GATA-4、NKx2-5转录因子的研究进展

转录因子GATA家族是能与核酸共同序列（A/T）GATA（A／G）结合的细胞核转录因子。包括6个成员，即GATA-1、-2、-3、-4、-5和-6。1995年Huang等通过筛查人类心脏cDNA文库首次克隆出人类GATA-4cDNA，以后相继在人类肺、肝脏和小肠等器官中检测到GATA-4 mRNA和蛋白的表达。人们应用果蝇同源结构域（homeodomain，HD）寡核苷酸探针筛查果蝇cDNA文库，克隆出NK型同源盒基因。随后分离出一种与果蝇背侧血管，心脏发育密切相关的果蝇NK-2型基因tinman基因。GATA-4和NKx2-5是目前研究较多的与心脏发育密切相关的转录因子。

甘蓝型油菜转录因子BnHY5-2参与盐碱胁迫的响应

转录因子BnHY5-2与植物抗逆性相关。为揭示甘蓝型油菜转录因子BnHY5-2对盐碱胁迫的响应,主要通过瞬时转化过表达、qRT-PCR分析、亚细胞定位等方法,分析甘蓝型油菜转录因子BnHY5-2对光和盐碱的响应。结果表明,光照处理油菜后,在叶与茎中BnHY5-2基因的表达量均显著高于黑暗条件下,分别为黑暗条件下的29.22,3.15倍,叶片对光的敏感性大于茎,说明叶片是响应光转录因子BnHY5-2的主要部位。在光照条件下应用大连滨海盐碱土种植油菜,处理后BnHY5-2的表达在叶和茎中均显著下调,分别下调53.1%,31.0%;在黑暗条件下应用盐碱处理后BnHY5-2的表达在茎中下调48.2%,而在叶中的表达差异则不显著,表现出器官的差异性,说明叶片对光照条件要求更加严格。在油菜叶片中瞬时过表达BnHY5-2基因时,6个与盐碱相关的候选基因的表达中,有2个(BnNAC32、BnGS)上调表达,分别为原来的1.25,3.28倍;而有4个(Bnamy、BnAsp、BnNHX7、BnTPS)下调表达,分别下降24.8%,25.4%,71.0%,82.0%,同时甜菜碱含量由0.256 mg/g提升至0.573 mg/g,提高了1.24倍,说明过表达BnHY5-2基因会提高油菜的盐碱抗性。亚细胞定位结果显示,转录因子BnHY5-2定位于细胞核中,调控功能基因的表达。因此,BnHY5-2不仅与光信号有关,还参与油菜盐碱抗性。

NKX2-1-AS1介导miR-96-5p/PRDM16轴对未分化甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NK2同源异形盒1-反义RNA 1(NKX2-1-AS1)介导微RNA(miR)-96-5p/含有PR结构域的蛋白16(PRDM16)轴对未分化甲状腺癌(ATC)细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长的影响。方法基于生物信息学筛选ATC组织及细胞中差异表达的lncRNA NKX2-1-AS1,并进一步筛选其靶基因miR-96-5p和下游靶基因PRDM16。双荧光素酶报告基因实验验证NKX2-1-AS1与miR-96-5p以及miR-96-5p与PRDM16之间的关系。Western blotting检测过表达miR-96-5p对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞PRDM16表达的影响。平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测敲减PRDM16对过表达NKX2-1-AS1的CAL-62细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下注射CAL-62细胞,观察敲减PRDM16对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞移植瘤生长的影响。结果基于生物信息学筛选出参与调节ATC发展的NKX2-1-AS1/miR-96-5p/PRDM16轴。双荧光素酶报告基因实验验证结果显示NKX2-1-AS1与miR-96-5p、miR-96-5p与PRDM16结合。过表达NKX2-1-AS1上调CAL-62细胞中PRDM16蛋白表达;而过表达miR-96-5p可逆转此上调作用。过表达NKX2-1-AS1抑制CAL-62细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长;而敲减PRDM16可逆转此抑制作用。结论NKX2-1-AS1可能作为竞争性内源性RNA与miR-96-5p竞争结合下游靶基因PRDM16,上调PRDM16表达,从而抑制ATC细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长。

