非聚丙烯酰胺凝胶电泳(Non-PAGE)的复杂蛋白质组表达分析:一种新的二维液相技术用于完整蛋白质的高通量分离分析

揭示基因组-转录子组-蛋白质组(Genome-transcriptome-proteome)的关系、描绘蛋白质翻译后修饰(PTM)的途径、常规地运用质谱(MS)技术进行蛋白质的定性和识别,这三方面的力量和需求将推动日后的新药开发.在过去的几年里,蛋白质定性和蛋白质组学研究的突飞猛进有赖于这三方面发展的相结合,这种整合成为生物技术研发(R&D)工作流程的一个典范.正如人类基因组计划的经验,研究生物相关体系中的复杂蛋白的表达同样亟待新的分析技术和手段.

SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化

[目的]研究SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化。[方法]采用交互正交设计L27(313)对苦荞SRAP-PCR反应体系进行了5因素(Mg2+、dNTP、Taq酶、模板DNA和引物)3水平优化筛选,比较了非变性和变性PAGE检测方法,并进行了DYCZ-24F与DYCZ-20C2种电泳操作系统的对比试验。[结果]4个单因素(Mg2+、dNTP、Taq酶和引物)和2个交互作用(Mg2+×dNTP、Mg2+×Taq酶)对苦荞SRAP-PCR有极显著影响;最佳反应体系为:20μl总体积,Mg2+1.5mmol/L,dNTP0.2mmol/L,Taq酶1.5U,模板DNA40ng,引物0.25μmol/L,10×缓冲液2μl。运用该体系对7份苦荞材料进行扩增,扩增条带清晰、多态性高、重复性好。将扩增产物进行非变性与变性PAGE和2种电泳操作系统检测,结果显示非变性PAGE、DYCZ-24F操作系统更适合于SRAP的分析。[结论]为今后构建苦荞SRAP遗传图谱奠定了基础。

鸭梨采后果肉LOX同工酶变化及其与果实褐变关系的研究

以河北鸭梨为试材,通过鸭梨果实褐变指数和果肉LOX同工酶变化的测定,研究缓慢和急速2种降温处理对不同成熟度鸭梨果肉褐变情况和LOX同工酶活性的影响。结果表明,果实褐变严重程度为:晚采果>早采果>中采果,急速降温>缓慢降温,因此,鸭梨的最佳储藏方法为中采鸭梨(9月中旬)采用缓慢降温处理。鸭梨果肉中LOX同工酶有9条,急降温和缓降温处理对不同成熟度鸭梨果实LOX同工酶表达有一定的影响。急速降温处理比缓慢降温的LOX同工酶活性高,不同成熟度LOX酶活性大小顺序为:晚采果>中采果>早采果,这与褐变指数测定的结果相一致,暗示了脂肪氧合酶与鸭梨果肉的褐变有密切的联系。

基于Flex技术的虚拟演示实验系统

富客户端技术(RIA)的成熟技术之一———Flex技术应用在虚拟实验系统改变了以往的B/S模式,客户端通过Remote Object远程方法,调用Data Management Services以及Message Services同J2EE服务器集成在一起。应用Flex技术对大学物理虚拟演示实验的设计开发,实现了全新页面无刷新技术、改进了实验系统界面以及交互方式,给学习者带来了良好的体验,提升了学习效果。

硅胶、脯氨酰内肽酶处理对啤酒非生物稳定性的影响

采用SDS-PAGE电泳,对分别经硅胶吸附和脯氨酰内肽酶水解的啤酒后酵液进行蛋白分布研究;通过测定浊度和泡持性研究二者对啤酒非生物稳定性的影响。结果表明经硅胶吸附和脯氨酰内肽酶水解后的蛋白分子量均集中在8ku-14.4ku和35ku-45ku;经处理后的样品浊度明显下降,而泡持性没有显著变化。其中用脯氨酰内肽酶处理时浊度下降更明显,且对啤酒的泡持性影响更小。因此,在啤酒后酵液中添加脯氨酰内肽酶,能够有效的除去啤酒冷混浊蛋白,提高啤酒的非生物稳定性。

