肿瘤抑制基因Nm23-M1原核表达载体的构建和表达

目的:构建鼠Nm23-M1基因的原核表达载体并进行表达。方法:应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术扩增Nm23-M1基因,将其克隆于pQE30质粒中,测序正确后,构建重组体pQE30-Nm23-M1,在大肠杆菌中诱导NM23-M1蛋白表达。结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示,在分子量大约17.5kD处有一诱导表达蛋白带,表达蛋白量占菌体蛋白量的15%,通过Westernblot证实,表达产物与抗人Nm23-H1单克隆抗体有特异性免疫反应。经Ni-NTA柱纯化,获得电泳均一性为92%的重组蛋白。结论:成功构建Nm23-M1表达载体,并获得了重组NM23-M1蛋白。

nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达

目的 探讨nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达.方法 给小鼠经尾静脉注射粒单核细胞白血病细胞株WEHI-3,同时选取正常小鼠作为对照组,取发病小鼠以及正常小鼠的骨髓,采取qRT-PCR的方法检测nm23-M1基因的表达情况,分析其与白血病发生及发展的关系.结果 粒单细胞白血病小鼠骨髓细胞中nm23-M1基因的相对表达量是正常对照组中的24倍,两组之间有显著性差异（P＜0.05）.结论 nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中高表达,并且与外周血白细胞数、骨髓原始细胞数以及脏器白血病侵袭情况相关,而与白血病小鼠的性别、年龄无关.

小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1/NDPK A的表达

nm23家族除与肿瘤转移抑制有关,它还参与调节正常细胞的发育、增殖、分化及凋亡等过程。运用RT-PCR、Western blot 和免疫组织化学技术,分析小鼠胚泡黏附时子宫内膜着床点和着床旁组织nm23-M1/NDPK A 的表达,以未交配鼠作对照,为进一步阐明胚泡着床的机制提供有意义的实验依据。RT-PCR 结果显示,小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1/NDPK A mRNA 表达明显高于对照组,并且着床点明显高于着床旁,Western blot 和免疫组织化学分析nm23-M1/NDPK A 蛋白表达,也得到一致的结果。提示nm23-M1/NDPK A 参与胚泡着床这一重要生命活动过程。

RNA干扰抑制nm23-M1基因表达对骨髓瘤SP2/0细胞增殖的影响

建立RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制nm23-M1基因表达的骨髓瘤SP2/0细胞株,初步探讨nm23-M1基因对小鼠骨髓瘤细胞增殖的影响。针对nm23-M1 mRNA序列设计3个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,分别构建表达这3个序列及阴性对照序列的pGenesil-1重组质粒,再转染小鼠骨髓瘤SP2/0细胞并经G418抗性筛选稳定表达细胞株。采用半定量RT-PCR及Western印迹检测3个重组质粒对nm23-M1 mRNA及蛋白质表达的抑制效果,然后用MTT法观察抑制nm23-M1表达对SP2/0细胞增殖的影响。结果显示,设计的3条siRNA不同程度地特异抑制骨髓瘤SP2/0细胞nm23-M1 mRNA及蛋白质的表达,其中siRNA-2抑制作用最强,其对nm23-M1 mRNA和蛋白质的抑制率分别为74.4%和62.1%;且siRNA-2抑制nm23-M1基因表达后SP2/0细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。本研究成功构建了pGenesil-1-nm23-M1 siRNA重组质粒,筛选出稳定抑制nm23-M1基因表达的SP2/0细胞株,提示抑制nm23-M1基因表达有抑制骨髓瘤细胞增殖的作用;为进一步研究nm23基因的生物学功能及临床应用打下了基础。