lncRNA EBLN3P调节miR-340-5p/线粒体转录因子A轴对非小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA EBLN3P调节微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/线粒体转录因子A(TFAM)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法:使用NSCLC细胞系为研究对象。将A549细胞分为Ctrl组、si-NC组、si-EBLN3P组、si-EBLN3P+NC inhibitor组、si-EBLN3P+miR-340-5p inhibitor组,应用MTT、EdU、Transwell检测细胞增殖、迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因实验验证EBLN3P、miR-340-5p、TFAM 3者间的靶向关系;分别检测TFAM、miR-340-5p、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。结果:EBLN3P在肺癌组织和细胞中表达上调;在NSCLC细胞中,TFAM表达上调,miR-340-5p表达降低。抑制EBLN3P表达可显著抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭,且E-cadherin蛋白表达上升,N-cadherin蛋白表达下降。EBLN3P、TFAM与miR-340-5p存在靶向关系。结论:EBLN3P在NSCLC组织与细胞中呈高表达,抑制EBLN3P表达可通过调节miR-340-5p/TFAM信号轴,抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭。

非酒精性脂肪性肝病合并T2DM患者血清成纤维细胞生长因子-21和分泌型卷曲相关蛋白5水平变化及其临床意义探讨

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)合并T2DM患者血清成纤维细胞生长因子-21(FGF21)和分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)水平变化及其临床意义。方法2020年5月~2023年3月我院诊治的NAFLD患者101例【单纯性脂肪肝(NAFL)64例、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)25例和肝硬化(LC)12例】和NAFLD合并T2DM患者81例(NAFL 58例、NASH 16例和LC 7例),检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用ELISA法检测血清FGF21和SFRP5水平。结果NAFLD合并T2DM患者FBG、血清FINS、HOMA-IR和血清FGF21水平分别为(8.7±1.4)mmol/L、(28.9±5.8)μIU/mL、(11.1±2.7)和(304.8±36.0)pg/mL,均显著高于NAFLD患者【分别为(5.5±1.2)mmol/L、(20.8±4.1)μIU/mL、(5.1±1.5)和(267.6±34.5)pg/mL,P<0.05】,而血清SFRP5水平为(6.8±1.2)pg/mL,显著低于NAFLD患者【(10.3±2.2)pg/mL,P<0.05】;NAFLD合并T2DM患者血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平分别为(6.7±1.0)mmol/L、(3.7±0.6)mmol/L、(1.3±0.2)mmol/L和(3.4±0.8)mmol/L,与NAFLD患者【分别为(6.2±0.9)mmol/L、(4.1±0.5)mmol/L、(1.3±0.3)mmol/L和(3.2±0.7)mmol/L】比,差异无统计学意义(P>0.05);T2DM合并NAFL、合并NASH和合并肝硬化患者血清SFRP5水平分别为(7.8±1.1)pg/mL、(6.4±0.8)pg/mL和(5.1±0.7)pg/mL,显著低于NAFL、NASH和肝硬化患者【分别为(11.9±2.1)pg/mL、(9.8±1.6)pg/mL和(8.4±1.1)pg/mL,P<0.05】,而血清FGF21水平分别为(295.6±31.2)pg/mL、(316.8±32.9)pg/mL和(353.6±36.7)pg/mL,显著高于NAFL、NASH和肝硬化患者【分别为(255.1±32.5)pg/mL、(279.5±33.4)pg/mL和(309.7±35.8)pg/mL,P<0.05】。结论NAFLD合并T2DM患者血清FGF21水平显著升高,而血清SFRP5水平显著降低,可应用于对病情严重程度的评估,值得深入研究。

