鹿茸多肽的生物学活性研究

采用醇沉法从新鲜马鹿茸中提取出活性多肽。该多肽为一系列分子量低于17kD的多肽混合物，Western blotting检测到其含有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）。Bradford法定量总多肽约为1～2mg／g鲜重，RIA法定量IGF-1为300～400pg／g鲜重。小鼠腹腔连续注射多肽6d后，对其促生长、免疫调节、抗氧化、抗疲劳等生物学活性进行了研究。结果表明：小鼠体重较对照组有增加趋势（P〉0．05）；腹腔注射1，4，8mg／kg鹿茸多肽组小鼠玫瑰花环成环率分别高于对照组（生理盐水）33．3％，34．2％，39．6％，差异显著（P〈0．05）。注射8mg／kg鹿茸多肽的小鼠血清溶血素OD值与对照组差异极显著（P〈0．01）。实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率分别比对照组高22．1％，25．8％，26．5％，差异显著或极显著（P〈0．05或P〈0．01），说明鹿茸多肽具有免疫调节作用，且呈剂量依赖性。注射4，8mg／kg鹿茸多肽组老年小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性分别升高51．1％，59．2％，血清丙二醛（MDA）含量分别下降14．9％，16．7％，与对照组差异显著（P〈0．05），说明鹿茸多肽对老年小鼠有较强的抗氧化作用。小鼠负重游泳实验中，注射小鼠存活时间比对照组延长了21．67min（P〈0．05），说明鹿茸多肽具有抗疲劳作用。

牙龈卟啉菌表面蛋白的生物活性和免疫原性研究

为了更好地研究牙龈卟啉菌(Prophyromonasgingivalis,Pg)表面蛋白(Surface associatedproteins,SAP)的生物活性,实验用SAP体外刺激小鼠颅骨和人外周血单个核细胞,分别用自动生化分析仪和放免方法检测培养液中Ca2+和IL-6的含量.同时,采用ELISA和MTT法分别测定SAP免疫小鼠的抗体效价和诱导的脾细胞转化程度.结果显示:一方面SAP是体外诱导骨吸收和前炎性因子合成的介质;另一方面SAP免疫的小鼠产生了抗SAP特异性抗体和脾细胞特异增生反应.这说明具有生物活性的SAP诱导了实验小鼠产生体液免疫应答和细胞免疫应答.

猪脾转移因子的制备和生物学活性研究

目的:采用冻融-透析法制备猪脾转移因子,并对其理化性质以及免疫学生物学活性、生物安全性进行初步检定。方法:采用低温匀浆反复冻融新鲜的猪脾脏、无菌离心匀浆脾脏组织液,取上清液透析制备转移因子;以改良Lowry法分别检测多肽含量,并进行理化指标、无菌试验、热原质试验及其生物学活性检测。结果:冻融-透析法制备猪脾转移因子的理化性状符合《中国生物制品》的要求;无菌试验、热原质试验均为阴性;安全试验合格;淋巴细胞转化试验和E花环形成试验证实其具有刺激淋巴细胞增殖生物学活性。结论:成功制备了猪脾脏转移因子,其各项理化指标符合生物制品规程的要求,同时具有较好的非特异性免疫学的生物学活性。

环肽pLR的生物学活性研究进展

环肽pLR(LVRGCWTKSYPPKPCFVR)是以2个半胱氨酸的二硫键成环,不仅具有类胰蛋白酶抑制剂的典型分子结构特点,且具有促肥大细胞释放组胺,抑制类胰蛋白酶活性和粒细胞—巨噬细胞集落形成,对电负性POPG膜有透化作用,但无溶血作用,并对过敏性哮喘小鼠模型的表现型症状和肺脏组织损伤具有治疗作用。作者针对环肽pLR的结构与功能、生物学活性及在哮喘动物模型中的免疫调节作用进行了综述,以期为环肽类药物的开发和应用提供参考。

