从关节炎病鸡分离出一株禽呼肠孤病毒

从患关节炎病鸡肠道组织内分离到一株禽呼肠孤病毒(ARV),定名为 NAU-8902.该病毒能在鸡胚卵黄囊内繁殖并致死鸡胚.鸡胚毒适应鸡胚肝细胞(CELi)和鸡胚成纤维细胞(CEF)后,产生以合胞体为特征的细胞病变,分离毒 CEF-2代的 TCID_(50)为10^(-7.39)/0.1ml.电镜观察,病毒具有双层衣壳,20面体对称,直径50～65nm,无囊膜.血清学试验证明,病鸡体内含有禽呼肠孤病毒抗体,聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,病毒基因组由10个节段组成,带形与参考株(ARV FDO 株)相似,呈3-3-1-3分布.将适应细胞后的分离毒回归1日龄 SPF 雏鸡,复制出病毒性关节炎.结果表明,先将病料接种于鸡胚卵黄囊,然后适应 CELi,最后在 CEF 细胞上传代,是一种适宜的分离 ARV 的方法.

一株分离自外观正常鸡胚的禽呼肠孤病毒的鉴定

从外观正常的鸡胚体内分离到一株病毒,其在鸡胚原代成纤维细胞上繁殖产生稳定的以合胞体为特征的CPE;病毒呈二十面体对称,无囊膜,有双层衣壳,直径为50～60nm;SDS-PAGE显示病毒基因组分为10个片段,呈3—3—1—3分布,与禽呼肠孤病毒(ARVS)FDO株基本相同。以上资料说明,鸡胚所带病毒为一株ARVS,其在CEF-2代上的TCID_(50)为10^(-6.16)/0.1ml。

禽呼肠孤病毒σA基因对鸡胚成纤维细胞天然免疫相关基因转录水平的调控影响

为了明确禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σA基因对宿主天然免疫应答的影响,本研究利用实时荧光定量PCR方法检测pCAGEN-σA转染鸡胚成纤维细胞(DF1)后,不同时间点(转染后第3、6、12、24和36小时)DF1细胞中天然免疫相关基因,包括Toll样受体(TLRs)、MDA5、MAVS、My D88、TRIF、IRF-3、IRF7、NF-κB、IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-8、IFITM3、Mx1和OASL等基因的转录水平变化。结果,与空载体转染细胞相比,pCAGEN-σA转染细胞中上述这些天然免疫基因的m RNA水平出现不同程度变化(P<0.05或P<0.01)。TLR3应对最快速,其m RNA水平在转染后第3小时和第6小时迅速上升,但9 h后逐渐下降;MDA5和TLR7的m RNA水平,则分别在转染后第6小时和第12小时开始显著升高,并分别在转染后第12小时和第36小时达到峰值(P<0.05或P<0.01);TLR15的m RNA水平整体变化不明显。My D88和MAVS的m RNA水平呈表达上调趋势;TRIF在转染后第6小时表达量迅速达到峰值(2.83倍),随后急速下降。NF-κB呈表达上调趋势;而IRF3/7的表达则被抑制。I型干扰素(IFN-α和IFN-β)呈现相似的表达模式,在转染后第6小时和第24小时表达量增加,其他时间点均为表达量下降; IL-6和IL-8则表达上调,分别在转染后第9小时和第6小时达到峰值(P<0.01)。IFITM3、Mx1、OASL的m RNA水平也显著升高,均在转染后第12小时达到峰值(P<0.01)。上述试验结果表明,在DF-1细胞中过表达σA基因,能显著引起天然免疫相关基因的表达的变化,为进一步阐释ARV的分子致病机制和免疫应答机理奠定了基础。