左心室舒张功能结合血清微小RNA-152-5p、潜在转化生长因子结合蛋白2水平与射血分数保留的心力衰竭患者左心室重构的相关性

目的探讨左心室舒张功能结合血清微小RNA-152-5p(miR-152-5p)、潜在转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)水平与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)患者左心室重构的相关性。方法选取2019年8月至2020年8月在唐山中心医院进行治疗的HFpEF患者48例为HFpEF组,同期健康体检者52例为对照组。以实时荧光定量PCR法和酶联免疫吸附试验法分别检测血清miR-152-5p、LTBP-2水平。研究对象均进行超声心动图检查,收集二尖瓣环舒张早期峰值速度(E')、晚期峰值充盈速度(A)、二尖瓣口舒张早期峰值充盈速度(E)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、舒张末期后壁厚度(PWTd)、舒张末期室间隔厚度(IVSTd),并计算E/A、E/E'及左心室质量(LVM)值。使用Pearson法分析血清miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E'与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM之间的相关性。结果HFpEF组患者E/A值低于对照组,血清miR-152-5p、LTBP-2水平及E/E'值高于对照组,差异有统计学意义(t=12.722、21.830、9.882、15.979,P<0.05)。HFpEF组患者的LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM水平高于对照组,差异有统计学意义(t=2.044、2.894、5.733、3.973,P<0.05)。HFpEF组患者血清miR-152-5p、LTBP-2、E/E'表达水平均与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM呈正相关(r=0.447、0.425、0.437、0.473、0.414、0.338、0.422、0.347、0.492、0.412、0.385、0.367,P<0.05);E/A与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM呈负相关(r=-0.441、-0.374、-0.369、-0.438,P<0.05)。结论血清miR-152-5p、LTBP-2水平以及E/E'值、E/A水平与HFpEF患者左心室重构有关。

黄芪桂枝五物汤加减对肩周炎患者肩关节功能、炎性因子和血清5-HT、PGE2的影响

目的探讨黄芪桂枝五物汤加减对肩周炎患者肩关节功能、炎性因子和血清5-HT、PGE2的影响。方法选取2022年2月—2023年2月西安市阎良区人民医院收治的80例肩周炎患者作为研究对象,应用随机数表法将其分为观察组与对照组,每组40例。对照组采取常规治疗,观察组在对照组治疗基础上联合黄芪桂枝五物汤加减治疗,应用Constant-Murley评分及视觉模拟量表(Visual simulation scale,VAS)评价患者治疗前后的肩关节功能变化,并比较其炎性因子水平及血清中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)表达水平。结果治疗前两组患者肩关节功能评分、疼痛评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者肩关节功能评分均升高,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);疼痛评分均降低,且观察组疼痛评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组患者肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-βone,TGF-β1)、白细胞计数(White blood cell count,WBC)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者TNF-α、TGF-β1、WBC、CRP水平均降低,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组患者5-HT、PGE2比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者5-HT、PGE2均降低,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对肩周炎患者在常规治疗基础上联合黄芪桂枝五物汤加减治疗可改善患者肩关节功能,降低疼痛程度,减轻机体炎性反应水平,其治疗机制可能与血清5-HT、PGE2的降低具有一定关系,值得临床应用。

2型糖尿病合并甲状腺功能亢进患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与糖代谢指标的相关性分析

目的分析2型糖尿病合并甲状腺功能亢进(以下简称甲亢)患者血清信号素5A(Sema 5A)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平与糖代谢指标的相关性。方法选取2021年6月至2022年6月邯郸市中心医院收治的73例2型糖尿病合并甲亢患者作为合并组,56例单纯2型糖尿病患者作为糖尿病组,另选取同期在邯郸市中心医院体检的68例健康者作为对照组。比较对照组、糖尿病组、合并组血清Sema 5A、IGFBP-3水平,比较糖尿病组、合并组临床资料[体质量指数、糖尿病病程、空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、胰岛素(FIN)、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三碘甲腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、游离三碘甲腺原氨酸(FT_(3))、游离甲状腺素(FT_(4))、促甲状腺素(TSH)、促甲状腺激素受体抗体(TRAB)及甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAB)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]。采用多因素Logisitic回归分析2型糖尿病并发甲亢的危险因素,采用Pearson相关分析2型糖尿病合并甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与糖代谢指标的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Sema 5A、IGFBP-3对2型糖尿病合并甲亢的诊断价值。结果合并组血清Sema 5A、IGFBP-3水平高于对照组和糖尿病组,且糖尿病组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。合并组糖尿病病程长于糖尿病组,血清HOMA-IR、FIN、HbA1c、T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、TRAB、TPOAB水平高于糖尿病组,TSH水平低于糖尿病组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logisitic回归分析结果显示,HOMA-IR、TPOAB、Sema 5A、IGFBP-3水平升高,TSH水平降低为2型糖尿病并发甲亢的危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,2型糖尿病并发甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与HOMA-IR、FBG、2 h PG、FIN、HbA1c、HDL-C水平均呈正相关(P<0.05)。2型糖尿病并发甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与LDL-C水平呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Sema 5A、IGFBP-3诊断2型糖尿病合并甲亢的曲线下面积(AUC)分别为0.854、0.804,2项指标联合诊断的AUC为0.900,且2项指标联合诊断的AUC高于Sema 5A、IGFBP-3单独诊断的AUC(Z联合-Sema 5A=2.156,P=0.043;Z联合-IGFBP-3=2.873,P=0.004)。结论2型糖尿病合并甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平升高,且二者与糖代谢指标密切相关。

