基于RT-RAPID和CRISPR-Cas12a的诺如病毒GⅡ.6亚型核酸检测方法的建立

为建立一种特异性强、灵敏度高且简单方便的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法,下载诺如病毒GⅡ.6基因组序列,用Mega7.0对基因组进行比对分析获得高度保守序列;基于保守序列设计诺如病毒GⅡ.6的反转录重组酶和聚合酶等温检测(RT-RAPID)技术扩增引物、荧光探针、crRNA和报告分子;优化RT-RAPID的反应引物、反应温度和反应时间及Cas12a检测用的crRNA,并分析RT-RAPID-Cas12a方法的特异性和灵敏度。基于RT-RAPID荧光法和RT-RAPID-Cas12a荧光法的诺如病毒GⅡ.6亚型核酸快速检测方法能在1 h内完成检测并得出结果,灵敏度分别为10 copies/μL和0.5 copies/μL,且两个方法均与诺如病毒GⅡ.17型、鼻病毒、偏肺病毒和博卡病毒无交叉反应。2个检测方法与RT-qPCR阳性样本一致率均为90%,阴性样本一致率均为100%。论文建立的基于RT-RAPID和Cas12a的诺如病毒GⅡ.6核酸快速检测方法均可高效快速地检测出诺如病毒GⅡ.6,具有灵敏度高、特异性强、操作便捷且快速等特点。

高血压急症患者AngⅡ与IL-6、IgG和补体C_3的相关性研究

目的测定高血压急症患者神经内分泌因子(血管紧张素Ⅱ,AngⅡ)及免疫指标(IL-6、Ig G、C3),探讨其在高血压急症患者中的变化和相互关系。方法选取高血压急症患者46例作为观察组,健康体检者30例为对照组A,心内科住院原发性高血压患者31例作为对照组B,检测AngⅡ、IL-6、Ig G和补体C3。结果 1AngⅡ水平:观察组与对照组A比较有显著升高(P<0.01),观察者与对照组B及对照组间比较均有统计学差异(P<0.05);IL-6水平:观察组与对照组比较,对照组间比较差异有统计学意义(P<0.01);Ig G水平:观察组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),对照组间比较有统计学差异(P<0.05);C3水平:观察组与对照组A比较有统计学差异(P<0.05),与对照组B比较无明显差异(P>0.05)。2观察组收缩压与AngⅡ、IL-6、Ig G、C3呈正相关(0<r<1,P<0.05);舒张压与C3呈正相关(0<r<1,P<0.05),与AngⅡ、IL-6、Ig G无相关关系(P>0.05)。3高血压急症患者AngⅡ与IL-6、Ig G、C3均呈正相关(P<0.05)。结论高血压急症患者神经内分泌系统及免疫系统激活,收缩压、舒张压与神经内分泌系统和免疫系统间均存在相关性。

贵金属高灵敏显色反应的研究(Ⅶ)——钯(Ⅱ)-碘化钾(抗坏血酸)-罗丹明6G-聚乙烯醇体系

钯在酸性溶液中与过量的I-生成配位阴离子[PdI_(n)]^((-n-2)-),再与R6G的阳离子产生离子缔合反应,生成电中性的蓝色缔合物沉淀,加入PVA后沉淀溶解,可以进行水相直接测定,本文拟定的分光光度法灵敏度高、稳定性较好,克服了萃取光度分析法的缺点,应用于阳极泥中钯的测定,得到较满意的结果。

罗丹明6G合锌(Ⅱ)配合物的合成及晶体结构

合成了罗丹明 6G合锌 (Ⅱ )配合物 ,晶体结构分析结果表明配合物组成为 [C2 9H31N2 O2 ) 2 ZnCl4·H2 O] .晶体属三斜晶系 ,空间群P -1 (# 2 ) ,晶胞参数为a =1 .1 687(2 )nm ,b =1 .2 50 1 (5)nm ,c =2 .0 694 (5)nm ;α =99.1 3 (2 )°,β=1 0 0 .1 7(4 )°,γ =96.4 6(4 )°;Z =2 ,ρcal=1 .3 0 g/cm3.研究了配合物的摩尔电导、IR和荧光光谱、差热 -热重分析 .

