为学检测大鼠记忆学习改变。结果MT、M组与S组大鼠前后两次跳台实验、水迷宫实验的结果有显著性差异(P<0.01),MT组与M组大鼠前后两次跳台实验、水迷宫实验的检测结果有显著性差异(P<0.01)。MT组iNOS表达较M组降低(P<0.01),MT组eNOS表达较M组增高(P<0.01);MT组eNOS、iNOS表达较S组增高(P<0.01);M组eNOS、iNOS表达较S组显著增高(P<0.01)。结论米诺环素能降低衰老痴呆大鼠脑组织iNOS、增强eNOS表达抑制氧化应激反应发挥脑保护作用。

NO/iNOS与关节软骨破坏的相关性

目的探讨关节软骨破坏与一氧化氮/诱导型一氧化氮合成酶(NO/i NOS)动态变化关系.方法40只健康成年Wistar雄性大鼠随机分为对照组(自由活动)和实验组(过度运动训练).于0、1、2、3、6周时采集大鼠全膝关节,4%PFA液固定、石蜡包埋、切片、染色;通过Safranin-O染色观察软骨形态学变化,ELISA法测定血清/关节液中NO/i NOS含量变化,Mankin's评分,统计并分析软骨病理学改变.结果过度运动训练能导致关节软骨从细胞排序紊乱、基质丢失到表面毛糙、裂缝等系列软骨破坏和退变病理改变过程;过度运动训练能使大鼠血清、关节液中NO/i NOS的含量增加,血清NO/i NOS组:1周(48.088±1.534),(3.058±0.073);2周(54.574±0.800),(6.630±0.524);3周(68.020±3.184),(7.384±0.306);6周(104.394±8.094),(11.364±0.882).关节液NO/i NOS组:1周(65.814±1.610),(8.126±0.724);2周为(72.766±2.344),(9.694±0.564);3周(88.816±0.819),(11.326±1.473);6周为(120.204±12.044),(15.166±1.198),并随运动量递增,保持较高浓度水平.结论关节液或血清中NO/i NOS含量变化与关节软骨的破坏程度呈正向关系.

西格列他钠经皮给药对糖尿病小鼠的伤口促愈合作用

目的初步验证过氧化物酶增殖物激活受体泛激动剂西格列他钠对糖尿病小鼠伤口的促愈合作用。方法用过高糖培养基或脂多糖诱导模拟糖尿病患者高糖、炎性的细胞环境,通过细胞计数法和一氧化氮水平检测分析西格列他钠在高糖或炎性环境下对巨噬细胞RAW 264.7的活性和表型的影响;用细胞计数法和细胞划痕实验量化西格列他钠对高糖诱导的角质形成细胞HaCaT增殖和迁移的影响;筛选合适的体内给药浓度,通过糖尿病小鼠伤口模型初步验证西格列他钠水凝胶对糖尿病伤口愈合的促进作用。结果在巨噬细胞实验中,与空白对照组比较,高糖抑制了巨噬细胞RAW 264.7的增殖;与模型组比较,1.6、3.2μg·ml^(-1)的西格列他钠有效地减轻了高糖对巨噬细胞增殖活性的抑制,促进了巨噬细胞由促炎型到抑炎型的转变(P<0.01)。在皮肤细胞实验中,与模型组比较,西格列他钠(6.4μg·ml^(-1))促进了高糖环境下HaCaT细胞的增殖与迁移(P<0.05)。在体内实验中,西格列他钠水凝胶促进了糖尿病小鼠伤口的愈合(P<0.05)。结论西格列他钠作为过氧化物酶增殖物激活受体泛激动剂,可通过抑制慢性炎症、促进角质形成细胞的增殖和迁移促进伤口的愈合。