转录因子Nkx2.5、ISL-1表达与小鼠胚胎心的早期发育

目的：探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法：胚龄7.5～13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结果：转录因子Nkx2.5在胚龄7.5d生心板表达早于心肌特异性蛋白MHC及SMA.随心外形建立,Nkx2.5在心各部表达逐渐增强.胚龄9d, Nkx2.5阳性表达从原始心管动脉端延伸至心包腔背侧脏壁中胚层及咽周围轴旁中胚层.Isl-1开始表达于胚龄8d原始心管心背系膜及前肠腹侧脏壁中胚层间充质,阳性细胞数量在11～12d达顶峰,形成前肠腹侧连接流出道远端和心房背侧壁的ISL-1阳性细胞带.11～12d,流出道远端出现Nkx2.5和MHC阴性,ISL-1、SMA阳性表达区.胚龄13d后,Nkx2.5和ISL-1在心和前肠腹侧间充质的表达强度下降.结论：Nkx2.5是原始生心区心肌前体细胞早期分化的标记蛋白,在第2生心区表达限于胚龄9d、咽周脏壁和轴旁中胚层心肌前体细胞亚群.第2生心区标记蛋白ISL-1主要表达在胚龄8～12d前肠腹侧脏壁中胚层心肌前体细胞,并向心管添加心肌细胞,参与流出道发育及心管成襻.11d后,第2生心区间充质细胞开始分化为升主动脉和肺动脉干平滑肌.

转录因子NKx2-5表达在大鼠右心室心肌重塑模型的变化

目的:观察增加大鼠右心室压力负荷后,右心室心肌重塑与同源盒转录因子NKx2-5表达的变化。方法:注射野百合碱(MCT)制作大鼠肺动脉高压模型,测量大鼠不同时间点肺动脉压和右心室肥厚指数;采用RT-PCR法和Westernblot分析,分别测定右心室心肌NKx2-5及其下游基因心房利钠因子(ANF)的mRNA及蛋白表达。结果:注射MCT后第14天,右室心肌明显肥厚,NKx2-5与ANF的mRNA及蛋白表达亦明显增加,与其呈明显正相关。结论:右心室壁压力负荷增加可作为原发性刺激,使在心脏胚胎发育早期表达的心脏同源盒基因NKx2-5表达增加,NKx2-5在成熟心肌重塑中可能起作用。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

心脏转录因子Nkx2-5、GATA-4真核表达质粒的构建

目的:构建人类心脏特异性转录因子Nkx2-5、GATA-4的真核表达质粒,探讨Nkx2-5、GATA-4在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法:以质粒人脑c DNA为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2-5、GATA-4编码区序列。将真核表达载体pCDNA 3.1-HA、pCDNA 3.1-flag分别和Nkx2-5、GATA-4的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCDNA 3.1-HA-Nkx2-5、pCDNA 3.1-flag-GATA-4,转化至大肠杆菌,质粒抽提后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果:成功设计引物扩增出Nkx2-5、GATA-4基因编码区约1 kbp及1.3 kbp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2-5、GATA-4基因序列。结论:成功构建了含有Nkx2.5、GATA4的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。

miR-372靶向E2F转录因子5抑制宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-372(miR-372)对宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞恶性生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈鳞状细胞癌组织及其癌旁组织中miR-372和E2F转录因子5(E2F5)表达水平,构建miR-372过表达和低表达SiHa细胞系(miR-372、anti-miR-372),采用MTT法、流式细胞术、Transwell法及Western blot分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况及其相关蛋白水平。在线预测miR-372与E2F5靶向关系并进行双色荧光素酶实验验证,在miR-372过表达SiHa细胞系上调E2F5,观察细胞增殖、凋亡和侵袭情况。结果:癌组织中miR-372表达低于其癌旁组织(P<0.05),而E2F5表达高于其癌旁组织(P<0.05)。miR-372过表达抑制细胞增殖、侵袭和核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin A1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)表达(P<0.05);上调细胞凋亡和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、Caspase-3、B淋巴细胞瘤2蛋白/Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2/Bax)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达(P<0.05)。miR-372可靶向抑制E2F5表达,E2F5过表达可缓解miR-372对SiHa细胞作用效果。结论:miR-372过表达可抑制SiHa细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡,可能与靶向作用抑制E2F5表达有关。