硝酸钠-硫氰酸铵-罗丹明6G液-固体系浮选分离铅(Ⅱ)的研究

研究了硝酸钠-硫氰酸铵-罗丹明6G液-固体系浮选分离铅（Ⅱ）的行为及其与常见离子分离的条件。结果表明，在1．0gNaNO3存在下，当0．1mol／L硫氰酸铵溶液和1．0×10^-3mol／L罗丹明6G（Rh6G）溶液的用量分别为0．5mL和1．0mL时，体系中形成的不溶于水的NH4SCN—Rh6G-Pb三元缔合物可浮于盐水相上形成界面清晰的液-固两相，从而使Pb^2＋被定量浮选，而Zn^2＋，Mn^2＋，Co^2＋，Ni^2＋，Al^3＋，Fe^2＋等离子在该体系中不被浮选，实现了Pb^2＋与这些离子的定量分离。对合成水样进行了定量浮选分离测定，浮选率为93．6％～108．7％。

^bⅡ6和弦在肖邦《g小调叙事曲》中的“控制力”

《g小调叙事曲》是肖邦创作的第一首钢琴叙事曲,在这首叙事曲中,为了满足叙事的需要,肖邦运用了许多独特的手法:如运用多种曲式原则共建的混合曲式来构建作品;沿用主题—动机贯穿发展法来组织音乐材料;运用换音来对旋律进行华彩装饰等。通过这些创新性手法的运用,使得内容与形式获得统一,达到良好的音乐叙事目的。然而通过分析我们发现:整部作品在乐思呈示与发展、调性布局与曲式结构等方面,bⅡ6和弦发挥着极其重要的结构作用。其作品的主题、调性、曲式结构都置于bⅡ6和弦的控制之下,音乐形象凝练集中、鲜明生动,形式与内容有机结合,音乐和诗歌完美统一。

高血压急症患者AngⅡ与IL-6、IgG和补体C_3的关系分析

目的:测定高血压急症患者血管紧张素Ⅱ、AngⅡ(神经内分泌因子)以及IL-6、Ig G、C3(免疫指标),探讨其变化与相互关系。方法:选高血压急症患者50例作为观察组,健康体检者50例作为对照组A,心内科住院原发性高血压患者50例为对照组B,检测Ig G、IL-6、AngⅡ及补体C3。结果:AngⅡ水平:观察组与对照组A比较,显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),与对照组B比较及对照组之间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者的IL-6、Ig G、C3水平与对照组A、B比较差异均有统计学意义(P<0.05),且对照组A与对照组B之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组收缩压与AngⅡ、IL-6、Ig G、C3呈正相关(0<r<1,P<0.05),舒张压与C3呈正相关(0<r<1,P<0.05),与Ig G、IL-6、AngⅡ无相关关系(P>0.05);高血压急症患者AngⅡ与IL-6、Ig G、C3均呈正相关(P<0.05)。结论:高血压急症患者神经内分泌系统与免疫系统激活,收缩压、舒张压与神经内分泌系统及免疫系统间均存在相关性。

G6PD对大肠癌细胞生长侵袭的影响及其与HK Ⅱ的相关性

目的探讨G6PD对大肠癌HCT116和SW480细胞生长侵袭的影响,以及G6PD与HKⅡ在大肠癌及其癌旁上皮组织中的表达和两者的相关性。方法将体外培养的大肠癌HCT116和SW480细胞进行G6PD过表达和干扰处理。Western blot法检测细胞中G6PD和HKⅡ的蛋白表达水平;流式细胞术分析细胞周期进程;葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖的含量;划痕实验检测细胞侵袭能力;免疫组织化学法检测大肠癌及癌旁组织中G6PD与HKⅡ蛋白的表达水平。结果过表达实验中,与Flag转染组相比,Flag-G6PD转染组HCT116和SW480两种细胞培养液中葡萄糖浓度、S期所占比例及侵袭能力均无明显变化;干扰实验中,与阴性对照转染组相比,G6PD-Homo-1504转染组两种细胞的葡萄糖浓度显著升高,S期所占比例和侵袭能力显著降低。G6PD与HKⅡ表达水平呈正相关。结论干扰G6PD减少了大肠癌细胞葡萄糖的消耗,抑制了细胞的增殖和侵袭能力;同时G6PD对HKⅡ可能存在调控作用。

[HgI_4-(R6G)_2]_n体系的共振散射光谱法测定微量汞(Ⅱ)的研究

在pH值=4.0的条件下,Hg2+,I-与罗丹明6G(R6G)形成三元离子缔合物。由于HgI4(R6G)2分子间存在较强的分子间作用力和疏水作用力而生成[HgI4-(R6G)2]n纳米微粒。在320nm处产生一灵敏共振散射(即共振瑞利散射)光谱峰。Hg质量浓度在0.004～0.36mg·L-1范围内与共振散射光强度呈现出良好线性关系。实验结果表明,本法具有灵敏度较高、选择性较好等特点。用于水样中微量Hg的测定,效果良好。

碘化物-罗丹明6G体系共振瑞利散射法测定痕量铅

在稀磷酸介质中 ,铅 (Ⅱ )与过量的I-离子形成 [PbI4]2 -配阴离子 ,并进一步与罗丹明 6G(Rh6G )形成离子缔合配合物 ,产生强烈的共振瑞利散射 (RRS )光谱 ,最大RRS波长位于 315nm 对共振瑞利散射光谱特性、主要影响因素和反应的最佳条件进行了研究 ,在 4 0× 10 -5%D 2 0× 10 -4μg·ml-1范围内 ,共振瑞利散射强度与铅的浓度成线性关系 ,实验结果表明 ,铅的检出限为 3 5× 10 -5μg·ml-1。

