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Molecular Cloning and Nucleotide Sequence of the Attenuated Hog Cholera VirusLapinized Chinese Strain 被引量:1
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作者 Wang Jiafu Zhang Chuyu +3 位作者 Fu Liezhen Wang Ning Huang Qianhua Zhang Pengwei(College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan 430072, China) 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS 1998年第4期499-503,共5页
The genomic sequence of the attenuated hog cholera virus Lapinized Chinese strain (HCLV) was determined from overlapping cDNA clones. The viral RNA of HCLV stain comprised 12 310 nucleotide (nt) including 374 nt and 2... The genomic sequence of the attenuated hog cholera virus Lapinized Chinese strain (HCLV) was determined from overlapping cDNA clones. The viral RNA of HCLV stain comprised 12 310 nucleotide (nt) including 374 nt and 239 nt at the 5′ and 3′-noncoding region, respectively. The complete genome sequence contained one large open reading frame which encoded an amino acid sequence of 3 898 residues with a calculated molecular weight of 437×103. Although there were mostly only small differences between the sequence of the HCLV strain and the published sequences of strains ALD, GPE?, Alfort and Brescia, there was one notable insertion of 12 nucleotides, TTTTCTTTTTTC in the 3′ non-coding region of HCLV strain. 展开更多
关键词 Key words hog cholera virus molecular cloning SEQUENCE
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MOLECULAR CLONING OF ATTENUATED HEPATITIS A VIRAL cDNA
2
作者 杨能宇 陈勇 +2 位作者 柴少爱 洪艳 毛江森 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1991年第22期1916-1920,共5页
An attenuated hepatitis A virus (HAV) strain (H2 strain) has been developed successfully by Mao et al. in our laboratory, which has been proven to have a good immanogenicity in animal and human trials. The molecular b... An attenuated hepatitis A virus (HAV) strain (H2 strain) has been developed successfully by Mao et al. in our laboratory, which has been proven to have a good immanogenicity in animal and human trials. The molecular biological research for H2 strain has been carried out in order to darify the attenuation mechanism of H2 strain on the molecular level. 展开更多
关键词 HEPATITIS A virus ATTENUATED strain CDNA molecular cloning
原文传递
我国斯里兰卡木薯花叶病毒的分子特征及致病性分析
3
作者 王国芬 李超萍 +5 位作者 时涛 吴会杰 蔡吉苗 李博勋 陆翠梅 黄贵修 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期187-196,共10页
为进一步探究我国斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)的分子特征及致病性。以感染SLCMV的木薯叶片基因组DNA为模板,PCR扩增获得DNA-A和DNA-B基因组全长,通过生物信息软件分析比较其核酸及氨基酸序列特征;构... 为进一步探究我国斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)的分子特征及致病性。以感染SLCMV的木薯叶片基因组DNA为模板,PCR扩增获得DNA-A和DNA-B基因组全长,通过生物信息软件分析比较其核酸及氨基酸序列特征;构建了强、弱致病力分离物(SLCMV-Colombo和SLCMV-DG1922)的侵染性克隆,分别将2种致病力分离物的DNA-A和DNA-B组分进行重组,接种烟草(Nicotianatabacum),比较2种分离物的致病性差异。结果显示:我国SLCMV为“旧世界”双组份菜豆花叶病毒,编码包括AV2基因在内的8个开放阅读框(ORFs);具有双生病毒典型的共同序列(CR)、重复序列、TATABox和TAATATT↓AC茎环结构,Rep蛋白羧基末端有7个氨基酸缺失;我国SLCMV的基因组、编码和非编码区与柬埔寨、泰国和越南分离物的相似性在97.0%~100.0%之间,与印度和斯里兰卡早期的分离物相似性为86.5%~98.6%,DNA-B组份与印度木薯花叶病毒株系(ICMV)编码区序列相似性为95.0%~97.6%,与其他9个非洲木薯花叶病毒株系序列之间的序列相似性均低于80.0%。侵染性克隆接种结果证实,强致病力分离物SLCMV-Col的DNA-A(Col-A)组份在烟草叶片表现典型花叶症状中起主要作用,而我国分离物的DNA-B(DG1922-B)能协同Col-A对烟草产生强致病性。本研究分析了我国SLCMV的全基因组结构,建立的侵染性克隆及其技术为进一步解析SLCMV致病性机理提供重要的研究基础。 展开更多