聚丙烯酰胺凝胶电泳的一种辅助辨型方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是实验室常用的基本鉴定方法之一。但由于做胶方式以及各实验室仪器设备良莠不齐,经过一系列纷繁复杂的操作,电泳结果未必尽如人意。其中凝胶带型的判断就是一个较为困惑的问题,一般的聚丙烯酰胺胶跑出的条带总体上都有弧度,越是靠近凝胶两侧越是严重。在本实验中,我们设计了一种较为简单易行的方案,即将难以区分的条带样品做成混合样marker来辅助辨型,通过调整电压和凝胶浓度来达到区分条带的目的。我们用该方案可以将相差0～3bp大小的条带区分开来。

籼稻体细胞胚胎发生特异性蛋白质研究

以籼稻Oryza sativa L. subsp. indica品种“广陆矮4号”幼穗和种子为外植体,在含有2,4-D 2.0mg/L的MS培养基上,分别形成胚性和非胚性愈伤组织,建立体细胞胚胎发生实验系统。应用Native/SDS双向凝胶电泳分析,结果表明,非胚性愈伤组织分化培养前后均存在一种分子量为45kD的非胚性蛋白质N1,另一种非胚性蛋白质N2(54kD)仅在分化培养前的非胚性愈伤组织中含量丰富。胚性愈伤组织则在分化培养后,产生特异性胚胎蛋白质E1(51kD)和E2(68kD)。分化培养基中的蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CH)抑制E1和E2的产生,转录抑制剂放线菌素D(Act.D)仅抑制E2的出现。

利用蛋白质SDS-PAGE电泳方法检测转基因大豆的初步研究

为建立利用蛋白质检测转基因大豆的较稳定的新方法,采用SDS-PAGE蛋白质电泳方法对转基因大豆和非转基因大豆进行检测,初步研究发现转基因大豆中大约45 ku蛋白带的表达量明显强于非转基因大豆中相对应的蛋白带,通过固定转基因大豆的上样量,逐渐增加非转基因大豆的上样量进一步验证了结果。以国内不同品种的非转基因大豆进行SDS-PAGE蛋白电泳检测,初步排除了结果偶然性的产生。

程序行为分析指导TLB低功耗设计

TLB(Translation Look-Aside Buffer,变换旁视缓冲器)是存储管理单元中完成访存地址转换的核心。但研究发现TLB工作时可以消耗微处理器芯片约17%的功耗。因此,TLB低功耗设计已经引起研究者的重视。通过对经典基准测试集程序访存行为的详细分析和仿真可知,在页面非连续访问时,页面间隔统计参数能够很好地指导TLB的低功耗设计。从这一角度出发,提出了低功耗的TLB设计方法。实验结果显示,改进后的TLB片上功耗明显降低。

运用非参数统计方法的科技投入对比研究——基于江西省2006—2010年的时序数据分析

利用非参数统计的方法,可以减少实际应用中对假设条件的依赖,不受样本分布形式限制。利用Page检验对2006—2010年江西省11个地级市的科技投入数据进行对比分析,结果表明,其间江西省的科学技术总体水平是不断提高的,各地级市的科技投入与其经济发展基本协调,但各地的科技投入相差幅度较大。

猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究

用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。

一种新型抗癌药的蛋白质和蛋白酶分析

本文用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和活性电泳技术定性分析了河南省生物工程重点实验室研制的新型抗癌药的蛋白质和蛋白酶的种类和含量．结果表明：（１）文中方法能有效地浸提所用各材料中的有效成份；（２）不同材料所含蛋白质和蛋白酶种类有较大差异；（３）在连续浸提新型抗癌药有效成份过程中，第二次从各材料中浸提的蛋白酶活性高于第一次．综合分析表明，第二次浸提效果好于第一次．

蛋白质电泳非样品条带来源分析

目的:分析十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中非样品条带的来源,并探讨其消除及控制方法。方法:在每个凝胶梳孔只加全成分上样缓冲液或缺少某些成分的试液,不加蛋白样品直接电泳,观察非样本条带出现情况,再分别对上样缓冲液中还原剂、甘油成分设置成不同浓度梯度进行电泳分析,观察条带表现。另外观察不同的上样梳预处理对条带表现的影响,明确非样品条带来源,找到去除方法。最后,进一步通过副溶血弧菌蛋白电泳结果验证非样品条带控制方法的有效性。结果:在未对上样梳进行特别处理的情况下,上样试液(全成分缓冲液或缺少某些成分的试液)中只要有还原剂和甘油就会出现非样品条带,但条带强弱与还原剂浓度、甘油含量无明显剂量关系。用8mol/L尿素处理上样梳可使非样品条带明显减弱甚至消失。结论:非样品条带源于上样梳蛋白质污染,用尿素等离液剂或强力去污剂处理上样梳可有效减少或消除非样品条带,以消除非样品条带对检验结果的影响。

