去甲斑蝥素对乳腺癌细胞系MCF-7^(adr)生长与凋亡的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7adr生长及凋亡的影响,为其临床应用提供实验依据。方法:采用MTT法测定NCTD抑制效应;利用光镜及荧光显微镜观察处理后的细胞形态变化;利用流式细胞术检测细胞凋亡;利用细胞免疫化学检测增殖、凋亡相关因子bcl-2、p53的表达。结果:NCTD对乳腺癌细胞MCF-7adr的生长有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。NCTD处理48h后,MCF-7adr细胞内ki-67阳性指数由(96.8±1.3)%下降至(18.8±1.9)%;PCNA蛋白阳性指数由(95.4±1.1)%降至(59.2±1.9)%。NCTD处理48h后,在光镜下可见MCF-7adr细胞出现发泡、皱缩,有些细胞出现碎裂,经Hoechst染色证实NCTD处理后出现典型的凋亡表现。流式细胞术显示NCTD处理48h后,出现亚二倍体峰,随剂量的增加(120、240、360、480μmol/L),凋亡率分别增加11.67%、16.51%、18.29%、20.79%。NCTD处理48h后,MCF-7adr细胞突变型p53蛋白表达率为(97.8±1.64)%,经NCTD240μmol/L处理后表达率下降为(47.2±9.8)%;Bcl-2蛋白表达率由(98.87±3.74)%下降为(17.5±1.64)%。结论:NCTD能抑制MCF-7adr细胞生长、增殖,降低ki-67阳性指数率,促进MCF-7adr细胞凋亡与凋亡相关因子bcl-2及突变型p53蛋白的表达。

多元回归综合优化去甲基斑蝥素壳聚糖纳米粒的制备工艺

目的以去甲基斑蝥素为模型药物,运用正交设计及多元回归分析多指标综合优化其低相对分子质量壳聚糖纳米粒制备工艺。方法采用离子诱导法制备去甲基斑蝥素低相对分子质量壳聚糖纳米粒,以粒径、包封率为评价指标,以低相对分子质量壳聚糖(LCS)、三聚磷酸钠(TPP)浓度和温度为3个因素,选用L9(34)正交实验设计结合多元回归筛选纳米粒的制备工艺,并根据多指标权重对其线性加权和进行优化,推断优化方案。同时,应用数学模型,绘出各指标随因素变化的趋势图,预测优化结果。结果根据优化条件验证制备工艺,所得纳米粒粒径为(131±6)nm,包封率45.12%,载药量7.3%。优化处方工艺具有粒径小、包封率高特性。结论该数据处理方法用于制备工艺优化结果精确、高效,预测结果准确,具有推广应用价值。

甘草次酸衍生物修饰去甲斑蝥素脂质体在小鼠体内肝靶向性研究

目的研究甘草次酸衍生物(甘草次酸硬脂醇酯-3-O-半乳糖苷,Gal-GAOSt)修饰去甲斑蝥素脂质体(Gal-GAOStNC-LP)在小鼠体内的分布及肝靶向性。方法利用薄膜分散法制备甘草次酸衍生物修饰去甲斑蝥素脂质体后,经小鼠尾静脉给药,采用HPLC法检测去甲斑蝥素在小鼠肝肾中的浓度随时间的变化,与去甲斑蝥素水溶液组进行比较,并以靶向指数TI=(AUC)NC-SOL/(AUC)Gal-GAOStNC-LP来判断Gal-GAOStNC-LP对主要器官的靶向性。结果Gal-GAOStNC-LP组在肝脏中组织浓度明显高于NC-SOL组,肝的靶向指数大于1,而肾的靶向指数小于1。结论甘草次酸衍生物修饰去甲斑蝥素脂质体具有肝靶向性,能提高药物疗效,降低毒副作用。

去甲斑蝥素固体脂质纳米粒的制备及其理化性质研究

目的:制备去甲斑蝥素固体脂质纳米粒并考察其理化性质。方法:以包封率为考察指标,筛选最佳制备方法,并优化处方和工艺。通过观察其显微结构、粒径分布,研究其表面电动电位、pH值、载药量等理化性质。结果:去甲斑蝥素固体脂质纳米粒的包封率为54.6%,平均粒径为190 nm,在4℃下放置3个月,包封率和粒径、表面电位几乎无变化。结论:本研究制得的去甲斑蝥素固体脂质纳米粒的包封率较高,稳定性良好。

载去甲斑蝥素介孔二氧化硅纳米粒的制备及体外释药研究

目的:优选载去甲斑蝥素的介孔二氧化硅纳米粒的制备工艺并考察其体外释放特性。方法:采用改良的经典Stober法制备介孔二氧化硅纳米粒(MSN),运用氮气脱吸附法进行表征;采用饱和溶液反复吸附法制备载去甲斑蝥素的介孔二氧化硅纳米粒;对制备好的载去甲斑蝥素的介孔二氧化硅进行表征及体外释药特性考察。结果:制备的介孔二氧化硅纳米粒分布较均匀、粒径约为140 nm(PDI<0.3),Zeta电位约35 mV,表面积为1165.5 m^2/g,孔容积(Vt)为2.16 cm^3/g,孔径2.86 nm。制备的载去甲斑蝥素的介孔二氧化硅的载药量12.88%,释放度考察载药的去甲斑蝥素的介孔二氧化硅纳米粒在12h内累计释放量达到83.34%,其后释放曲线显示出纳米粒的缓释特性。结论:改良的经典Stober法制备的载去甲斑蝥素介孔二氧化硅纳米粒粒径均匀,载药量高,具有显著体外缓释特性。