IL-6诱导小鼠肌原细胞系C2C12 UⅡ/UT系统的高表达

目的观察外源给予IL-6对C2C12细胞中UⅡ/UT系统表达的影响。方法培养小鼠肌原细胞系C2C12细胞株,应用胎盘蓝染色和测定细胞培养液中LDH的含量检测IL-6对细胞损伤的影响,应用放射免疫的方法检测细胞培养液和裂解液中UⅡ的含量,应用RT-PCR法测定C2C12中UT mRNA的表达。结果外源给予不同浓度的IL-6,C2C12细胞裂解液中UⅡ的含量各组间无明显差异,但增加了细胞孵育液中UⅡ的含量,10ng/mL、50ng/mL和100ng/mL时较对照组分别增加了104.9%(P<0.01)、86.4%(P<0.01)和94.3%(P<0.01)。低浓度IL-6(0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL和50ng/mL)刺激明显增加了UT mRNA的表达,而高浓度的IL-6(100ng/mL)刺激反而使UT mRNA的表达降低。结论IL-6作为T2DM发病因素之一的炎症因子,可能是T2DM时骨骼肌组织中UⅡ/UT系统表达增加的因素之一。

罗丹明6G光度法测定矿石中微量汞

本文试验了在阿拉伯树胶存在下,汞(Ⅱ)—碘化钾—罗丹明6G在水溶液中的显色反应,在本法拟定的条件下灵敏度高(ε=1.70×10^(5)L·mol^(-1)·cm^(-1)),酸度范围宽容易控制,稳定性和重现性都好,显色迅速,操作简便,可用于矿石中微量汞的测定。

三乙醇胺增敏催化过氧化氢氧化罗丹明6G固体基质室温磷光法测定痕量钴

基于硼砂-盐酸缓冲溶液(pH=8．40)中及Pb^(2+)微扰条件下,Rhod．6G-Na_2B_4O_7-HCl-TEA-H_2O_2体系在滤纸基质上能发射强而稳定的室温磷光(RTP),Co^(2+)能催化过氧化氢氧化罗丹明6G(Rhod．6G),导致其RTP剧烈猝灭,而三乙醇胺(TEA)可增敏室温磷光的猝灭程度,据此提建立了催化过氧化氢氧化罗丹明6G固体基质室温磷光法测定痕量钴的新方法测定TEA存在时体系的△Ip值,发现比不加TEA时增敏3倍。钴(Ⅱ)量为0．0048～192(fg/斑)(对应浓度范围0．012～480pg/mL,0．4μL点样量)与△Ip值成线性关系,其工作曲线的回归方程△Ip=-44．46+201．4×m_(Co2+)(fg/斑), n=6,相关系数r=0．9992,检出限为0．0006fg/斑(对应浓度为0．0015 pg/mL),同时测定固体基质室温磷光寿命τ=11．8ms,本方法简便、快速、灵敏,结果准确。

GⅡ.17型诺如病毒多克隆抗体的制备及应用

目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用。方法制备并纯化GⅡ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定。将其免疫家兔制备兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性。筛选与GⅡ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化GⅡ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用。结果 GⅡ.17 NoV VLPs经检测纯度为95%,且颗粒形态完整,粒径均一。制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(GⅠ.2、GⅠ.7、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.7)VLPs的交叉反应较弱。GⅡ.17 NoV VLPs和A、B、O和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P>0.05);以GⅡ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25μg/m L,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量GⅡ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测。结论成功制备了高效价兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-GⅡ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于GⅡ.17 NoV VLPs免疫效果的评价。

G蛋白信号调节因子6对心肌细胞肥大的作用及机制研究

目的探讨G蛋白信号调节因子6(RGS6)对心肌细胞肥大的调控作用及机制。方法用AdRGS6和AdshRGS6慢病毒分别感染心肌细胞使RGS6表达上下调,AngⅡ构建肥大模型。测定各组细胞面积和ANP、BNP的表达,检测活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2、p38、JNK1/2)的表达。明确改变的信号通路后,用ROS抑制剂(DPI)开展逆转实验。结果 (1)与AdG FP/AngⅡ组相比,AdRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显增加,信号通路中ROS和磷酸化(p)-JNK1/2表达增加。(2)与AdshRNA/AngⅡ相比,AdshRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显降低,信号通路中ROS和p-JNK1/2表达下降。(3)逆转实验:与AdRGS6/AngⅡ组相比,DPI干预的AdRGS6/AngⅡ组心肌细胞面积明显降低,p-JNK1/2蛋白表达降低。结论 RGS6通过激活ROS/JNK1/2通路促进心肌细胞肥大。