黑素转铁蛋白在家兔网织红细胞膜上的表达及其在铁摄取中的作用

目的 :研究黑素转铁蛋白 (p97)在家兔网织红细胞膜上的表达及其在非转铁蛋白结合铁摄取中的作用。方法 :聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS =PAGE)和放射性同位素法 (59Fe)。结果 :①网织红细胞孵育液浓缩后 ,经SDS PAGE测定 ,在分子量 97kD位置上可见一条明显的蛋白带 ;用磷脂酚肌醇磷脂酶C(PI PLC) 30 0mu/ml预处理网织红细胞后 ,孵育液浓缩再经SDS PAGE测定 ,在分子量 97kD处仍有一条明显的蛋白带 ,且其平均OD值高于未经处理的网织红细胞 ;而成熟的红细胞在此处却没有明显的蛋白带。②单纯用PI PLC作用于网织红细胞 ,其铁摄取无明显变化 (P >0 .0 5 )。③去除内源性转铁蛋白后 ,再用PI PLC作用网织红细胞 ,则胞浆内铁及整合到血红素中的铁均较未经处理的网织红细胞明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :p97可能存在于家兔网织红细胞膜上 。

抗EGFR单克隆抗体药物纯度分析

应用体积排阻色谱法、非还原SDS-PAGE法、离子交换色谱法分析抗EGFR单克隆抗体纯度.结果表明:三种分析方法分析抗EGFR单克隆抗体纯度表现出明显差异,体积排阻色谱法检测出多聚体含量、非还原SDS-PAGE法检测出降解片段的含量、离子交换色谱法检测出多个电荷异构体.基于单克隆抗体结构的多样性,有必要开发多种分析方法监控单克隆抗体的纯度.

上海四膜虫酚溶性染色质非组蛋白的研究

收集对数生长期的上海四膜虫，分离细胞核，制备染色质并以酚抽提制得酚溶性染色质非组蛋白，经SDS—PAGE测得四膜虫酚溶性染色质非组蛋白有六条明显的蛋白带，其表观分子量为88KD，79KD，70KD，52KD，38KD，24KD，与鼠肝酚溶性染色质非组蛋白具有明显的5条的分子量有显著的差异。

多篇章非Manhattan版面层次布局模型和阅读顺序确定

针对报纸中多篇章非Manhattan版面引入PMRegion对象 ,并建立了满足约束的层次布局模型和层次空间关系 ,给出了版面逐层快速分解和阅读顺序无二义性确定算法 该算法已成功应用于专业排版系统 ,取得了满意的效果 。

基于写页面热度的混合内存页面管理策略

针对阻变存储器(RRAM)写延迟大的问题,提出一种基于写页面热度的混合内存页面管理策略,将写页面进行冷热区分,存于动态随机访问存储器(DRAM)上,减少RRAM上的写数量.在基准程序集PARSEC下对混合内存系统的性能进行测试与分析.结果表明,所提出的页面管理策略可以有效地提高系统性能.

ADO.NET在非DBMS数据源转换中的应用

文中分析了ADO.NET技术及其特点,指出ADO.NET技术相对于ADO技术的优势;提出了利用ADO.NET技术在Web上实现非DBMS数据源向DBMS数据源转换的应用方案,并给出一个实例证明该方案可行。该应用方案的特点是属于B/S模式,与用户平台无关,且数据可远程存储,克服了以往类似软件只能在DBMS数据源之间转换或只能在本地实现转换的缺陷,方便了异类数据的异地管理和信息的有效利用。

个性化搜索引擎中网页特征描述的研究

为了对用户访问过并感兴趣的网页进行准确描述,分析了对网页特征描述中涉及到的特征抽取范围以及特征词权重计算方法。根据"主题相关词非线性加权的方法"提出了一种改进特征词权重计算的方法,该方法不仅考虑了出现在标题中的特征词的重要性,而且利用非线性函数对特征词出现频率的处理思想,使得权重的计算更加准确。使用改进的特征权重计算方法提高了网页特征描述的准确性,从而提高了用户个性化搜索的效率。