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人参中miRNA的提取和鉴定分析 被引量:4
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作者 王颖芳 王宇亮 +5 位作者 韩彬 贾真 陈艳芬 胡旭光 李钟 孟江 《实用中医内科杂志》 2012年第8S期7-8,10,共3页
[目的]通过Northern印迹杂交(Northern blot)验证人参中微小核糖核酸(miRNA)的存在。[方法]根据已知人参miRNA序列设计合成2条特异LNA反义寡核苷酸探针,并用地高辛标记。采用通用植物miRNA提取试剂盒提取新鲜人参Total RNA,15%变性PAGE... [目的]通过Northern印迹杂交(Northern blot)验证人参中微小核糖核酸(miRNA)的存在。[方法]根据已知人参miRNA序列设计合成2条特异LNA反义寡核苷酸探针,并用地高辛标记。采用通用植物miRNA提取试剂盒提取新鲜人参Total RNA,15%变性PAGE电泳分离小RNA并检测。[结果]Northern blot表明,人参miR482和miR1439等2种miRNA均有表达。[结论]验证了人参中miRNA的存在,为研究人参的疗效机制、临床应用和剂型开发等提供新思路。 展开更多
关键词 人参 MIRNA northernblot
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棉花线粒体atp9基因的克隆和转录研究获取渠道分析
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作者 史计 张锐 +2 位作者 石庆华 张晓 郭三堆 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期25-32,共8页
以三系杂交棉胞质雄性不育系P30A、保持系P30B和恢复系Y18为材料,通过Tail-PCR从可育胞质获得线粒体atp9基因序列,并利用Northern blot分析了atp9基因在棉花幼蕾的的转录情况。结果显示:在三系中atp9基因均存一个0.5 kb的强杂交带和一个... 以三系杂交棉胞质雄性不育系P30A、保持系P30B和恢复系Y18为材料,通过Tail-PCR从可育胞质获得线粒体atp9基因序列,并利用Northern blot分析了atp9基因在棉花幼蕾的的转录情况。结果显示:在三系中atp9基因均存一个0.5 kb的强杂交带和一个1.0 kb的弱杂交带,杂交结果无明显差异;三系中atp9基因编码区共有7个编辑位点,第7个编辑位点密码子由于编辑转变为终止密码子使翻译提前终止;atp9基因在保持系中幼蕾的编辑频率要明显低于不育系和恢复系;发现atp9基因的编辑与棉花胞质形式相关,而且不同的核背景也会影响编辑率,推测线粒体atp9基因与棉花的胞质雄性不育具有一定的相关性,但有待更进一步分析。 展开更多
关键词 棉花 线粒体 atp9基因 TAIL-PCR northernblot RNA编辑
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Northern Blot法分析高浓度TSH诱导甲状腺细胞c-fos的表达
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作者 吕枚 王玉珣 +5 位作者 周卫东 陈曙 汤特 方佩华 李建民 袁承运 《天津医药》 CAS 1996年第4期230-231,共2页
近年研究结果已在分子水平上认识到原癌基因不仅可致肿瘤形成,其对正常细胞的生长、分化、增殖、信息传递及内分泌细胞的分泌都具有极其重要的作用。c-fos是其中一种核内蛋白类原癌基因,可被激素等快速而短暂地激活。由于它是转录激活... 近年研究结果已在分子水平上认识到原癌基因不仅可致肿瘤形成,其对正常细胞的生长、分化、增殖、信息传递及内分泌细胞的分泌都具有极其重要的作用。c-fos是其中一种核内蛋白类原癌基因,可被激素等快速而短暂地激活。由于它是转录激活因子的组成成份。 展开更多
关键词 TSH 甲状腺细胞 C-FOS northernblot
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大鼠自发性高血压和心肌肥厚时热休克蛋白70基因表达的研究
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作者 杨鸿 黄生宁 +3 位作者 张晨晖 温进坤 周爱儒 汤健 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1994年第S1期105-110,共6页
本工作采用热休克蛋白70(HSP70)核酸分子杂交方法,检测了自发性高血压大鼠(SHR)与其正常对照(WKY)大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞(ASMC)受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室HSP70mRN... 本工作采用热休克蛋白70(HSP70)核酸分子杂交方法,检测了自发性高血压大鼠(SHR)与其正常对照(WKY)大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞(ASMC)受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室HSP70mRNA的水平,并对SHR和WKY肝组织基因组DNA进行了限制性酶切片断长度多态性(RFLP)分析。结果表明:a.37℃培养的SHRASMC及整体SHR肝组织HSP70mRNA的基础表达水平均低于WKY大鼠,SHRASMC受热刺激(42℃15min)后2h,HSP70mRNA表达增加的程度明显大于WKY大鼠。b.大鼠腹主动脉缩后造成左室压力超负荷,左心室HSP70mRNA在压力超负荷4h时已明显升高,1d、2d、1w均维持在高水平,1w后逐渐降低。c.SHR和WKY鼠肝组织基因组DNA经BamHI酶切后,SHRHSP70基因缺失一条约5.6kb的片段。提示:SHRASMC对热敏感性增加;压力负荷增加早期,左心室HSP70mRNA表达明显增加;HSP70基因结构异常可能与高血压发生有关。 展开更多
关键词 热休克蛋白 心肌肥厚 高血压 northernblot SouthernBlot RFLP
