广州地区婴幼儿感染Noro病毒基因型的初步研究

目的 探讨广州地区婴幼儿腹泻中感染Noro病毒的基因型。方法 用Clustal W比对GⅡ组Noro病毒后，设计处于ORF1与ORF2连接点两旁两对简并引物，进行巢式RT—PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，对ORF1与ORF2连接点两旁序列和衣壳蛋白N／S区用Clustal W进行同源性分析，用phylip 3．65软件、邻接法构建进化树。结果 标本NVgz100、NVgz10成功扩增出ORF1与ORF2连接点两旁1208bp片段（相对于Hawaii virus，U07611位置为4476—5683），包含ORF1的3’端RdRp的大部分基因和ORF2基因的5’端的S区。对标本NVgz100、NVgz10与另一实验NVgz01（DQ369797）的1208bp进行同源性分析发现，3份标本与GⅠ组同源性为58％～61％，与GⅡ组同源性为74％～92％；将这3份标本与GⅠ、GⅡ组构建进化树，可发现NVgz100、NVgz10和NVgz01与GⅡ组Bristol等病毒密切相关，将NVgz100、NVgz10和NVgz01的衣壳蛋白N／S区与GⅡ组各基酬型进行同源性比较，发现3份标本与GⅡ4基因型Camberwell、Bristolt Grimsby同源性较高（92％～96％），与其他基因型同源性为70％～73％，以N／S区构建进化树可发现3份标本与Camberwell、Bristol、Grimsby、Lordsdale处于同一簇中。结论 本实验结果表明Noro病毒株以GⅡ组为主，病毒流行的基因型为与Camberwell、Bristol、Grimsby和Lordsdale等密切相关的GⅡ-4基因型。

北京市某医院院内感染Noro病毒胃肠炎的调查

目的了解Noro病毒感染引起医院内暴发集体腹泻的临床特点。方法分析一起18例医院内暴发腹泻患者的流行病学和临床资料，同时对每例患者粪便标本进行细菌培养，随机选择7例粪便标本用抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行轮状病毒RNA检测；用逆转录-聚合酶链反应检测Noro病毒核酸以确定感染的病原，分析感染患者的临床特点和易感因素。结果发病者多为老年合并多种基础疾病；腹泻主要为稀水便（12／18，66．67％），个别为黏液稀便（3／18，16．67％）；大部分粪便常规检测正常（10／18，55．56％），个别见少量白细胞（3／18，16．67％）和潜血弱阳性（4／18，22．22％）；全部粪便标本细菌学培养阴性；轮状病毒RNA检测阴性；3份标本中检出Noro病毒核酸，阳性率为42．86％（3／7）。结论Noro病毒是此次医院内集体暴发腹泻的重要病原之一，尤其多见于有基础疾病、体弱的老年患者。

北京地区Noro病毒主要衣壳蛋白编码基因的序列分析

目的 确定从北京地区婴幼儿腹泻标本中检测到的3株Noro病毒的基因型别及主要衣壳蛋白（VP1）编码基因的特点。方法 从经酶免疫分析法筛选到的Noro病毒阳性的粪便标本中应用RT-PCR方法扩增Noro病毒VP1全基因，克隆到pBS-T载体中并测定核苷酸序列，与GenBank中的其他Noro病毒VP1基因序列进行比较和分析。结果 经过扩增和测序，标本CR2905、CR2932和CR2987的VP1基因全长分别为1620bp、1623bp和1647bp，编码不同大小的蛋白。CR2905和CR2932与GⅡ-4型的氨基酸同源性在80％以上，属于Noro病毒GⅡ基因组（Genogroup）的GⅡ-4型（Geno．type）；CR2987与GⅡ-3型的氨基酸同源性在80％以上，属于Noro病毒GⅡ基因组的GⅡ-3型。CR2905、CR2932与其他GⅡ-4型的变异性在9．1％至12．5％之间，提示为新的变异株。结论 北京地区婴幼儿中存在不同基因型别的Noro病毒的感染，根据基因的同源性分析，CR2905、CR2932可能为GⅡ-4型的新的变异株。

北京地区不同基因型Noro病毒的主要衣壳蛋白在大肠杆菌中的表达

目的对北京地区的不同基因型Noro病毒的主要衣壳蛋白（VP1）进行表达，得到Noro病毒抗原，为对Noro病毒做进一步的深入研究打下基础。方法用PCR分别从先前研究得到的含北京Noro病毒主要衣壳蛋白VP1编码基因的重组质粒pBST-CR2987（GⅡ-3）及pBST-CR2932（GⅡ4）中扩增得到VP1全基因，然后将目的基因亚克隆到表达载体pET-30a（＋）中，得到重组质粒，转化BL21（DE3）感受态细胞，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的表达和抗原性，并对表达产物进行了纯化。结果（1）双酶切和测序证明得到了VP1的重组表达载体。CR2987 VP1基因全长1647 bp，含编码549个氨基酸的单一的开放读码框架（ORF）；CR2932 VP1基因全长1623 bp，含编码541个氨基酸的单一的ORF。（2）重组表达的VP1主要以包涵体的形式存在，在诱导后4—6h表达量最高。（3）重组表达的VP1能够被豚鼠抗Noro病毒VP1的特异性免疫血清及鼠抗His标签的抗体所识别。（4）纯化后的蛋白能够为人血清所识别。结论GⅡ-3型及GⅡ-4型Noro病毒北京地方株的VP1在原核体系中获得表达，表达的VP1可以被特异性免疫血清及人血清所识别，说明其具有抗原活性。