肝癌组织中遗传印记基因PEG10表达的特异性及其意义

目的:研究PEG10在肝癌组织中表达的特异性,为其作为一个潜在的肝癌基因治疗的新的分子靶点提供实验依据.方法:从来自不同器官组织的肿瘤细胞系(人肝癌细胞株HepG2、人胃癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3、人黑色素瘤细胞株A375、人T淋巴瘤细胞株Jurkat)、正常人胎肝细胞株L02、32例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织、10例良性肝病患者肝组织、10例正常人外周血单个核细胞中抽提总RNA,经RT逆转录合成cDNA,再以PCR方法检测PEG10的表达.同时,肝癌组织和癌旁组织标本经RT-PCR检测AFP的表达.结果:经RT-PCR扩增的PEG10基因片段为455bp,AFP基因的扩增片段为140bp,与原设计一致;PEG10在人肝癌细胞株HepG2中明显表达,人胃癌细胞株SGK7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3中弱表达,而正常人胚胎肝细胞株LO2和其他肿瘤细胞株(人T淋巴细胞瘤、人黑色素瘤)中表达均为阴性雇32例肝癌及相应癌旁组织中,PEG10的表达阳性率分别为78.1%和0%;而AFP基因的阳性率分别为93.8%和59.4%.经McNemar检验,显示PEG10基因在肝癌组织中表达的敏感性与AFP表达敏感性之间无显著性差异(X20.01,1=1.78,P>0.05);而癌旁组织中PEG10表达率(0/32)明显低于AFP表达率(19/32)(X20.01,1=17.05,P<0.01).另外10例良性肝病患者(肝硬化4例,自身免疫性肝病2例,肝血管瘤2例,丙型肝炎1例,血色素病1例)肝组织标本及正常人的外周血细胞进行PEG10基因检测,结果均为阴性.结论:PEG10的表达不但具有比AFP更高的肝癌组织特异性,而且具有相对器官组织特异性.本实验为PEG10作为一个新的肝癌标志物和基因治疗的分子靶点提供了实验依据.

Northern杂交检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在不同肿瘤细胞中的表达水平

目的:从mRNA水平检测五种不同肿瘤细胞株中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的表达情况。方法:采用Northern杂交方法。结果:Northern杂交结果显示了两条区带,并且pp-GalNAc-T2在不同肿瘤细胞中存在表达差异。结论:pp-GalNAc-T2基因在不同细胞存在差异表达并可能存在着剪切现象。

靶向遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建并鉴定针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体。方法根据PEG10基因cDNA序列,设计针对目的基因的4个siRNA靶序列,将其插入H1启动子下游,克隆到真核表达载体psiRNA-hH1neo中,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论本研究成功构建针对PEG10的真核表达载体,可能成为肝癌基因治疗中的一种新型、高效的治疗载体。

母源性印记基因在牛早期胚胎中的表达

为研究母源性印记基因Magel2、Sgce、SNRPN在牛早期胚胎中的表达规律,初步判定其印记发生的阶段。利用Real-time PCR技术,检测了这3个基因在牛孤雌激活（Parthenogenetic Activation,PA）胚胎和体外受精（In vitro Fertilization,IVF）胚胎中的表达水平。结果表明：在牛IVF和PA 2种胚胎间,3个母源性印记基因的印记表达模式明显不同,Magel2在牛IVF胚胎各阶段都有表达,而在PA胚胎中没有检测到表达信号;Sgce在牛IVF胚胎各阶段都有表达,而只在PA胚胎的2~4细胞阶段检测到表达,在其他发育阶段均没有表达;SNRPN在牛IVF胚胎各阶段都有表达,而只在PA胚胎的2细胞和囊胚阶段检测到很微弱的表达。实验结果表明,母源性印记基因Magel2、Sgce、SNRPN的正常表达对牛早期胚胎发育具有重要作用。