外源NO对UV-B胁迫下小麦幼苗生长、活性氧组分和光合特性的影响

为了研究外源NO对UV-B胁迫下小麦幼苗生长、活性氧组分以及光合特性的影响,以ML7113小麦为受试材料,以硝普钠(Sodium nitroprusside,SNP)作为外源NO的供体,预先用0.1mmol/L的SNP浸种24h,设置4个处理组:对照组(CK)、紫外线UV-B胁迫处理组(B)、UV-B胁迫和SNP复合处理组(B+SNP)、SNP单独处理组。待幼苗生长7天后取其叶片进行可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、气孔密度、光合色素及叶绿素荧光参数等指标的测定。结果表明,NO供体SNP能显著增加经UV-B胁迫后小麦幼苗的株高,并使其小麦幼苗可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量分别提高19.69%、15.25%、41.36%,同时使其小麦叶正面气孔密度增大10.34%。SNP单独处理使得光合色素(叶绿素和类胡萝卜素)的含量较CK分别提高12.43%和5.99%,叶绿素荧光参数Fv/Fm和Fv/F0较CK显著提高0.5%和5.16%。此外,SNP能使小麦幼苗丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)的含量较CK显著降低27.30%和74.92%,超氧阴离子(O2-)的产生速率较CK显著降低24.47%。通过体内相关生理指标物质含量的变化来响应UV-B胁迫对小麦幼苗造成的伤害,而适宜浓度的外源NO(0.1mmol/L)可以缓解UV-B胁迫下对小麦幼苗的伤害作用,从而增强小麦幼苗对UV-B胁迫的适应能力。

NO-cGMP信息通路在阿片类药物耐受和依赖中的调节作用

ＮＯ合酶抑制剂能阻断或逆转μ、δ激动剂耐受和戒断反应，而对κ激动剂无明显作用，其药理效应类似于阿片成瘾治疗的常用药物可乐定。甲基兰抑制鸟苷酸环化酶活性，使ｃＧＭＰ生成减少，对阿片类药物耐受和戒断症状均有阻断作用，提示ＮＯｃＧＭＰ通路在阿片耐受和依赖发生中起重要作用，为寻找和设计治疗阿片类耐受成瘾的药物提供新的策略。

幽门螺杆菌阳性的慢性胃炎患者胃黏膜组织中TNF-α、IL-1β、iNOS的表达

目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)阳性的胃炎患者胃黏膜组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达水平。方法:选择以胃镜和组织学检查诊断为Hp阳性的慢性胃炎126例患者作为研究对象(Hp阳性组),以122例Hp阴性的慢性胃炎患者为对照组(Hp阴性组)。通过组织学方法评定胃黏膜病理组织学改变,采用快速尿素酶试验及改良Giemsa染色法对受检对象作Hp感染诊断,放射免疫法检测TNF-α、IL-1β水平,免疫组织化学方法检测胃黏膜组织中iNOS表达。结果:Hp阳性组胃黏膜炎症程度重于Hp阴性组(P<0.01)。Hp阳性组胃黏膜中TNF-α、IL-1β、iNOS水平均高于Hp阴性组(P<0.05)。结论:Hp阳性的胃炎胃黏膜呈现一种炎症改变,可能与细胞因子TNF-α、IL-1β、iNOS分泌增加有关。

大豆异黄酮对2型糖尿病大鼠血清中SOD MDA GSH及NO的影响

目的研究大豆异黄酮对2型糖尿病大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及一氧化氮(NO)的影响。方法以高脂饲料喂养后的雄性SD大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病模型。将实验动物随机分为普食对照组、糖尿病对照组、大豆异黄酮250mg/kg、50mg/kg剂量干预组。检测各组喂养6周、10周的血糖水平,检测第10周后大鼠血清中SOD、MDA、GSH及NO的变化。结果与糖尿病对照组相比,大豆异黄酮250mg/kg剂量干预组大鼠血清中的SOD明显升高(P<0.05),MDA与NO明显下降(P<0.05);大豆异黄酮50mg/kg剂量干预组大鼠血清中GSH明显升高(P<0.05)。结论大豆异黄酮能改善2型糖尿病大鼠的抗氧化能力。

