不同来源白色念珠菌的基因型及耐药性分析

为了研究不同来源白色念珠菌的基因型及耐药性情况,试验对患病鸡、鸭、鹅进行白色念珠菌的分离,用特异性引物扩增分离株的25S rDNA分析其基因型,用抗真菌药物伊曲康唑、制霉菌素、两性霉素B等对分离株进行耐药性分析。结果显示:从鸡、鸭、鹅中分离得到三株白色念珠菌CaJ、CaY和CaE,其基因型分别为A型、A型和B型,耐药性试验结果显示三株分离株对制霉菌素和两性霉素B均表现出了较高的敏感性,但对其它药物表现出不同程度的耐药性。说明部分药物临床中可能使用过多,来自不同家禽的白色念珠菌在耐药性方面有所不同。

Isolation of a novel antifungal peptide from the bark of Eucommia ulmoides Oliv

A novel Eucommia antifungal peptide, named EAFP3, was isolated from the bark of Eucommia ul- moides by NaC1 extract, gel filtration and reverse phase high performance liquid chromatography. The molecular mass of EAFP3 is 4157.3 Da, and its partial amino acid sequence is -. LYQQLIAGITLNK.-. EAFP3 exerts an inhibitory activity against Candida albicans in vitro and the drug concentration required for 50% growth inhibition （IC50） is 31.25μg/mL.

临床分离一株具有荚膜的白假丝酵母菌

【目的】观察白假丝酵母菌临床菌株的荚膜结构并探讨其形成条件。【方法】临床标本直接涂片染色镜检和用沙保氏琼脂平板、琼脂斜面及沙保氏液体培养基培养、用涂片革兰染色和Hiss荚膜染色镜检、出芽试验、厚膜孢子形成试验、糖发酵试验、小白鼠与家兔试验、扫描电镜与透射电镜观察等进行鉴定。【结果】(1)该临床分离菌为革兰阳性、念珠状菌;能形成芽管、假菌丝、厚膜孢子;能发酵葡萄糖和麦芽糖产酸又产气;发酵蔗糖产酸不产气;不发酵乳糖。(2)人阴道分泌物涂片、感染小白鼠及家兔体内及沙保氏液体培养基培养均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同环境及培养时间的长短而有差异,但均≥0.2滋m,边界明显。沙保氏液体培养物经离心(1500r/min,15min,3次)荚膜层仍然可见。【结论】该菌株可被鉴定为具有荚膜的白假丝酵母菌。

株具有荚膜的白假丝酵母菌的分离与鉴定

取临床标本(性病门诊病人阴道分泌物)直接涂片染色镜检及用沙保氏琼脂平板分离培养、作涂片革兰染色镜检、出芽试验、厚膜孢子形成试验、糖发酵试验等鉴定菌种;小白鼠与家兔试验、荚膜肿胀试验、透射电镜等观察荚膜,观察白假丝酵母菌临床分离菌株(C1-1、C1-2、C1-3、C1-4)的荚膜结构并探讨其形成条件。结果显示:(1)C1-1、C1-2、C1-3、C1-4四株临床分离菌株均为革兰阳性、念珠状菌;能形成芽管、假菌丝、厚膜孢子;能发酵葡萄糖和麦芽糖产酸又产气;发酵蔗糖产酸不产气;不发酵乳糖。(2)在感染小白鼠及家兔体内均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同环境而有显著差异(P<0·01或<0·05),边界明显;荚膜肿胀试验阳性。4株临床分离菌株均可被鉴定为具有荚膜的白假丝酵母菌。

非白念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性分析

目的了解非白念珠菌对我国常用抗真菌药物的耐药状况。方法采用Rosco Neo-Sensitab纸片扩散法检测116株非念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性。结果除2株光滑念珠菌对两性霉素B耐药外,其它菌株均对两性霉素B敏感;86.4%的热带念珠菌和80%的近平滑念珠菌对氟康唑敏感;光滑念珠菌对两性霉素B、氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为3.6%、16.1%和10.7%;所有克柔念珠菌对氟康唑和氟胞嘧啶均耐药。结论绝大多数非白念珠菌对两性霉素B敏感,克柔念珠菌对氟胞嘧啶及三唑类抗真菌药物的耐药率高,光滑念珠菌对常用抗真菌药物包括两性霉素B的敏感性低,对三唑类抗真菌药物的耐药率高,且对三唑类抗真菌药物存在交叉耐药。