长链非编码RNA NEAT1、miRNA-182-5p与2型糖尿病合并代谢性脂肪性肝病患者肝纤维化风险的相关性研究

背景随着慢性代谢性疾病的发病率逐年增加,已威胁全民健康,目前非编码RNA与内分泌代谢相关疾病的研究已成为国内外研究热点,其中长链非编码RNA核富集转录体(lncRNA NEAT1)及微小RNA(miRNA)-182-5p在2型糖尿病(T2DM)合并代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)中的研究鲜有报道。目的探讨T2DM合并MAFLD患者lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p在肝纤维化发生、发展中的机制及临床意义。方法纳入2021年10月—2022年6月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院内分泌科就诊的T2DM患者236例为研究对象,同时纳入49名健康志愿者为健康对照组。收集研究对象一般资料与实验室检测结果。测定内脏脂肪面积(VFA)、皮下脂肪面积(SFA)。采集外周血,测定lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p。将T2DM患者其分为T2DM合并非MAFLD组(n=82)与T2DM合并MAFLD组(n=154)。进一步根据肝纤维化指数(FIB-4)将T2DM合并MAFLD组分为肝纤维化低危亚组(n=55)、肝纤维化中危亚组(n=69)、肝纤维化高危亚组(n=30)。采用Spearman秩相关分析探究肝纤维化高危亚组lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p表达水平的相关性,采用多因素有序Logistic回归分析探究T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结果健康对照组年龄、颈围(NC)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)低于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组,白蛋白(Alb)高于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组(P<0.05);T2DM合并MAFLD组BMI、腰围(WC)、VFA、SFA、稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、三酰甘油(TG)、血尿酸(SUA)、lncRNA NEAT1高于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,血小板计数(PLT)低于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,总胆固醇(TC)低于健康对照组(P<0.05);T2DM合并非MAFLD组HOMA-IR、lncRNA NEAT1高于健康对照组,miRNA-182-5p高于健康对照组、T2DM合并MAFLD组,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)低于健康对照组、T2DM合并MAFLD组(P<0.05)。肝纤维化低危亚组VFA、SFA、AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,BMI、WC、NC低于肝纤维化高危亚组,TC高于肝纤维化高危亚组(P<0.05);肝纤维化中危亚组PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化高危亚组,AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化高危亚组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,肝纤维化高危亚组患者lncRNA NEAT1与miRNA-182-5p呈负相关(r_(s)=-0.438,P<0.05)。多因素有序Logistic回归分析结果显示,lncRNA NEAT1(OR=1.326,95%CI=1.087~1.616)、VFA(OR=1.019,95%CI=1.006~1.033)、miRNA-182-5p(OR=0.083,95%CI=0.027~0.257)、PLT(OR=0.956,95%CI=0.942~0.970)、AST(OR=1.048,95%CI=1.022~1.075)是T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结论外周血lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p与T2DM合并MAFLD患者并发肝纤维化密切相关,为该病的早期预测及诊治提供依据。

血清miR-497-5p、FGF-2在阿尔茨海默病患者中的表达及相关性分析

目的探讨miR-497-5p、人成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)患者中的表达水平、诊断价值及两者的相关性。方法收集50例首诊AD患者和37例正常受试者(对照组)的临床资料,其中将AD患者分为轻度AD组18例、中度AD组18例和重度AD组14例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-497-5p的表达水平,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测FGF-2水平,采用简易精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)评估AD患者的认知功能,分析miR-497-5p与MMSE、FGF-2水平的相关性。采用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线评价miR-497-5p,FGF-2水平对AD的诊断效能。结果与对照组和轻度AD组比较,中度、重度AD组患者miR-497-5p表达水平明显升高(P<0.01),FGF-2水平明显下降(P<0.01);AD组miR-497-5p与MMSE评分、FGF-2水平呈负相关(r分别为-0.724、-0.748,P<0.01);ROC曲线分析结果显示,miR-497-5p、FGF-2及两者联合指标诊断中度、重度AD及鉴别轻度和中度,轻度和重度AD时,均有较高的曲线下面积、敏感度和特异性,两者联合指标诊断及鉴别效能最优。结论中重度AD患者血清miR-497-5p上调,FGF-2水平下调,两者联合检测对中重度AD有一定的诊断价值,并提供一定的参考。