槐属二氢黄酮G促进L6细胞内GLUT4的表达和转运

利用细胞葡萄糖摄取检测试剂盒检测苦参中槐属二氢黄酮G(Sophoraflavanone G,SFG)对L6细胞葡萄糖摄取的影响,发现SFG能够增加大鼠成肌细胞(L6)的葡萄糖摄取;之后,使用Western blot检测发现SFG对L6细胞内GLUT4的表达有显著的促进作用;同时.在可稳定表达IRAP-mOrange荧光蛋目的L6细胞内,使用激光共聚焦显微镜监测SFG作用下葡萄糖转位蛋白4(glucose transporter 4.GLUT4)的转位,发现SFG对GLUT4的转位有显著的促进作用,而且SFG对GLUT4转位的促进呈浓度依赖性;另外,免疫荧光实验结果也显示SFG增强L6细胞中GLUT4与细胞膜的融合.这些结果显示利用SFG处理L6细胞后丄6细胞内GLUT4的表达、转运及与细胞膜的融合继而促进葡萄糖的摄取显著增强,说明SFG可能具备开发成一种新的降血糖药物的潜力.

固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中的6种工业染料

建立了超高效液相色谱一串联质谱（UPLC-MS／MS）同时检测食品中6种工业染料含量的方法。样品用含50％甲醇和1％甲酸的50mmol／L乙酸铵溶液进行提取、WAX弱阴离子交换固相萃取柱进行净化后，采用多反应监测（MRM）模式进行检测，基质曲线外标法定量。其中酸性橙Ⅱ采用负离子模式检测，其余5种染料采用正离子模式检测。碱性橙Ⅱ、罗丹明B、碱性嫩黄O、罗丹明6G、碱性桃红T的定量限为1．6μg／kg，酸性橙Ⅱ为6．0μg／kg；碱性橙Ⅱ、罗丹明B、碱性嫩黄O、罗丹明6G、碱性桃红T的线性范围为1．0～100．0μg／L；酸性橙Ⅱ的线性范围为5．0～100pg／L，线性相关系数均大于0．999。6种染料的回收率为70．3％～109．2％；相对标准偏差（RSD）为2．6％～14．1％。本方法灵敏度高，操作简单高效，适合于食品中6种非法添加工业染料的定量及确证分析。

基于π…π和C-H…π作用力构筑的磺酰腙镍(Ⅱ)配合物的超分子组装(英文)

在温和条件下,以对甲苯磺酰氯为初始原料合成了具有新颖Ni-O(磺酰基)配键的磺酰腙镍(Ⅱ)配合物NiL2(HL:4-甲基-N′-(吡啶-2-亚甲基)苯磺酰肼)。晶体结构研究表明,该配合物仅通过π…π和C-H…π作用组装成两种不同类型的二聚体,一是通过平行四重芳基环绕(P4AE:由面对面(OFF)和边对面(EF)π堆积组成)相互作用组装而成,二是仅通过OFF相互作用进行组装。沿着c轴方向,两类二聚体通过P4AE和OFF作用的组合,以"头碰头"形式组装成一维链。每个二聚体均包含了两种不同的对映体形式。利用B3LYP/6-31++G**方法,对两种二聚体结构单元单点能计算表明,具有P4AE作用的二聚体存在着OFF和EF的协同作用,也印证和和支持了实验结果。光谱研究确证溶液中Ni(Ⅱ)和HL形成了物质的量之比为1∶2配合物。

应用实时荧光定量RT-PCR技术快速检测基因Ⅱ型诺如病毒

目的建立基因Ⅱ型诺如病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并应用于临床标本的检测。方法二氧化硅法提取粪便中的病毒RNA,使用针对基因Ⅱ型诺如病毒N/S结构域的引物和探针建立荧光定量PCR方法,对罗城县急性胃肠炎疫情的34份标本进行检测,并与常规RT-PCR和ELISA检测结果比较;还用该法对2006年2月至2007年1月广西急性胃肠炎暴发及散发病例粪便样本305份做了临床检测。结果用实时荧光定量RT-PCR法成功地从罗城疫情样本中检测出基因Ⅱ型诺如病毒,实时荧光定量RT-PCR、常规RT-PCR和ELISA的检出率分别为为85.3%、76.5%和26.5%。而实时荧光定量RT-PCR对114份对急性胃肠炎暴发疫情及191份散发病例样本的基因Ⅱ型诺如病毒检出率分别为56.1%和23.6%。结论诺如病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法具有快速、灵敏和特异的优点,不但能对标本中病毒浓度进行定量检测,还能鉴别诺如病毒基因型别。同时也发现基因Ⅱ型诺如病毒感染在广西急性胃肠炎暴发疫情和散发病例中较常见。