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大鼠心肌肥厚时心脏心钠素、ras癌基因的表达
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作者 杨鸿 许顶立 +5 位作者 夏凉 董明纲 王瑜 姚阿卿 周爱儒 汤健 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1994年第S1期67-74,共8页
心钠素是由心肌细胞合成和分泌的一种循环激素,具有强大的利钠、利尿、舒张血管、抑制肾素—血管紧张素系统等作用,在高血压、心肾功能不全等疾病的发病过程中具有重要作用。本工作采用分子杂交技术,研究了心室超负荷、高血压心肌肥... 心钠素是由心肌细胞合成和分泌的一种循环激素,具有强大的利钠、利尿、舒张血管、抑制肾素—血管紧张素系统等作用,在高血压、心肾功能不全等疾病的发病过程中具有重要作用。本工作采用分子杂交技术,研究了心室超负荷、高血压心肌肥厚时,大鼠心肌心钠素基因以及ras癌基因的表达。实验证明:a,部分结扎肾动脉上方的腹主动脉可明显升高血压和左心室/体重比值;血浆心钠素水平可由未结扎时的127.00士21.8pg/ml升至结扎1周时的461.10士102.90pg/ml(P<0.01)。b.Northernblot结果发现,心房心钠素mRNA在腹主动脉部分结扎后1周内没有明显的改变,两周时明显升高;心室心钠素mRNA在结扎1周时开始出现,4周时达到高峰。牛磺酸可明显促进心室心钠素mRNA的表达,肼苯哒嗪则明显抑制心室心钠素的转录。c.应用心钠素限制性内切酶片段长度多态性分析,还发现遗传性高血压大鼠的染色体DNA应用PstI酶切后,较WKY大鼠缺失一条3.0kb的片段。d.部分结扎腹主动脉或注射α-肾上腺素能受体激动剂—新福林,可促进心肌ras癌基因的转录。这种增加在结扎后4小时内即可发生,且可持续3周以上。其rasmRNA的变化? 展开更多
关键词 心钠素 心肌肥厚 RAS癌基因 northernblot 表达
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斜纹夜蛾GST基因的原核表达载体构建、融合蛋白表达及Northern印迹分析
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作者 王皓翔 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期47-50,共4页
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是生物体内重要的解毒酶系之一。根据斜纹夜蛾(Spodoptera litura)GST基因设计特异引物,从cDNA文库中扩增GST基因并克隆至pGEM-T载体,经鉴定后经SpeⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与表达载体pPROEX HTb连接,转化感受态细胞E... 谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是生物体内重要的解毒酶系之一。根据斜纹夜蛾(Spodoptera litura)GST基因设计特异引物,从cDNA文库中扩增GST基因并克隆至pGEM-T载体,经鉴定后经SpeⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与表达载体pPROEX HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,经PCR鉴定和双酶切鉴定得到阳性重组质粒pPROEX HTb-GST,在IPTG诱导下,获得融合蛋白的表达。经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物为25KD的GST融合蛋白。Northern杂交结果表明,2龄期斜纹夜蛾GST基因在mRNA水平上的表达量最大,3龄期次之,5龄期时的表达量最小。 展开更多
关键词 谷胱甘肽-S-转移酶 载体构建 蛋白表达 northernblot
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RNA电泳结果和Northern blot效果的关系探讨
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作者 徐杰 《广州师院学报(自然科学版)》 1997年第1期90-92,共3页
对RNA电泳结果和Northernblot效果的关系进行探讨。
关键词 RNA northernblot效果 变性胶电泳 非变性胶龟泳 拖尾现象 乙醇酸氧化酶
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Northern Blot分析与原位杂交对大鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA检测的比较
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作者 李卓娅 冯新为 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1994年第4期331-334,共4页
本文比较了Northernblot与原位杂交对大鼠腹腔巨噬细胞(M)TNF-αmRNA的检测结果。对照组Northernblot为阴性,而原位杂交则见胞浆内有一定量TNF-αmRNA存在;LPS(100ng/ml)刺... 本文比较了Northernblot与原位杂交对大鼠腹腔巨噬细胞(M)TNF-αmRNA的检测结果。对照组Northernblot为阴性,而原位杂交则见胞浆内有一定量TNF-αmRNA存在;LPS(100ng/ml)刺激组,则两种方法均显示M转录TNF-αmRNA明显增多。Northernblot可对此作定量比较,而原位杂交则显示该mRNA在核周围相对较密。两种方法结合,可互相取长补短,以利更好、更全面地观察、分析某种基因变化。 展开更多
关键词 northernblot 原位杂交 TNF-Α mRNA
全文增补中
过氧化苯甲酰对小鼠皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 孙士勇 张蘅 《北京医科大学学报》 CSCD 1994年第5期341-343,共3页