父源性印记基因在牛早期胚胎中的表达

【目的】研究父源印记基因在牛早期胚胎中的表达模式。【方法】利用Real-time PCR技术,检测Gnas、Grb10和Xist这3个父源性印记基因在牛体外受精(In vitro Fertilization,IVF)和孤雌激活(Parthenogenetic Activation,PA)胚胎各发育阶段的表达情况。【结果】对于IVF和PA两种来源的牛胚胎,Gnas在胚胎各发育阶段的表达没有明显差异;Grb10在2细胞阶段的PA胚胎中的表达量明显高于在IVF胚胎的,但从4细胞阶段到囊胚阶段,Grb10在两种来源的牛胚胎中表达没有明显差异;从2细胞阶段到8细胞阶段,Xist在两种来源的牛胚胎中表达没有明显差异,但从16细胞期开始,Xist在PA胚胎中的表达明显高于IVF胚胎的表达量。【结论】对于牛IVF胚胎和PA胚胎,Gnas、Grb10和Xist从2细胞期到囊胚期都可以检测到表达,但表达模式不同。这3个父源性印记基因在牛胚胎发育过程中可能发挥着重要的作用。

猪DIO3基因组织表达谱及印记分析

采用荧光定量PCR方法分析了猪DIO3基因在组织中的表达状况。结果表明,DIO3基因主要表达于背部脂肪组织,在肝脏、子宫、肾脏、心脏、小肠、肌肉和胃组织中呈中度表达,在脾脏和肺脏中表达量很低。采用外显子687 bp处的A/C突变(A/C 687)检测该基因在猪胚胎组织中的印记状态,DIO3基因在所有组织中均表现为印记。

反向 Northern Blotting 对绵羊卵巢组织差异表达ESTs的鉴定

利用地高辛DNA标记与检测技术反向Northern斑点杂交,对小尾寒羊和滩羊卵巢组织差异显示ESTs进行鉴定,避免同位素放射性污染,安全性很高且操作简单,提高了实验的准确性,一种鉴定差异显示ESTs简单而有效的方法。在研究基因表达、比较不同环境条件下动物组织的mRNA差异表达等方面具有广阔的应用前景。

“抽象”:作为一种语言表达和生命印记——艺术家姜陆访谈录

姜陆先生现任全国版画艺委会主任,曾任天津美术学院院长,在当代中国的版画艺术创作领域深孚众望。姜陆先生是数十年来中国现当代艺术转型和成长的重要亲历者和见证者,且至今仍然积极活跃于当代艺术探索的最前沿领域当中。

猪DLK1基因序列特征、印记状况及组织表达分析

提取了2月龄大白猪、梅山猪及其正反交F1代个体的DNA或RNA样品,采用RT-PCR、SNP和相对定量分析的方法研究了猪DLK1基因的不同剪接体,印记状况和组织特异性表达谱.结果表明:猪DLK1氨基酸具有糖基化位点,表皮生长因子重复结构特征和delta/notch/serrate信号分子家族高度相关的二级结构,并且与其他哺乳动物的氨基酸序列具有高度同源性;在2月龄猪的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾、胃、舌头、小肠、骨骼肌和脂肪组织中除了表达DLK1-B和DLK1-C2外,还发现了新的剪接体DLK1-A,并且3种剪接体在所检测的组织中均只表达父源的等位基因;DLK1基因总的表达量在各组织中存在显著性差异(p<0.01),其中骨骼肌和肺表达量最高,其次是舌、脾和脂肪,心脏和肝脏最低(p<0.05).因此,DLK1基因在哺乳动物间高度保守;猪在生长发育的各个阶段主要表达DLK1-C2剪接体,在某阶段也表达DLK1-A或DLK1-B;DLK1基因在猪生长发育的不同阶段和不同组织中只表达父源等位基因,并且对猪各个组织生长发育起着必要的作用,但总的表达量在不同生长发育时期组织中存在差异.