不同液体小容量复苏对内毒素休克大鼠肾损伤及其NO和H_2S的影响

【目的】探讨不同液体小容量复苏对大鼠内毒素休克肾损伤的影响,并观察肾皮质硫化氢和一氧化氮水平变化。【方法】清洁级SD大鼠30只,根据复苏所用液体种类随机分为5组,正常组(N组)、内毒素休克组(LPS,E组)、75 g/L高渗氯化钠组(LPS+HSS,HSS组)、羟乙基淀粉液130/0.4(万汶)组(LPS+HES,HES组)、高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液(霍姆)组(LPS+HSH,HSH组)。各组在静注LPS(1 mg/kg)30 min后予小容量复苏(4 mL/kg),测量不同时间点的血压;复苏60min后处死大鼠,取肾标本行病理学及干湿质量比检测,肾皮质匀浆测定一氧化氮(NO)和硫化氢(H2S)水平。【结果】①内毒素休克大鼠右颈总动脉收缩压进行性下降,予不同液体复苏后血压有不同程度回升,其中HSH效果最为明显;②内毒素休克大鼠肾切片病理观察发现肾小管局部坏死、肾小球足突融合、基底膜有沉积物,复苏组病理改变减轻,HSH组病变最轻;③各组大鼠肾干湿质量比未见有明显差异(P﹥0.05);④内毒素休克组肾皮质H2S浓度明显下降,NO水平明显升高(P<0.01),小容量复苏后,HES和HSH复苏组肾皮质H2S浓度明显升高,HSH组NO水平明显回落(P<0.05)。【结论】内毒素休克大鼠肾损伤明显,应用高渗盐水、羟乙基淀粉130/0.4溶液、高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液小容量复苏后肾脏病理改变减轻,肾皮质H2S水平升高、NO水平降低。

醛固酮对鼠心肌成纤维细胞NOS-NO系统活性的影响

目的 探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞 (CFs)增殖及对一氧化氮合酶 —氧化氮 (NOS NO)系统活性的影响。方法 采用胰酶消化法分离培养新生SD大鼠CFs,采用MTT比色法、硝酸还原酶法、分光光度法和半定量RT PCR技术 ,观察不同浓度醛固酮对CFs的增殖、NO含量、NOS活性和iNOSmRNA表达的影响。结果 1× 10 -11～ 1× 10 -7mol/L的醛固酮能明显促进CFs的增殖 ,且呈剂量依赖方式 ;不同浓度醛固酮干预下CFs的NO含量、NOS活性及iNOSmRNA表达逐渐下降 (P均 <0 0 5 ) ,呈剂量依赖性 ;醛固酮干预下NO含量随NOS活性降低而降低 ,二者呈显著正相关 (r=0 95 8,P <0 0 1) ;螺内酯能阻断醛固酮诱导的CFs的NO含量、NOS活性和iNOSmRNA表达下降。结论 醛固酮能剂量依赖性地降低CFs的NOS NO系统活性 ,螺内酯能逆转此作用 ,可能是其致心肌纤维化的机制之一。

高游离脂肪酸致内皮细胞eNOS活性降低与PKC通路的关系

目的研究游离脂肪酸(FFA)水平升高导致的内皮一氧化氮合酶(eNOS)活性降低是否与蛋白激酶C(PKC)通路激活有关。方法传代培养的人脐静脉内皮细胞分为4组:对照组,油酸组(10、50、100、150、200μmol/L),PKC抑制剂(GFX)组,油酸+GFX组。分别检测各组eNOS活性,检测对照组和油酸组PKC的表达和活性,以及各组eNOS磷酸化(p-eNOS)的表达。结果与对照组相比,油酸组eNOS活性呈剂量依赖性降低,p-eNOS(1177)的表达降低(0.0854±0.017 vs.0.0134±0.023,P<0.05);PKC的表达出现转位,由胞浆转向胞膜,胞浆表达活性降低,胞膜表达活性增高,总活性增加。加入GFX后对正常内皮细胞eNOS活性无明显影响,但能部分改善油酸所致的内皮细胞eNOS活性的降低。结论油酸可损害内皮细胞eNOS的表达及磷酸化,其机理与PKC通路的激活有关。