去甲斑蝥素通过NF—κB／IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的研究去甲斑蝥素（NCTD）联合阿霉素（ADR）对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以U266细胞为研究对象，采用NCTD（10μmol／L）和ADR（0．25μmol／L）单独或联合处理细胞，MTT法观察细胞增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测核因子-κBP65（NF—κBP65）、磷酸化NF—κBP65（p-NF—κBP65）、NF—κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα（p-IκBα）、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平，免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平。结果①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用，二者具有协同作用；②与ADR单药组比较，联合用药组胞核NF—κBP65和胞质P—IκBα的表达量分别由2．08±0．29和0．39±0．07降至0．48±0．08和0．02±0．01，胞质NF—κBP65和IκBα表达无变化；③联合用药组与ADR单药比较，survivin和Bcl-2的表达水平分别由0．31±0．05和0．23±0．05降至0．03±0．02和0．05±0．02，而Bax的表达由0．46±0．06升至0．62±0．08；④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为（44．6±4．4）％和（27．0±2．1）％，NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用。结论NCTD通过抑制NF—κB／IκBα途径，调节下游信号分子survivin、Bel-2、Bax和VEGF的表达，增强ADR的抗骨髓瘤效应。

去甲斑蝥素温敏型原位凝胶的制备及其体外释放特性

目的制备去甲斑蝥素温敏型原位凝胶并探讨其药剂学性质。方法以胶凝温度和体外溶蚀时间为指标,采用均匀设计确定最佳工艺,利用平衡透析法对去甲斑蝥素温敏型原位凝胶进行体外释放的评价。结果通过均匀设计实验,确定最优处方为泊洛沙姆407比例28%,泊洛沙姆188比例1.6%,羟丙甲基纤维素比例0.1%。制得的去甲斑蝥素温敏型原位凝胶的胶凝温度为34℃,体外溶蚀时间为210 min。去甲斑蝥素温敏型原位凝胶体外释药曲线为ln ln[100/(100-Q)]=0.694 0 ln t-0.761 7,r=0.997 1,符合Weibull方程。结论去甲斑蝥素温敏型原位凝胶,其性质稳定,具有显著的体外缓释特性。

免疫毒素2E8去甲斑蝥素的研制及其体外靶向抑制效应研究

目的采用本院自行研制的ZCH-4—2E8细胞分泌的抗人CD19单克隆抗体与去甲斑蝥素（NCTD）进行连接制备免疫毒素，研究其在体外的靶向杀伤作用。方法通过凝胶过滤层析法纯化2E8单抗，SDS-PAGE电泳鉴定抗体的纯度；活泼酯法制备免疫毒素2E8-NCTD；流式细胞仪测定免疫毒素的抗体活性及Nalm-6细胞和K562细胞上CD19抗原表达情况；台盼蓝计数法比较2E8抗体、NCTD、2E8-NCTD免疫毒素对Nalm-6细胞和K562细胞的杀伤作用。结果纯化后的2E8单抗经SDS-PAGE鉴定纯度达99．00％以上；2E8培养上清在Nalm-6细胞上的阳性率为99．34％，而在K562细胞上则为0．98％，2E8-NCTD免疫毒素与Nalm-6细胞的阳性反应率为99．90％；培养96h时，与对照组相比，2E8-NCTD（10μs／ml）对CD19^＋的Nalm-6细胞的生长影响有统计学意义（96h抑制率71．25％，P〈0．001），而纯化的2E8抗体（10μg/ml）对Nalm-6细胞生长则无明显抑制作用（96h抑制率为30．29％，P〉0．05）；10μg/ml 2E8抗体、10μg/ml 2E8-NCTD对CD19^-的K562细胞（96h抑制率分别为4．17％和15．41％）则无明显抑制作用（P〉0．05）。结论成功制备2E8-NCTD免疫毒素，该免疫毒素在体外具有明显的靶向杀伤白血病细胞Nalm-6的作用。

去甲斑蝥素对人类胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡作用的实验研究

目的研究去甲斑蝥素（NCTD）对人类胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用，初步探讨其作用机制。方法将NCTD作用于经体外培养的QBC939细胞系，分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法），流式细胞术及免疫组织化学SP法进行检测。结果0．125、0．75、2．5、10、120μg／ml NCTD作用48h，对QBC939细胞系均有抑制作用（P〈0．05），且具有浓度依赖性，绘制浓度效应曲线，得出半数抑制浓度（IC50）为（3．66±1．14）μg／ml；在分别作用12、24、36、48、72h后，生存率有随时间增加而下降的趋势（P〈0．05）。流式细胞术结果表明，随着NCTD浓度的增加，凋亡率逐渐增高，各浓度组分别为（8．6±0．4）％、（17．6±0．3）％、（22．9±0．4）％、（25．5±0．9）％、（31．1±1．5）％（P〈0．001）；质量浓度为2．5μg／ml的NCTD作用QBC939细胞48h后，出现G2／M期阻滞现象，NCTD与对照组分别为（14．1±1．0）％和（5．7±0．3）％（P〈0．05）。不同浓度的NCTD作用于QBC939细胞后，与对照组相比Caspase-3蛋白表达均增加。结论NCTD具有抑制人类胆管癌细胞系QBC939增殖的作用，这种作用可能与诱导细胞凋亡，干扰细胞生长周期有关。