大足黑山羊PHLDA2基因的克隆、组织表达与印记状况分析

【目的】克隆大足黑山羊PHLDA2(pleckstrin homology-like domain,family A,member 2)基因序列,分析其组织表达特征、印记状况以及与胎盘性状的关系,为深入研究该基因在山羊胎盘中的功能积累数据。【方法】根据人、牛和猪PHLDA2的保守区域设计引物以RT-PCR方法扩增大足黑山羊该基因部分c DNA序列,进一步利用5′-和3′-RACE技术获得全长c DNA序列;利用ORF Finder和Prot Param等在线工具分析PHLDA2基因序列特征;采用Real-time PCR方法分析PHLDA2在大足黑山羊心、肝、脾、肺、肾、大脑、肌肉、脂肪、舌和胎盘等10个组织的表达差异;寻找大足黑山羊和波尔山羊PHLDA2基因序列SNP位点,基于表达SNP的方法分析该基因在F1代组织中的印记状况;采用线性回归的方法分析PHLDA2表达量与胎盘性状的关系。【结果】①克隆得到935 bp大足黑山羊PHLDA2的c DNA全长序列,其中5′-UTR、3′-UTR和编码序列分别为62 bp、450 bp和420 bp,其编码140个氨基酸。②预测的山羊PHLDA2蛋白分子量大小为15 638.7 Da,等电点为9.18,二级结构由α-螺旋(37.14%)、β-转角(9.29%)、延伸链(23.57%)和无规卷曲(30%)组成,并且包含保守的PH(pleckstrin homology)结构域。3BLAST分析发现,山羊PHLDA2定位于29号染色体,其与牛、猪、猕猴、马和人同源基因核苷酸序列的相似性分别达到91%,90%,90%,90%和89%,在核苷酸和氨基酸序列上与牛的亲缘关系最近。4荧光定量PCR结果显示PHLDA2在山羊胎盘中表达量最高(P<0.01),在心、肝、肺、肾、肌肉、脂肪、舌和大脑组织中表达量很低且差异不显著(P>0.05),在脾中未检测到表达。5印记分析表明,PHLDA2在初生山羊胎盘、心脏和肝脏组织表达母源等位基因,但在肺、大脑和肌肉组织为双等位基因表达。6PHLDA2表达水平与山羊胎盘重回归关系显著(n=15,R2=0.855,P<0.01)。【结论】山羊PHLDA2基因序列和结构特征具有物种间的保守性,但是其印记状况具有组织特异性;PHLDA2为山羊胎盘的生长和功能调控的重要基因。

绵羊皮肤mRNA差异显示结果的Northern印记初步分析

利用Northern印记技术,对绵羊不同部位皮肤mRNA差异显示结果进行分析。所选取的两条差异条带以地高辛标记,与绵羊不同部位皮肤总RNA进行杂交,结果有1条为阳性差异条带。

印记基因Inpp5f-v3的片段克隆及其在小鼠胚胎发育中的表达

目的:探讨印记基因Inpp5f-v3在小鼠胚胎发育过程中的表达情况。方法:针对其特异性第一外显子设计引物并扩增Inpp5f-v3基因片段,构建Inpp5f-v3/pBluescriptⅡKS重组质粒,合成地高辛标记的RNA探针;采用Norhtern印迹、实时定量RT-PCR和原位杂交技术分析Inpp5f-v3在小鼠胚胎发育过程中的表达。结果:Northern杂交显示仅在脑组织中存在一个2.7kb的转录本;原位杂交结果表明该基因在小鼠E15.5脑组织中的嗅球、大脑皮层、前脑、后脑及小脑的外颗粒层中表达。结论:推测Inpp5f-v3基因的表达可能受小鼠胚胎发育的调控;预计该基因在小鼠的脑及神经系统发育中发挥作用。

印记基因SNRPN、NDN和UBE3A在初生仔猪及胎盘中的表达谱分析

[目]的]分析印记基因SNRPN、NDN和UBE3A在初生仔猪中的表达情况，从而探讨它们和猪生长发育的关系。[方法]采用荧光定量PCR方法，检测SNRPN、NDN、UBE3A基因在出生3d仔猪的13种组织（心、肝、脾、肺、肾、肌肉、大脑、垂体、小肠、胃、膀胱、脂肪、下丘脑）及不同时期的胎盘中的表达水平。

一个在肺腺癌细胞系中差异表达cDNA片段的定位及表达分析

为了研究和克隆肺癌转移相关候选基因 ,探讨肺癌发生及转移的分子基础 ,应用细胞培养、cDNA克隆、North ern印记杂交和生物信息学技术分析了在细胞来源相同 ,但转移能力不同的肺腺癌细胞系AGZY83 a和Anip973中差异表达片段OPB7 1在人不同组织中和不同人肺癌细胞系中的表达情况 ,并应用RH定位技术对该片段进行了基因定位。表明OPB7 1与已知基因同源性差 ,该基因在正常人多种组织中有表达 ,心肌和骨骼肌中高表达 ,转录本均为 3 0kb左右。在不同人肺癌细胞系中存在该基因的表达差异 ,高转移潜能、低分化及高浸润的细胞系中呈高表达趋势 ,且表达的片段大小略有差别。提示OPB7 1是一个具有广泛表达谱的基因 。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