关键词 斯里兰卡木薯花叶病毒 分子特征 侵染性克隆 致病性
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Differentially expressed genes in hepatocellular carcinoma induced by woodchuck hepatitis B virus in mice 被引量:11
4
作者 Mark Feitelson 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第4期575-578,共4页
INTRODUCTIONHepatocellular carcinoma(HCC)is one of the major causes of death in the word.The mechanism of carcinogenesis is unknown,although it is widely accepted that HBV and HCV are clsely related to liver cancer[1-... INTRODUCTIONHepatocellular carcinoma(HCC)is one of the major causes of death in the word.The mechanism of carcinogenesis is unknown,although it is widely accepted that HBV and HCV are clsely related to liver cancer[1-5[1-5].Previously,a variety of studies have described the differences in gene expression which distinguished tumor from nontumor[6-11].Cloning of the genes,especially the genes associated with HBV and HCV,is still very important to account for the development of liver cancer. 展开更多
关键词 Animals Carcinoma Hepatocellular cloning molecular DNA Complementary Databases Nucleic Acid Gene Expression Regulation Neoplastic Gene Expression Regulation Viral Hepatitis B Hepatitis B virus Woodchuck Humans MICE Polymerase Chain Reaction Research Support Non-U.S. Gov't
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Cloning of differentially expressed genes in human hepatocellular carcinoma and nontumor liver 被引量:7
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作者 Xiao-Yan Cao Jie Liu Zhao-Rui Lian Marcy Clayton Jia-Lu Hu Ming-Hua Zh Dai-Ming Fan Mark Feitelson Institute of Digestive Diseases,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710033,Shaanxi Province,ChinaDepartment of Pathology & Cell Biology,Thomas Jefferson University,Philadelphia,PA19107 USADepartment of Pathology,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第4期579-582,共4页
INTRODUCTIONThe mechanism of hepatocellular carcinoma(HCC)is still unclear,although some genes have been found to play a role in the transformation of liver cells,and a variety of studies have described differences in... INTRODUCTIONThe mechanism of hepatocellular carcinoma(HCC)is still unclear,although some genes have been found to play a role in the transformation of liver cells,and a variety of studies have described differences in gene expression which distinguished tumor from nontumor[1-6].The new genes,especially the functional genes directly related with tumor are still worth being found.The purpose of our study is to find the different genes between human liver tumor and normal tissues using suppression subtractive hybridization. 展开更多
