UV和NTG复合诱变柠檬酸生产菌种黑曲霉

为了提高柠檬酸的生产水平,利用紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)对柠檬酸生产菌种黑曲霉进行了复合诱变,通过溴甲酚绿选择性平板初筛和摇瓶复筛,获得了一株遗传性能稳定的高产菌株UN-08,产酸率为15.80%.与出发菌株相比,产酸增幅达到26.40%,糖酸转化率为98.75%,发酵指数为1.32 kg/(m3·h).此外,通过对高产菌株UN-08的发酵条件进行研究,确定了此菌株生产接种的适宜孢子数量为106～108个/mL,发酵温度应控制在34～36℃内,溶氧应采用分段控制,前期(0～40 h)应控制在0.12 m3/(m3.min)左右、后期(40～96 h)应控制在0.15 m3/(m3·min)左右.

微波与NTG复合诱变育种Klebsiella高产异淀粉酶突变株

从原始菌克雷伯氏菌(Klebsiella)出发,经过微波与NTG复合诱变后,筛选、初筛分离得高产异淀粉酶的菌株NCP-03,酶活力由原来的28U/mL提高到210U/mL,比原始菌种产酶活力提高了近7倍。并对NCP-03发酵产酶条件进行了初步优化。

亚硝基胍(NTG)对雨生红球藻的诱变效应

用浓度分别为0,0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5g/L的亚硝基胍 (NTG)处理雨生红球藻(Haematococcuspluvialis) ,处理后的藻细胞分别置于100mL三角烧瓶培养 ,3d后用细胞计数测定抑制率。结果表明 ,NTG浓度为2.5g/L时生长K值最大 ,为0.389 ;藻液的细胞干质量最大 ,为0.711g/L ;虾青素含量也最多 ,为1.86975mg/L,之后随着浓度的增加反而下降。

苹果酒高产酵母菌株的诱变选育

以野生型苹果酒酵母Y0 2 为出发菌株 ,用紫外线 (UV)和N—甲基—N—硝基—N—亚硝基胍 (NTG) 2种诱变剂进行诱变后 ,对苹果汁进行发酵实验 .结果表明 :经紫外线照射 2 40s后 ,获得了一株产酒率较高的菌株UV - 1,该菌株发酵周期适当 ,发酵液残糖量和酸度适中 ,第 7d发酵达到峰值时酒精度为 8 6 % (标准 ) ,比对照出发菌株高出 6 17% .

伽马射线辐射结合亚硝基胍诱变选育他克莫司高产菌株

为了选育稳定高产的他克莫司菌株,提高发酵水平,对他克莫司出发菌株采用450 Gy剂量的^60Co γ辐射诱变及3 mg/mL亚硝基胍(NTG)处理30 min诱变,并分别结合链霉素和庆大霉素进行抗性筛选.经选育获得一株高产、遗传稳定的他克莫司突变株FIM-17-17,该菌株的摇瓶发酵水平较出发菌株提高了65%.考察该突变株的稳定性,及树脂AB-8、D101、HT60、XAD16、HP20和XDA-8对发酵水平的影响,并在容量1 t的发酵罐进行中试发酵验证.结果表明,突变株FIM-17-17遗传稳定,且在发酵培养基中添加2%的D101树脂后,发酵水平又提高了29.8%,发酵罐中试发酵水平平均达1 319 μg/mL.结果提示,利用^60Co γ射线辐射和NTG复合诱变能有效获得他克莫司高产菌株.

复合诱变选育表面活性素(surfactin)高产菌株

为筛选抗菌脂肽表面活性素高产菌株,以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis fmbJ224为出发菌株,先后采用氯化锂(LiCl)、亚硝基胍(NTG)、甲基磺酸乙酯(EMS)和链霉素(streptomycin)进行复合诱变。结果表明:经初筛、复筛选育得到1株高产抗菌脂肽菌株LN2-3,其Surfactin产量达到239.2mg/L,比出发菌株Bacillus subtilis fmbJ224(5.25mg/L)提高了44.56倍,且该菌株具有良好的遗传稳定性。提示采用LiCl-NTG复合诱变能较大幅度的提高诱变率,可以获得抗菌脂肽高产菌株。

豆豉发酵中的乳酸菌复合诱变及产酸条件优化

采用紫外和亚硝基胍复合诱变对筛选自豆豉的乳杆菌进行诱变处理,以期获得高产酸菌株。以最佳诱变条件筛选得到突变菌株的产酸度较原菌株提高了36.4%,且菌株能够保持较好的遗传稳定性。进一步利用响应面分析法对菌株产酸进行优化,并建立数学模型,得到最佳产酸条件为培养温度41.72℃、接种量3.65%(V/V)、培养时间18.57h。该条件下,产酸率模型的预测值为11.25°T/h,实际得到的产酸率值为11.2°T/h,预测值与实验值拟合良好。