生长激素对脂多糖刺激大鼠腹腔巨噬细胞NO产生及iNOS mRNA表达的影响及意义

目的:研究重组人生长激素对脂多糖(LPS)刺激大鼠腹腔巨噬细胞活性的改变,TNF-α、iNOS mR-NA的表达情况及对NO的产生的影响。方法:分离提取大鼠腹腔巨噬细胞,用LPS刺激2h后加入不同浓度重组人生长激素,6h后观察巨噬细胞活性RT-PCR检测巨噬细胞内TNF-α、iNOS mRNA的表达情况,上清液测NO浓度。结果:巨噬细胞用LPS刺激后,活性明显增强,TNF-α、iNOS mRNA表达上调,NO产生增加,使用不同剂量的生长激素后能均够抑制巨噬细胞的活性,iNOS mRNA表达下调,NO产生减少,而对TNF-αmRNA的表达无明显影响。结论:低剂量的生长激素可以抑制LPS对巨噬细胞的活化作用,其部分机制是下调了iNOS mRNA表达,使NO产生减少,但其抑制作用不随浓度的增加而上升。在体外rhGH并不直接抑制TNF-αmRNA的表达。

益肾定眩汤结合长春西汀注射液对后循环缺血性眩晕病人血液流变学、血清NO、ET水平及TCD指标的影响

目的 观察益肾定眩汤结合长春西汀注射液对后循环缺血性眩晕病人血液流变学、血清一氧化氮(NO)、内皮素(ET)水平及经颅多普勒(TCD)指标的影响。方法 将136例后循环缺血性眩晕病人随机分为两组,对照组68例应用长春西汀注射液治疗,研究组68例应用益肾定眩汤结合长春西汀注射液治疗,两组均连续治疗14d。比较两组治疗后临床疗效,统计两组治疗前后血液流变学、血清NO、ET水平及TCD指标变化情况。结果 研究组治疗后临床治疗总有效率91.18%,显著高于对照组的73.53%(P<0.05);两组治疗后低切全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原和红细胞聚集指数以及血清NO、ET水平均低于治疗前(P<0.05),且研究组上述指标均低于对照组(P<0.05);两组治疗后左侧椎动脉(VA)、右侧VA、基底动脉(BA)的平均血流速度(Vm)水平均高于治疗前(P<0.05),且研究组上述指标均高于对照组(P<0.05)。结论 益肾定眩汤结合长春西汀注射液治疗后循环缺血性眩晕,能明显改善病人血液流变学和TCD指标,降低血清NO、ET水平。

小儿惊厥血清和脑脊液中NSE和NO/NOS改变及其临床意义

目的 探讨小儿惊厥发作 ,发作时间 ,引起惊厥原因对脑神经元的损伤及其程度。方法 按照引起小儿惊厥的病因及惊厥发生持续的时间及次数进行分组 ,分别为五组、三组和三组。应用酶联免疫法和分光光度法测定惊厥发作后不同时间患儿血清和脑脊液中NSE ,NO/NOS的含量。结果 ①除热性惊厥组外 ,所有惊厥患儿血清及脑脊液中NSE ,NO/NOS明显高于正常对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;②无论任何原因引起惊厥 ,惊厥时间越长 ,血清和脑脊液中NSE ,NO/NOS越高 ,两者成正相关 (r =80 5～ 82 4,P <0 0 1) ;③在所有病因中 ,颅内感染者由于惊厥平均次数最多及平均持续时间最长 ,故脑脊液及血清中NSE ,NO/NOS水平升高最明显 ,且持续时间最长 ,尤其是有昏迷或严重神经系统并发症者尤为突出 ,而热性惊厥者NSE ,NO/NOS则无明显升高或只有轻微升高。结论 惊厥发作时由于伴有不同程度神经元损伤 ,从而使血清和脑脊液中NSE ,NO/NOS水平其升高 ,其程度与惊厥发作持续时间 。

