过表达Nogo-C对PC12细胞存活及增殖的影响

以PC12细胞为神经元细胞模型,研究Nogo-C对神经元细胞存活及增殖的作用。在PC12细胞中转染过表达Nogo-C,使用G418药物筛选以获得稳定表达的细胞克隆,利用Hoechst33342染色、细胞计数、MTT以及流式细胞仪等技术检测Nogo-C对细胞增殖以及细胞周期的影响。结果表明:(1)Hoechst33342染色未观察到表达Nogo-C的细胞发生明显凋亡;(2)细胞计数及MTT实验观察到转染Nogo-C后的PC12细胞生长增殖活性明显降低;(3)流式细胞仪检测细胞生长周期,正常PC12细胞G1期的百分数为(37.8±7.9)%,S期为(50.4±8.5)%,而转染Nogo-C的PC12细胞G1期为(76.8±4.1)%,S期为(14.7±1.7)%,提示转染Nogo-C的PC12细胞的细胞周期被阻滞在G1期;(4)没有获得稳定表达Nogo-C的PC12细胞模型。实验证明,过表达Nogo-C通过使PC12细胞周期被阻滞在G1期而明显抑制细胞的增殖,但是并不引起细胞的凋亡。

Nogo-C对PC12细胞分化和突起生长的影响

目的:利用PC12细胞研究Nogo-C和神经元细胞分化及突起生长的关系.方法:NGF诱导PC12细胞,利用RT-PCR及免疫荧光技术检测细胞内Nogo-C的表达,并在PC12细胞中过表达Nogo-C,通过细胞计数检测Nogo-C对突起生长的影响.结果:①RT-PCR检测到NGF诱导的PC12细胞中有少量Nogo-C的mRNA分子表达;②免疫荧光染色观察到NGF诱导的PC12细胞中有少量Nogo-C的表达;③细胞计数观察到转染Nogo-C后的PC12细胞在NGF诱导后突起增长百分数相对于EGFP组明显增高.结论:NGF诱导的PC12细胞中有Nogo-C的表达,同时过表达Nogo-C可促进NGF诱导下的PC12细胞的分化以及影响细胞的突起生长.

中国广西人群Nogo-C基因rs17046518G/A多态性研究

目的了解Nogo-C基因3'-非翻译区单核苷酸多态性(SNP)各等位基因及基因型在中国广西地区人群中的分布频率,比较其在不同种族间分布的差异,旨在为人类学及群体遗传学研究提供前瞻性基础资料。方法采用单碱基延伸的PCR技术和DNA测序法检测199例中国广西人的Nogo-C基因3'-非翻译区rs17046518 G/A多态性,并结合人类基因组计划(Hapmap)公布的四个人群(欧洲人、非洲人、日本人和中国北京人)的SNP分型数据,比较分析这五个人群的基因型及等位基因的分布频率。结果 Nogo-C基因型AA、GA和GG频率分别为69.8%、25.1%和5.0%;等位基因A、G频率分别为82.4%和17.6%。其基因型及等位基因频率在男女组间比较差异无显著性;但与欧洲和非洲人群比较,Nogo-C基因多态性的分布频率均存在显著性差异(P均<0.05);而与日本和北京人比较差异无显著性。结论在中国广西人群中存在Nogo-C基因多态性,且与性别无相关性。Nogo-C基因型分布及等位基因频率在不同种族间存在明显差异,符合遗传学规律。此为进一步人类学及群体遗传学的研究和基因多态性普查奠定了基础,并为进行疾病前瞻性研究提供了重要的分子遗传学数据。

Nogo-A反义寡核苷酸对大鼠脑缺血再灌注PKC-RhoA信号通路的影响

目的:研究侧脑室注射Nogo-A反义寡核苷酸对大鼠脑缺血再灌注后蛋白激酶C(PKC)-Rho A信号通路的影响。方法:40只大鼠,随机分为假手术组(A组)、再灌注6 h组(B组)、再灌注24 h组(C组)、再灌注72 h组(D组)、再灌注1周组(E组)、再灌注2周组(F组)、Nogo-A 72 h组(G组)、Nogo-A 1周组(H组),每组5只。制备大鼠脑缺血再灌注模型,A组不造成缺血,B、C、D、E、F组缺血后分别再灌注6 h、24 h、72 h、1周、2周,G、H组分别在缺血后脑室注射Nogo-A反义寡核苷酸后再灌注72 h、1周。分别用RT-PCR及Western blot检测缺血周围区大脑皮质PKCγ、Rho A的m RNA及蛋白表达的变化。结果:与A组比较,B组大脑皮质PKCγm RNA表达明显增加(P<0.01),C组降至正常(P>0.05),D组出现第2次升高(P<0.01),E组最高(P<0.01),H组较E组表达明显下降(P<0.05)。与A组比较,B、D、E组Rho A m RNA表达明显增加(P<0.01),G、H组较D、E组表达明显下降(P<0.05)。与A组比较,B、D组的PKCγ蛋白表达增加(P<0.05),E组明显增加(P<0.01),G、H组较D、E组表达明显下降(P<0.05)。与A组比较,B、D、E组的Rho A蛋白表达增加,G、H组较D、E组表达明显下降(P<0.05)。结论:PKCγ及Rho A基因表达在大鼠脑缺血再灌注后有两个高峰,后一个高峰与Nogo A的升高相一致。脑室注射Nogo-A反义寡核苷酸能抑制PKCγ及Rho A的表达,表明缺血后Nogo-A的升高参与PKC/Rho A信号通路的激活。

Nogo蛋白与心肌纤维化关系的研究进展

Nogo蛋白是网状蛋白家族的第4个成员,编码基因转录产生的Nogo mRNA由于启动子和剪切方式不同形成3种不同的RNA转录体,分别为Nogo-A、Nogo-B和Nogo-C蛋白。Nogo蛋白最初在中枢神经系统中被发现,后证明广泛表达于心、肝和血管内皮等外周组织。研究表明,Nogo蛋白可通过RhoA/Rho相关激酶(ROCK)通路、内质网应激、Sce61α等多种信号通路参与心肌纤维化的调控过程。我们就Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C与心肌纤维化的关系作简要介绍。

家鸽、毛腿沙鸡和灰斑鸠视网膜结构的观察比较

为探讨家鸽、毛腿沙鸡和灰斑鸠视网膜组织结构与其生活环境适应的关系,用光镜观察了3种动物视网膜的组织结构,测量了3种动物视网膜各层厚度、3个核层的胞核层数及胞核直径。用免疫组化观察了Nogo C蛋白在3中动物视网膜的表达情况。结果表明:家鸽、毛腿沙鸡和灰斑鸠视网膜均由4层细胞构成,在显微镜下分为10层。家鸽、毛腿沙鸡和灰斑鸠视网膜平均厚度分别为416.29、437.90、419.36μm。毛腿沙鸡视网膜内核层和节细胞层的层数比家鸽和灰斑鸠的多,视细胞数亦较家鸽和灰斑鸠的多。毛腿沙鸡和灰斑鸠视网膜内核层、内网层、节细胞层和神经纤维层4层厚度所占总厚度比例(分别为69.77%、68.05%)要比家鸽(49.97%)的高。表明毛腿沙鸡具有比家鸽和灰斑鸠更强的视觉分辨能力和对强光的适应能力,毛腿沙鸡和灰斑鸠的视神经要比家鸽的发达。Nogo C蛋白在正常状态下视网膜中的表达可能发挥某些特定的生理作用,但还需进一步研究。