白假丝酵母菌不同菌株对动物致病性的对比性观察

目的观察白假丝酵母菌标准菌株（CCCMC1 a、ATCC 14053）与临床分离菌株（C1-1,C1-2,C1-3,C1-4）对小鼠与家兔的致病情况,并探讨不同菌株对动物致病性与荚膜厚薄的关系。方法小鼠及健康成年家兔按上述菌株不同分为CCCMC1 a,ATCC 14053,C1-1,C1-2,C1-3,C1-4共6组,每组小鼠20只,家兔12只;将实验菌种沙保氏琼脂36h培养物用生理盐水配成约含1×10^9个/m l的菌悬液,家兔耳缘静脉注射,1~1.5 m l/只;对BALB/c小鼠腹腔注射,0.5m l/只,于注射后6 h开始密切观察动物的反应,连续观察7 d,记录动物发病情况：发病天数、死亡天数及死亡动物数、动物死亡率、存活动物数等,比较不同菌株对动物的致病性。待实验动物死亡后,分别取家兔肾组织印片及小鼠腹腔液涂片进行H iss荚膜染色镜检,用显微测微计测量荚膜层的厚度,各菌株随机计数40个酵母细胞的荚膜层的厚度值,取各菌株荚膜层厚度的均值进行比较,并且与菌株的动物致病性相联系,观察是否具有一定的规律性。结果C1-2和C1-4相对于C1-1,C1-3,CCCMC1 a,ATCC 14053来说,具有很强的动物致病性。标准菌株和临床分离菌株在家兔及小白鼠体内均可形成荚膜,荚膜层的厚度可因不同菌株和不同动物体内形成而有显著差异,P〈0.01或P〈0.05。结果显示,兔肾感染灶的菌细胞较小鼠腹腔内菌细胞的荚膜明显宽厚,C1-1,C1-2,C1-3,C1-4组的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜比CCCMC1 a,ATCC 14053明显宽厚,其中对动物高致病性的C1-2和C1-4的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜最为宽厚。结论C1-2和C1-4具有很强的动物致病性,它们的荚膜与其它菌株相比较也更宽厚。荚膜可能是白假丝酵母菌的毒力因子,荚膜的宽厚与动物的致病性有着密切的联系。

海洋来源链霉菌M10抗白色念珠菌活性物质研究

对从大连海域沉积物样品中分离得到的海洋放线菌进行活性筛选,获得了1株对白色念珠菌具有良好拮抗活性的菌株M10.基于16S rRNA的系统发育分析表明,M10菌株与分离自植物根际土壤的模式菌种摩洛哥链霉菌(Streptomyces marokkonensis)DSM 41918T的亲缘关系最近.对M10菌株的发酵产物进行活性追踪,M10菌株拮抗白色念珠菌的活性物质存在于乙酸乙酯相中,在低于60℃时具有较好的热稳定性,在pH值介于3～8之间具有良好的酸碱稳定性,但pH值升至9～12时活性明显下降.采用溶剂萃取、柱色谱层析及制备HPLC等方法对M10菌株发酵液中的有机相活性物质进行了分离,得到2种纯化合物A和B,其最小抑菌浓度分别为0.125、0.250μg/cm3;红外光谱分析表明A和B组分可能是不饱和酮酯类和不饱和苯衍生物.本文首次报道了海洋来源的摩洛哥链霉菌近缘菌株抗白色念珠菌活性物质的分离纯化,可为进一步开发利用海洋来源的新型抗真菌药物库提供参考.

平板色素环法快速分离鉴定白色念珠菌

目的建立快速分离鉴定白色念珠菌的方法。方法将临床标本直接接种于白色念珠菌生物形态分型培养基上，在５％～１０％ＣＯ２孵育４８～７２ｈ，如有红褐色色素环形成定为白色念珠菌。结果１５４株白色念珠菌均可出现红褐色色素环；类星形念珠菌、热带念珠菌和部分近平滑念珠菌虽也出现色素环，但呈草绿色；其他菌不形成色素环。平板色素环法快速分离鉴定白色念珠菌的敏感性为９７．９％，特异性９４．２％，准确性９６．７％。结论本法快速，简便，其敏感性、特异性及准确性均达到临床分离和鉴定念珠菌的要求。

红树共附生微生物分离与抗白色念珠菌活性评价

对湛江市廉江高桥、东简北港2个红树林区红树的根、叶、花、果不同部位27份样品进行共附生微生物的分离及抗白色念珠菌活性的评价。采用改良M1培养基、改良马丁培养基和改良高氏一号培养基进行细菌、真菌和放线菌的分离,用美蓝酶标仪法对所筛菌株进行抗白色念珠菌活性评价。利用SPSS13.0软件对数据进行单因素方差分析和多重比较。从27份样品中共分离出384株红树林共附生微生物,其中细菌170株,真菌160株,放线菌54株,细菌和真菌为优势菌群,两者占分离总菌株数的86.0%;从384株分离菌中检测出64株具有抗白色念珠菌活性,占分离菌的16.7%;统计分析显示,除2个地区的抗白色念珠菌活性数无显著差异外,2个地区的红树共附生微生物的组成、不同类型共附生微生物的数量、不同类型共附生微生物的抗白色念珠菌活性、红树不同部位的共附生微生物数量与活性菌株数量均存在一定的差异。