亚硝基胍诱变选育丁二酮高产菌株

以乳酸乳球菌乳酸亚种丁二酮变种为出发菌株,采用亚硝基胍进行诱变选育,得到高产丁二酮菌株,用邻苯二胺比色法检测突变株丁二酮,其产量达到0.72mg/L,比出发菌株产量0.056mg/L提高12.9倍,且遗传性质稳定。

中国对虾淋巴组织的长期原代培养和化学诱变初探

以中国对虾为实验材料 ,研究影响对虾淋巴组织原代培养的一些因素。研究中发现 ,用75%的乙醇浸泡对虾就可以达到淋巴组织培养无菌的要求 ,当组织块的接种密度为 2 4 0～ 2 60块( 2 5cm2 ) -1时最适。当原代细胞培养 30 d左右 ,细胞会因接触抑制而停止生长 ,当接触抑制消除后 ,细胞仍可继续生长。另外 ,还进行了以 N-甲基 - N′-亚硝基胍 ( MNNG)对原代细胞进行诱变的尝试发现诱变后有的细胞呈现出转化细胞的形态 。

坛紫菜绿色突变体的分离与特性分析

野生型坛紫菜壳孢子苗经MNNG处理后,在它们的叶状体中,出现了许多色彩发生变异的细胞,大部分的变异细胞随后分裂形成块状的细胞块。用酶解法分离含绿色变异细胞块的叶状体的单离细胞,从细胞再生体中分离出一株绿色突变体。在叶状体活体吸收光谱特性方面,绿色突变体与野生型相比存在着明显的差异,3λmax和4λmax的峰顶分别向短波方向移动了约12 nm和3 nm。另外,绿色突变体的藻红蛋白和叶绿素a的含量下降,藻蓝蛋白的含量上升,表现出较低的PE/Chl.a和PE/PC比值,较高的PC/Chl.a比值。绿色突变体的生长和成熟均比野生型慢。

蛋白酶高产菌曲霉N43的诱变选育

研究了利用紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)对米曲霉M3进行诱变处理,在以麸皮为主要原料的固体培养基上进行培养,选育出了1株生长繁殖速度快、孢子丰富且蛋白酶活力高的变异株N43,其蛋白酶活力达21731.8U/g干曲。较出发菌株米曲霉M3酶活8843.9U/g干曲提高了146%。

微波-亚硝基胍复合诱变筛选纤维素酶高产菌株

以一株产纤维素酶的黑曲霉菌株D2为出发菌，进行了微波一亚硝基胍复合诱变，筛选到遗传性状稳定的高产纤维素酶突变菌株N14，其最适生长pHNN5．0～6．0、最适生长温度28℃-30℃，酶解反应的最适pH值为5．0、最适温度50℃。通过单因素和正交试验确定了突变株N14的最佳液态产酶条件是：麸皮为碳源、酵母膏为氮源、碳氮比4：1、起始pH值为6．5，接种量6％，发酵温度30℃，发酵时间3d。在上述条件下，菌株滤纸（FPA）酶活最高，达363．5U／mL，是出发菌株的3．5倍。

营养缺陷型鼠伤寒沙门菌对结肠癌裸鼠模型的治疗研究

目的:探索应用亚硝基胍(NTG)诱导鼠伤寒沙门菌(ATCC14028)形成营养缺陷型细菌,以观察其对人结肠癌细胞株SW480裸鼠模型的治疗作用。方法:用NTG诱变鼠伤寒沙门菌(ATCC14028)后,用葡萄糖基础培养基+氨苄青霉素筛选出营养缺陷型沙门菌,将其静脉注射入10只无瘤裸鼠尾静脉,观察其毒性;同时将其注入20只荷瘤裸鼠中观察其治疗作用。结果:1只注射入营养缺陷型沙门菌的裸鼠死亡,而注射野生型沙门菌的裸鼠均死亡。20只荷瘤鼠1周后肿瘤组织均出现大小不等的坏死灶。结论:营养缺陷型沙门菌对裸鼠毒性弱,对肿瘤组织有趋化性及肿瘤杀灭作用。

复合诱变选育高效生物破乳剂产生菌及其特性

为提高破乳性能,以一株生物破乳剂产生菌Bacillus mojavensis XH1为出发菌株,进行紫外和亚硝基胍复合诱变处理,经过筛选分离和连续传代得到一株遗传稳定性较好的高效生物破乳剂产生菌突变株XN5.在碳源为10 g/L葡萄糖和4%(体积分数)液体石蜡的混合碳源、氮源为4.0 g/L NH4Cl与1.0 g/L酵母膏的混合氮源、温度30℃、初始pH=6.5、摇床转数为140 r/min的培养条件下,培养24 h后,突变菌株的12 h和24 h破乳率分别为94.17%和98.67%,比原始菌株XH1提高了64.81%和15.12%.