过氧化苯甲酰是一种可产生自由基、具有促癌活性的化合物。Northern印迹分析研究表明,BPO在40mg一次局部涂用于小鼠皮肤后,皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA水平在涂用BPO后6小时左右升至最高,而BPO多... 过氧化苯甲酰是一种可产生自由基、具有促癌活性的化合物。Northern印迹分析研究表明,BPO在40mg一次局部涂用于小鼠皮肤后,皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA水平在涂用BPO后6小时左右升至最高,而BPO多次涂用,也可增加mRNA水平,并以第6小时最明显。提示,BPO可能通过促进ODCmRNA表达、增加ODC酶量以诱导ODC活性。 展开更多
关键词 肿瘤 过氧化苯甲酰 鸟氨酸脱羧酶 MRNA 致癌物质
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Cloning and characterization of one putative muscle actin gene only expressed at the larval stages from brown planthopper, Nilaparvata lugens
10
作者 GU Jian-hua LIU Shu-hua YAO Xiang-mei SONG Feng ZHANG Yi-xi LIU Ze-wen 《Journal of Agricultural Science and Technology》 2008年第1期1-5,共5页
An actin gene (BPH-Actin3) from the important rice pest brown planthopper, Nilaparvata lugens, was cloned and gene expression was characterized at different development stages. The gene was 1461bp with an open readi... An actin gene (BPH-Actin3) from the important rice pest brown planthopper, Nilaparvata lugens, was cloned and gene expression was characterized at different development stages. The gene was 1461bp with an open reading frame of l l31bp coding for a 376 amino acids protein, with 330 nucleotides of the 3'-untranslation region (3'-UTR). The amino acid sequence deduced from the nucleotide sequence showed higher similarities to other insect muscle actins (94-95%) than those to non-muscle actins (87-93%). The 3'-UTR contains several AU-rich elements (AREs) AUUUA/UAAAU and one extended ARE UAAAAAU, which may function in regulating mRNA decay. Northern blot and RT-PCR studies showed BPH-Actin3 expressed at brown planthopper full larval stages with the highest mRNA levels at 3rd and 4th instar stages, but not expressed at egg and adult stages. Because the 3rd and 4th instars are the key development stages for brown planthopper wing-form determination, it was thought BPH-Actin3 might play important roles in brown planthopper wing development. 展开更多
关键词 brown planthopper ACTIN BPH-Actin3 northernblot gene expression
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Ca^(2+)依赖性磷脂酶A_2有效表达系统的构建
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作者 曾常茜 傅桂莲 王琰 《中国医师杂志》 CAS 2000年第7期391-393,共3页
为了构建Ca2 +依赖性磷脂酶A2 (CalciumdependentphospholipaseA2 ,cPLA2 )的有效表达系统 ,本实验应用SalⅠ消化cPLA2 -PMT2 重组体 ,电洗脱法回收cPLA2 片段并使其平末端化。应用NotⅠ消化PRC/CMV载体使其线性化 ,之后脱磷酸以防止自... 为了构建Ca2 +依赖性磷脂酶A2 (CalciumdependentphospholipaseA2 ,cPLA2 )的有效表达系统 ,本实验应用SalⅠ消化cPLA2 -PMT2 重组体 ,电洗脱法回收cPLA2 片段并使其平末端化。应用NotⅠ消化PRC/CMV载体使其线性化 ,之后脱磷酸以防止自身环化。cPLA2 与线性化且脱磷酸载体PRC/CMV进行平末端连接 ,转染鼠巨噬细胞 ,扩增培养 ,收集细胞 ,提取RNA ,Northernblot检测cPLAmRNA。结果表明 :PRC/CMV可以做为cPLA2 cDNA的有效表达载体 ,cPLA2 -PRC/CMV表达系统的成功构建为研究各种因素对cPLA2 展开更多
关键词 CPLA2 northernblot 表达
原文传递
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