海洋分离芽胞杆菌抗白念珠菌活性物质的理化性质及类别

为寻找新型抗真菌活性物质,采用管碟法对7株分离自海洋的芽胞杆菌在不同Na Cl浓度下产生抗白念珠菌活性物质特性、活性物质的耐热性及不同p H值条件下的活性进行了比较,八大溶剂系统纸层析法对活性物质的类别进行了初步鉴定。结果表明,随着Na Cl浓度的变化产生活性物质的量也在变化,Na Cl浓度达7%时均不能产生,但在正常海洋环境盐浓度（Na Cl含量2%~3%）下都产生;活性物质有很强的耐热性和耐酸碱性,说明其较稳定;7株菌产生的抗白念珠菌活性物质均为碱性水溶性抗生素。由于目前临床上抑制人体病原真菌活性物质绝大多数为脂溶性,因而这些芽胞杆菌产生的抗白念珠活性物质有可能为新型物质,此外本研究结果为这些菌株所产生活性物质的分离纯化提供了依据。

自肺结核患者痰标本分离一株白念珠菌荚膜菌株

目的:自肺结核患者分离与鉴定白念珠菌荚膜菌株,以进一步探讨该菌荚膜的致病性及其与结核病并发感染的关系。方法:取肺结核患者痰标本,直接涂片染色镜检及用沙保氏琼脂平板分离培养、沙氏斜面培养基纯培养,作涂片革兰染色镜检、出芽试验、厚膜孢子形成试验、糖发酵和糖同化试验等鉴定菌种;家兔试验、荚膜肿胀试验、透射电镜等作荚膜结构的鉴定。结果:(1)临床分离菌株为革兰阳性、念珠状菌;能形成芽管、假菌丝、厚膜孢子;能发酵葡萄糖和麦芽糖产酸又产气;发酵蔗糖产酸不产气;不发酵乳糖。葡萄糖、麦芽糖、蔗糖同化试验阳性,乳糖同化试验阴性。(2)在感染家兔体内可形成荚膜,边界明显;荚膜肿胀试验阳性。结论:该菌株可被鉴定为具有荚膜的白念珠菌。

广东中山地区养鸽场的白色念珠菌感染状况调查

用CHROMagar念珠菌显色培养基对广东中山地区3个鸽场的乳鸽、童鸽和种鸽食道、嗉囊拭子进行划线培养,调查白色念珠菌的感染率;对分离到的9株鸽白色念珠菌进行了6种抗真菌药物的敏感性试验。结果表明:乳鸽的感染率为32%～60%,童鸽28%～60%,种鸽20%～30%;9株鸽白色念珠菌对两性霉素B、制霉菌素、酮康唑、咪康唑、氟康唑和伊曲康唑均敏感。

多位点序列分析法在白念珠菌性阴道炎唑类耐药菌株分子流行病学研究中的运用

目的运用多位点序列分析(MLST)法对白念珠菌性阴道炎患者阴道分离的对唑类抗菌药物耐药的白念珠菌临床菌株进行分子流行病学调查,对比耐药株和敏感株之间的基因型差异,分析其分子流行病学特征并研究耐药株的遗传多样性和种群关系。方法对上海市嘉定区中心医院2015年7月—2016年6月的白念珠菌性阴道炎患者的白带样本进行真菌培养、鉴定及体外药物敏感性试验,共收集60株对氟康唑、伏立康唑和伊曲康唑中1种或多种药物耐药的菌株;另收集同期对3种药物均敏感的菌株38株。采用MLST法对耐药菌株和敏感菌株进行分析,采用Bio Numerics 7.6软件进行亲缘性和聚类分析。结果耐药菌株组存在14种序列类型(ST),其中9种已报道,主要型别为ST310、ST1364、ST2551和ST135;敏感菌株组存在19种ST,其中12种已报道,主要型别为ST2048和ST1474。耐药菌株组的ST数/菌株数比值低于敏感菌株组,且2个组的ST数与菌株数均呈线性正相关关系(耐药菌株组:r=0.995,P=0.005;敏感菌株组:r=0.989,P=0.011)。亲缘性分析显示耐药菌株各基因型间的亲缘性要近于敏感菌株。聚类分析显示耐药菌株的种群形成了多级分支,ST310、ST1364和ST2551同处于第1分支,ST135为第2分支,其主要ST型别之间形成了较为明显的聚类分布。结论 MLST法结果显示上海市嘉定区中心医院临床分离的白念珠菌为多克隆性,唑类药物耐药菌株的基因型分布较敏感菌株更为集中。耐药菌株各基因型间的亲缘性要近于敏感菌株,且其种群分类的基因型呈明显的聚类分布。