β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌诱变选育及基因克隆表达

为获得β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌株,以高地芽孢杆菌YC-9为出发菌株,通过亚硝基胍(nitrosoguanidine,NTG)和低能N+束诱变育种,筛选和选育得到两株突变株N-2-2和10-30s-3,发酵培养60 h,酶活力分别达到28.6 U/m L和36.1 U/m L,分别是出发菌株的2.36倍和2.98倍,与YC-9菌株相比,突变菌株菌体生长下降但发酵产酶量增加。进一步将β-1,3-1,4-葡聚糖酶克隆并在大肠杆菌中成功表达,经过30℃诱导6 h后,胞内酶活力达79.2 U/m L,为出发菌株的6.5倍。

生米卡链霉菌的耐前体变株选育及发酵工艺优化

目的提高生米卡链霉菌的发酵水平和有效组分A1含量。方法出发菌株109S通过紫外线、亚硝基胍的组合诱变处理后筛选高产前体抗性突变株,并考察高产变株的发酵周期、最适补加前体的时间和剂量。结果和结论共筛选了368个抗性突变株,得到一株生产能力比出发菌株提高33%、A1组分提高16%的高产变株B64-5,连续传4代生产能力基本不变,较稳定;确定了变株发酵周期为52 h,发酵最佳补加前体时间为0 h,最佳补加剂量为0.3 g.L-1。

纳他霉素高产菌株的诱变选育

采用化学诱变剂亚硝基胍(NTG)对纳他霉素生产菌株Streptomyces natalansis PM2-5孢子进行诱变处理,再根据浅蓝霉素对大环内酯合成途径中多聚乙酰合成酶(Polyketide synthase,PKS)的抑制作用机制,以浅蓝霉素作为筛选因子,选育出耐浅蓝霉素的高产突变菌株,获得高产突变菌株PM4-18,其生产能力是出发菌株的1.67倍,菌株遗传性能稳定。

抗福美双假单胞菌株的NTG化学诱变及分子探针鉴定

利用微生物的抗药性筛选抗福美双的假单胞菌株Ｔ４６，然后通过亚硝基胍（ＮＴＧ）化学诱变获得了对福美双敏感的三株突变株Ｔ４６Ｎ１０、Ｔ４６Ｎ７和Ｔ４６Ｎ１７。利用这三个突变株作受体，通过基因克隆的方法筛选到了可使三个突变株恢复抗性的克隆，抗性基因分别被定位在７ｋｂ、２．５ｋｂ和２０ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ片段上。将这三个克隆分别用（３２）Ｐ标记后制成分子探针，然后分别与三个突变菌株的总ＤＮＡ进行ＤＮＡ－ＤＮＡ分子杂交，结果表明，各突变株均存在与菌株Ｔ４６的抗福美双基因克隆的高度同源性，经结合形态、生理生化等分析后证实这三株突变株均源自于出发菌株Ｔ４６。

高产γ-氨基丁酸酵母菌株的亚硝基胍诱变选育

目的:探讨亚硝基胍诱变选育高产γ-氨基丁酸酵母菌株的方法。方法:使用亚硝基胍对酵母菌株进行诱变;采用含溴甲酚绿的YEPD培养基筛选突变菌,采用薄层层析法和比色法鉴定变异菌株发酵液中的γ-氨基丁酸及其含量;对突变菌株连续继代培养4代,测定各代发酵液中γ-氨基丁酸的含量,鉴定诱变菌株的遗传稳定性。结果:亚硝基胍诱变酵母的最佳浓度为1.0g.L-1,最佳诱变时间为15min;获得了5株突变菌株,菌落呈绿色;薄层层析法鉴定突变菌株都能产γ-氨基丁酸;诱变菌发酵液中的γ-氨基丁酸含量各异,但高于对照,且增长幅度很大;对突变菌株后代遗传稳定性进行了鉴定,结果表明突变菌株4遗传性较稳定。结论:采用1.0g.L-1的亚硝基胍溶液处理酵母菌15min,经筛选鉴定,获得了一株遗传稳定的高产γ-氨基丁酸的酵母菌株。

复合诱变植物乳杆菌快速降解亚硝酸盐的研究

以植物乳杆菌为出发菌株,经过紫外和亚硝基胍2轮复合诱变,含2%亚硝酸钠的MRS平板筛选得到4株快速降解亚硝酸盐的突变菌株。其中,突变株UN′2在含10μg/mL亚硝酸钠的MRS培养基中发酵10h后,其对亚硝酸盐的降解率能够达到89.04%,比原始菌株提高了48.83%。