新生牛肝提取物生物学活性分析

复肝肽(FGP)系采用膜法提取技术,从新生牛肝脏中提取制备出的生物活性物质。测定其多肽的含量为950.03mg/100ml。本实验对其促生长、免疫增强作用、对化学性肝损伤辅助保护作用等生物学活性进行了研究。结果表明:小鼠体重较对照组有增加趋势(P>0.05);腹腔注射2.5、5.0、10.0ml/(kg.bw)复肝肽组小鼠玫瑰花环成环率分别高于对照组(生理盐水)33.3%,34.2%,39.6%,差异显著(P<0.05)。注射10.0ml/(kg.bw)复肝肽的小鼠血清溶血素OD值与对照组差异显著(P<0.01)。剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率分别比对照组高22.1%,25.8%,26.5%,差异均有显著性(P<0.05或P<0.01),说明复肝肽具有免疫增强作用,且呈剂量依赖性。复肝肽5.0ml/(kg.bw)剂量组可有效降低四氯化碳模型小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),差异具有显著性(方差分析,P<0.01),病理组织学指标亦有明显改善。说明新生牛肝提取物对化学性肝损伤的辅助保护作用。

^(125)碘-绒毛膜促性腺激素的电泳纯化及分析

标记抗原在贮存过程中,由于受幅射分解和脱碘影响而使免疫活性和生物活性降低。我们对自制的^(125)碘-绒毛膜促性腺激素进行了实验观察。结果显示:贮存1月后,其免疫活性和生物活性分别降低了33.1％和44.0％;经电泳纯化后的标记物的免疫活性和生物活性明显提高,分别达到了最初的90.5％和95.3％。

钙网蛋白片段cDNA克隆、蛋白表达及免疫学活性研究

目的:研究钙网蛋白(CRT)发挥免疫生物学活性的主要功能区域。方法:采用PCR法从CRT基因cDNA全长中扩增第150-230位编码氨基酸所对应的核苷酸序列片段,利用分子生物学方法构建原核重组表达质粒,采用大肠杆菌表达系统进行原核表达;通过亲和纯化得到目的蛋白,分析目的蛋白特性;并通过体内、体外实验对蛋白的免疫学活性进行分析。结果:成功构建了表达CRT150-230片段(rCRT/150-230)的原核表达质粒,并从细菌裂解液上清中纯化得到目的蛋白,蛋白单体通过分子间二硫键形成二聚体,天然状态下形成多聚体;体外研究表明rCRT/150-230促进小鼠脾细胞的分裂,活化巨噬细胞产生一氧化氮(NO),诱导人外周血单个核细胞产生TNF-α;体内研究表明,rCRT/150-230刺激小鼠产生高滴度抗体,该特异性抗体能识别rCRT/150-230与rCRT。结论:rCRT/150-230蛋白具有与rCRT相似的免疫活性,因此推测该蛋白片段是全长CRT发挥免疫学活性的区域。

新型冠状病毒中和抗体生物学活性的测定

目的开发针对新型冠状病毒中和抗体生物学活性及免疫学特性分析的方法。方法使用生物膜层干涉法(biolayer interferometry,BLI)分析9MW3311中和抗体Fab和S1-RBD的亲和力常数;分别使用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和流式细胞分选法评价中和抗体结合片段(antibody binding fragment,Fab端)和S蛋白的相对结合活性和对ACE2的阻断结合活性;使用假病毒体系评价中和抗体的体外细胞学活性;使用表面等离子共振法(surface plasmon resonance,SPR)测定抗体Fc段与Fcγ和FcRn受体的亲和力常数;使用ELISA法测定抗体Fc段和C1q受体的结合活性;采用PBMC法确定中和抗体的体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)、补体(First subcomponent of the C1 complex)介导的细胞毒性作用(complement dependent cytotoxicity,CDC);使用假病毒系统评价中和抗体的依赖性感染增强作用(antibody-dependent enhancement,ADE)效应。结果3批9MW3311中和抗体和参比品与S1-RBD的亲和力常数KD(mol·L^(-1))值分别为1.15×10^(-9),1.01×10^(-9),1.15×10^(-9)和9.45×10^(-10);ELISA和FACS分别测得3批中和抗体相对参比品的结合活性为101%、96%、100%及98%、113%、108%;ELISA和FACS分别测得3批中和抗体相对参比品对ACE2的阻断活性为100%、95%、91%及94%、101%、94%;3批中和抗体相对参比品对假病毒的中和活性分别91%、93%、108%;3批9MW3311中和抗体和参比品分别与FcγR和FcRn均有同等水平的亲和力;9MW3311无ADCC和CDC活性;LALA突变的中和抗体可有效避免ADE效应。结论初步建立了新型冠状病毒中和抗体生物学活性及免疫学特性分析的方法,可用于该类型制品的常规质量控制和放行。