鸽白色念珠菌的分离与鉴定

从南京某个信鸽养殖户处的1只病死鸽中，分离到两株真菌，光镜观察该菌具有假菌丝，产生芽生孢子，革兰氏染色阳性。能发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇，产酸产气，不分解乳糖、棉子糖、菊糖、甘露醇等。不液化明胶。动物试验，免于腹部皮下局部脓肿。该菌对替硝唑和制霉菌素具有敏感性。病原鉴定结果和生化特性指标均符合白色念珠菌。

穿心莲内酯对白假丝酵母菌氟康唑耐药株黏附作用的影响

目的探讨中药有效成分穿心莲内酯(Andrographolide,AG)对白假丝酵母菌黏附作用的影响。方法采用XTT减低法分别评价AG对白假丝酵母菌早期黏附的影响;倒置显微镜观察该药对生物膜形成的早期形态学影响;采用实时荧光定量PCR法检测其黏附相关基因ALS3、EAP1、ALS1的表达量。结果 AG对白假丝酵母菌2 h的早期黏附的干预作用较明显;qRT-PCR结果表明AG可显著抑制ALS3、EAP1的表达,但对ALS1的表达具有促进作用。结论 AG可能通过抑制白假丝酵母菌某些黏附基因的表达而抑制其早期黏附。

龙胆泻肝汤氯仿提取物抑制白念珠菌VVC临床株水解酶活性

该研究探讨龙胆泻肝汤氯仿提取物(CELX)对白念珠菌VVC临床株外分泌水解酶的影响。分别采用牛奶培养基、蛋黄培养基、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80)培养基对15株白念珠菌VVC临床株进行分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)、磷脂酶(PL)、脂肪酶(Lip)阳性菌株的筛选;牛奶平板法、蛋黄平板法、吐温-80平板法分别检测CELX干预后,Sap,PL与Lip的活性变化;qRT-PCR检测基因SAP1~7,10,PLB1~2,LIP3~6的表达量。结果可见,15株VVC临床株的Sap,PL均为阳性,11株Lip阳性菌株。随着CELX剂量的递增,与空白对照组相比,各含药培养基(牛奶培养基、蛋黄培养基、吐温-80培养基)上菌落的沉淀圈逐渐减小,当药物达256 mg·L-1时,菌落沉淀圈几乎消失,酶活力显著减弱。qRT-PCR结果显示,256mg·L-1CELX时,除SAP5,SAP6外,SAP1,SAP2,SAP3,SAP4,SAP7,SAP9,SAP10分别下调了62%,55%,62%,84%,61%,51%,68%;PLB1下调了67%;LIP3,LIP4,LIP6分别下调了51%,54%,55%。研究表明,CELX能抑制白念珠菌重要毒力因子天冬氨酸蛋白酶、磷脂酶与脂肪酶的活性。

2017-2020年克拉玛依市中心医院抗菌药物使用强度与分离菌耐药性变化情况

目的分析克拉玛依市中心医院2017-2020年住院患者常见分离菌分布及耐药率的变迁情况,为指导抗菌药物临床合理应用提供依据。方法收集2017-2020年克拉玛依市中心医院住院患者抗菌药物使用情况及分离菌,分析主要分离菌对常见抗菌药物的耐药率变化趋势。结果 2017-2019克拉玛依市中心医院抗菌药物使用率和使用强度呈下降趋势,4年共有分离菌12 135株,其中革兰阳性菌2 567株,占21.15%;革兰阴性菌6 310株,占52.00%;真菌3 258株,占26.85%。居前5位的分离菌分别是白色假丝酵母菌(19.59%)、大肠埃希菌(16.84%)、肺炎克雷伯菌(13.33%)、鲍曼不动杆菌(8.71%)和铜绿假单胞菌(7.94%)。主要分离菌对常用抗菌药物耐药率总体呈下降趋势,肠杆菌科细菌对临床常用抗菌药物耐药性下降最明显。结论克拉玛依市中心医院分离菌逐年增加,耐药率有下降趋势,抗菌药物临床应用基本合理,但需完善真菌检测能力。