2型糖尿病合并骨质疏松患者血清miR-9-5p和NFAT5的表达及其与骨折的关系

目的:2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种多病因代谢性疾病,骨质疏松(osteoporosis,OP)和骨折是其常见并发症。本研究旨在探讨T2DM合并OP患者血清中微RNA(microRNA,miR)-9-5p和核转录因子5(nuclear factor of activated T-cells 5,NFAT5)的表达水平,以及其与骨折的关系。方法:收集郑州市第七人民医院就诊的T2DM合并OP患者184例(OP组),另纳入同时间段单纯T2DM患者184例(T2DM组)。实时聚合酶链反应检测血清miR-9-5p、NFAT5表达水平。随访2年,根据新发骨折情况,将T2DM合并OP患者分为骨折组(43例)与无骨折组(141例)。Pearson法分析血清miR-9-5p、NFAT5分别与空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、I型前胶原N末端前肽(procollagen I N-terminal propeptide,PINP)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR)、骨密度T值、I型胶原羧基端β降解产物(type I collagen hydroxy terminal peptideβdegradation products,β-CTX)相关性,以及miR-9-5p与NFAT5的相关性;采用受试者操作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线评估血清miR-9-5p、NFAT5对T2DM合并OP患者骨折的预测价值,多因素logistic回归分析T2DM合并OP患者骨折的影响因素。结果:OP组血清miR-9-5p水平高于T2DM组,NFAT5水平低于T2DM组(均P<0.05)。与无骨折组相比,骨折组患者糖尿病病程、FPG、HOMA-IR、β-CTX、miR-9-5p水平均升高,而PINP、NFAT5水平均降低(均P<0.05)。骨折患者血清miR-9-5p与NFAT5水平呈负相关(r=−0.716,P<0.05);miR-9-5p水平与FPG、HOMA-IR、β-CTX均呈正相关,与PINP呈负相关(均P<0.05),而血清NFAT5水平与FPG、HOMA-IR、β-CTX均呈负相关,与PINP呈正相关(均P<0.05)。血清miR-9-5p、NFAT5单一预测T2DM合并OP患者骨折风险的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.878和0.868,联合预测的AUC为0.933。β-CTX、miR-9-5p为T2DM合并OP患者骨折的危险因素,PINP、NFAT5为T2DM合并OP患者骨折的保护因素(均P<0.05)。结论:T2DM合并OP患者血清miR-9-5p表达水平升高,NFAT5表达水平降低,两者与骨折发生均有一定关系,miR-9-5p联合NFAT5对骨折预测价值更高。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

微小RNA-483-5p调控TIMP2表达对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-483-5p(miR-483-5p)对膀胱癌(BC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步分析其可能的分子机制。方法通过TCGA数据库分析miR-483-5p在BC组织中的表达及与预后的关系,荧光实时定量PCR检测BC细胞T24中miR-483-5p和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2的表达水平。将miR-483-5p模拟物(mimic)和阻碍物(inhibitor)转染T24细胞,应用CCK-8和Transwell法评估miR-483-5p对T24细胞增殖和迁移侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验分析miR-483-5p和TIMP-2间的靶向关系,挽救实验验证miR-483-5p的生物学功能是否通过TIMP-2发挥作用。结果与癌旁组织比较,BC组织中高表达miR-483-5p(P<0.05),高表达miR-483-5p者的总生存率低于低表达者(P<0.05)。miR-483-5p mimic可促进T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),miR-483-5p inhibitor则抑制T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。TIMP2为miR-483-5p的下游靶点,干扰TIMP2可逆转miR-483-5p下调对T24细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论miR-483-5p在BC中高表达,与BC患者不良预后相关。miR-483-5p可下调TIMP2的表达来促进BC细胞的增殖、迁移和侵袭。