盐碱胁迫对水稻幼苗中基因差异表达的影响(英文)

为了阐明已分离的盐碱适应性相关基因(Liuetal, 2000)的表达特性,以14d叶龄的水稻品种日本晴幼苗为材料,分别经NaHCO3 (60mmol/L,pH8. 50) )处理6h、12h、24h、48h, 及不同pH值(pH4. 50, 6. 50, 8. 50, 10. 50)的NaCl(100mmol/L), NaHCO3 (60mmol/L)和Na2CO3 (30mmol/L)处理24h, 以分析时间效应及浓度与pH值间的联合效应. 结果表明,与对照(H2O, pH6. 50)相比较,NaHCO3 (60mmol/L)处理6h、12h、24h、48h后,mitochondrialAT Pase6×103的转录本分别提高2. 73、0. 82、0. 01和1. 79倍;cAPX转录本在24h和48h较对照提高1. 17和1. 49倍;处理6h后CA和HSP90基因表达受显著抑制;UDPG-GT增强表达的滞后期为6h;thioredoxin受NaHCO3轻微抑制.不同pH值和24h处理条件下,NaHCO3和Na2CO3显著促进mitochondrialATPase6×103基因表达.CA基因表达受Na+、HCO-3 和pH的共同影响;而thioredoxin主要受Na+和pH的双重影响; cAPX也表现出类似趋势.UDPG-GT在Na2CO3处理中表达量最高,HSP90的表达随pH的升高而降低.

单眼视网膜摘除后鸽左右前脑基因的差异表达

利用消减抑制杂交 (SSH)技术分析左眼视网膜摘除后成鸽左右前脑基因差异表达情况 ,对 14个重组子经反Northern杂交去除假阳性 ,最终获得 4个阳性重组子 ,对阳性重组子进行克隆和测序 ,其中PFB/SSH 8片段长 2 2 6bp ,它的 138bp与人CaMⅠ基因外显子有 85 %的同源性 ;PFB/SSH 15片段长 2 5 2bp ,与nexinIalpha非表达序列有低的同源性 ;另外

HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究

背景与目的:对人的胃癌、食道癌及宫颈癌的癌组织中HSP70基因的表达进行研究,以了解细胞癌变机制和对癌症的基因治疗提供依据。材料与方法:由医院手术室提供癌组织(胃癌、食道癌、宫颈癌)样本,分离出癌组织、癌旁组织和正常组织,分别按异硫氰酸胍法提取RNA,并进行1%琼脂糖电泳,再将RNA从凝胶中转移到(Northernblot)滤膜中,之后采用人的HSP70基因探针P17与人的胃癌、食道癌及宫颈癌的癌组织中提取的RNA进行Northern杂交。结果:从胃癌、食道癌、宫颈癌样本分离的癌组织均出现了较相应正常组织强的杂交信号。结论:HSP70基因癌组织中高表达,表明该基因在组织癌变过程中起着重要的作用。从而为了解细胞癌变机制和对癌症的基因治疗提供了有价值的证据。

小麦抗黄矮病相关基因cDNA-AFLP差异表达片段的验证

cDNA-AFLP技术是研究基因差异表达的有利工具,广泛用于植物抗病、抗逆和生长发育等研究领域。本研究以cD-NA-AFLP技术分离的抗黄矮病小麦与感黄矮病小麦间差异表达片段为对象,利用反向Northern方法,从cDNA-AFLP技术筛选的46个候选抗黄矮病防御基因差异表达片段中,筛选出抗黄矮病相关防御基因片段6个;采用对回收的差异片段进行再扩增(延伸引物再扩增),再与原选扩产物一起进行PAGE电泳分析法,并结合半定量RT-PCR分析法,又验证了候选抗黄矮病相关基因表达片段3个。反向Northern方法以及对回收的差异片段进行再扩增(PAGE再分析法),结合(半)定量RT-PCR分析方法,可以比较准确地验证cDNA-AFLP所筛选出的基因差异表达片段。