银杏提取物对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡、NO含量和NOS活性的影响

目的观察银杏提取物(EGB)对大鼠体外循环肺缺血再灌注损伤(I/R)时NO含量和NOS活性及对细胞凋亡的影响。方法建立离体大鼠肺灌流模型,24只大鼠随机分成3组:假手术组(Sham);I/R组;I/R+EGB组,观察大鼠肺组织形态学改变,测定肺组织匀浆及灌流液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的含量、肺湿干重比(W/D)和平均肺动脉压(MPAP),凋亡指数测定。结果HE染色显示EGB组肺损伤明显减轻、肺组织湿/干重比和MPAP显著低于I/R组;EGB组肺组织匀浆中NOS和NO含量显著高于I/R组。EGB组凋亡指数明显低于I/R组。结论EGB对大鼠肺I/R损伤具有保护作用,其机制可能与增强NOS表达,促进NO合成,同时与减少细胞凋亡有关。

颅内动脉瘤出血患者脑脊液和血液NO、NOS和ET含量的变化

目的:研究动脉瘤性蛛网膜下腔出血后患者脑脊液和血液中内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶(NOS)含量的动态变化及与脑血管痉挛的关系。方法:检测22例颅内动脉瘤破裂蛛网膜下腔出血患者不同时间段的脑脊液和血液中ET-1、NO和NOS的含量。结果:出血后患者脑脊液和血液中ET-1浓度即有明显升高,在出血后第7天达到高峰,而后逐渐下降。脑血管痉挛患者ET-1浓度明显高于未痉挛者。出血后NO、NOS的含量明显下降,14 d时大部恢复至正常。结论:脑脊液和血液中ET-1、NO和NOS含量的变化参与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的发生。

NO供体SNP对酸雨胁迫下龙眼种子萌发及生理特性的影响

研究了不同pH值(2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.5)模拟酸雨对龙眼种子萌发、幼苗生长的影响,以及外源一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对pH3.5酸雨胁迫下龙眼种子萌发和生理特性的影响。结果表明,模拟酸雨pH值小于4.0时龙眼种子的萌发受到显著抑制,pH 5.0模拟酸雨对龙眼种子萌发影响最小。较低浓度(0.25 mmol/L)的硝普钠能明显提高酸雨(pH 3.5)胁迫下龙眼种子的发芽率和发芽势,明显缓解酸雨(pH 3.5)胁迫下龙眼幼苗中丙二醛(MDA)的积累,提高根系活性;过高浓度(1.00 mmol/L)的硝普钠会对龙眼幼苗产生胁迫作用,龙眼幼苗发芽率和发芽势下降,MDA含量上升,根系活性下降。

脊髓急性损伤后NOS、NO水平的变化

目的:研究脊髓急性损伤对一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)变化的影响。方法:76例脊髓急性损伤患者,根据Franked分类,分为完全截瘫组,不完全截瘫组,单纯脊柱骨折组,以健康体检人员作正常对照组,分别测4组入院24 h内血浆NOS,NO的值;完全截瘫组再分别测入院后5～7 d、入院后19～21 d NOS,NO的值。结果:脊髓急性损伤后24 h内完全截瘫者和不完全截瘫者的NOS,NO值均显著降低(P<0.01);在急性损伤后5～7 d(术前)、19～21 d(出院前)完全截瘫者NOS,NO的值显著升高(P<0.001)。结论:脊髓急性损伤后患者血浆NOS和NO出现明显的时相改变,提示NOS和NO始终参与了截瘫后脊髓继发性损害。