树状多节孢的双亲灭活原生质体融合

以紫杉醇产生菌树状多节孢HQD33的诱发突变株UL50-6为出发菌株，将收集到的出发菌株UL50-6和UL40-19的菌丝体分别用pH5.5-6.0的0.7mol/L NaCl配制的3%溶壁酶、2%蜗牛酶、1%溶菌酶组成的复合酶系，30℃恒温酶解3-5h，制备原生质体。两菌株的原生质体经纯化后分别用热和紫外线灭活，其中UL50-6的原生质体在54℃热灭活5分钟，UL40-19的原生质体在30W紫外灯下，30cm，照射85秒进行紫外灭活，双亲株的原生质体存活再生率为零。同时对融合条件进行了初步探索，以含有Ca^2+和Gly的35%-40%的PEG作为融合剂，融合时间为20分钟时，融合率可以达到4.44×10^-2-6.92×10^-2。对融合株TPF-1与双亲株的形态学、可溶性蛋白、过氧化物同工酶进行分析，确证其为双亲株的融合子。