关键词 Gene Expression Regulation Neoplastic Carcinoma Hepatocellular cloning molecular Databases Nucleic Acid Humans Liver Neoplasms Polymerase Chain Reaction Sequence Analysis DNA
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甘蔗分子伴侣ShDnaJ基因克隆及在甘蔗线条花叶病毒胁迫下的表达分析
6
作者 冯小艳 王文治 +4 位作者 王俊刚 沈林波 赵婷婷 冯翠莲 张树珍 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2310-2319,共10页
【目的】克隆甘蔗分子伴侣基因Sh DnaJ,并分析其在甘蔗线条花叶病毒(SCSMV)胁迫下的表达模式,为探究ShDnaJ基因在甘蔗应答SCSMV侵染过程中的功能和作用机制提供理论参考。【方法】通过同源克隆技术克隆ShDnaJ基因完整开放阅读框(ORF)序... 【目的】克隆甘蔗分子伴侣基因Sh DnaJ,并分析其在甘蔗线条花叶病毒(SCSMV)胁迫下的表达模式,为探究ShDnaJ基因在甘蔗应答SCSMV侵染过程中的功能和作用机制提供理论参考。【方法】通过同源克隆技术克隆ShDnaJ基因完整开放阅读框(ORF)序列,利用生物信息学软件对其进行分析,再利用绿色荧光蛋白(GFP)融合表达法分析ShDnaJ蛋白的亚细胞定位,采用实时荧光定量PCR检测ShDnaJ基因在甘蔗不同组织及在SCSMV胁迫下的表达水平。【结果】ShDnaJ基因ORF全长1260 bp,编码419个氨基酸残基,蛋白分子量为45682.47 Da,理论等电点(pI)为8.78,属于稳定的亲水蛋白,含有DnaJ结构域,属于DnaJ超家族成员,定位于内质网。ShDnaJ蛋白的二级结构由113个α-螺旋、31个β-转角、78个延伸链和197个无规则卷曲组成。ShDnaJ蛋白与高粱SbDnaJ蛋白的氨基酸序列相似性最高,为96.93%,说明两者亲缘关系最近。ShDnaJ基因在甘蔗根、茎和叶中均有表达,且根和茎中的相对表达量显著高于叶中(P<0.05,下同),但未成熟茎Sh DnaJ基因的相对表达量高于成熟茎;成熟叶ShDnaJ基因的相对表达量高于未成熟叶。随着处理时间的推移,SCSMV胁迫组和对照组(磷酸缓冲液处理)中ShDnaJ基因的相对表达量整体呈下降趋势,但SCSMV接种后不同时间点ShDnaJ基因的相对表达量均显著高于对照组。【结论】ShDnaJ基因具有组织表达特异性,且组织的成熟程度会影响其表达水平。SCSMV胁迫下该基因表达上调,推测该基因参与调控甘蔗植株对SCSMV的抗性。 展开更多
关键词 甘蔗 分子伴侣DnaJ 基因克隆 甘蔗线条花叶病毒(SCSMV) 表达分析
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基于基因组序列分析的烟草轻绿花叶病毒江苏辣椒分离物侵染性克隆构建 被引量:1
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作者 高晓晓 涂丽琴 +6 位作者 杨柳 刘亚楠 高丹娜 孙枫 李硕 章松柏 季英华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1494-1502,共9页
【目的】烟草花叶病毒属(Tobamovirus)是危害辣椒、烟草等茄科作物的主要病毒之一,严重影响蔬菜作物的种植和生产。本研究旨在探明侵染江苏省南京市辣椒的烟草轻绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)分离物(TMGMV-JS)的... 【目的】烟草花叶病毒属(Tobamovirus)是危害辣椒、烟草等茄科作物的主要病毒之一,严重影响蔬菜作物的种植和生产。本研究旨在探明侵染江苏省南京市辣椒的烟草轻绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)分离物(TMGMV-JS)的基因组结构特征、系统进化关系及其致病性,为TMGMV的防控提供科学依据。【方法】从江苏省南京市采集的辣椒病样,提取总RNA,利用TMGMV特异检测引物确认阳性后,设计病毒特异性全长引物扩增TMGMV-JS全基因序列,通过同源重组的方法克隆至pCB301植物表达载体上,获得TMGMV-JS分离物基因组序列和全长cDNA侵染性克隆。BLAST分析TMGMV-JS分离物与已报道分离物的同源性,利用MEGA7软件的邻接法进行系统进化分析。将侵染性克隆通过农杆菌浸润本氏烟和辣椒,经RT-PCR和Western blot检测验证侵染效果,测定TMGMV-JS分离物的致病性。【结果】侵染江苏省南京市辣椒的TMGMV全长序列为6356 nt,编码4个功能蛋白,分别为126K复制相关蛋白、183K复制酶、运动蛋白MP和外壳蛋白CP。同源性分析结果显示TMGMV-JS与重庆分离物TMGMV-TN29(MF139550)同源性最高,厦门分离物(JX534224)次之,系统进化分析结果也显示TMGMV-JS与其他TMGMV聚于同一大分支,其中与重庆、厦门两个分离物在同一小分支,相对近缘。构建的pCB301-TMGMV-JS侵染性克隆载体可以系统侵染本氏烟,引起叶片黄化,植株系统性坏死;也可以系统侵染辣椒,引起叶片斑驳、卷曲和植株矮化等症状。【结论】侵染江苏省南京市辣椒的TMGMV-JS分离物基因组全长6356 nt,与国内重庆、厦门TMGMV分离物具有较近的亲缘关系,同属于一个分支;构建的TMGMV-JS侵染性克隆可以系统侵染本氏烟和辣椒,在本氏烟上会导致系统性坏死。 展开更多
关键词 烟草轻绿花叶病毒 分子特征 侵染性克隆 致病性分析
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鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建 被引量:6
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作者 崔红玉 王云峰 +6 位作者 石星明 童光志 兰德松 何来 仇华吉 刘长军 王玫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期569-575,共7页
为构建全基因组鸡马立克氏病病毒814株感染性细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC),首先通过构建表达Eco-gpt(xanthine-guanine phosphoribosyl transferase,XGPRT,gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1-3 kb)和... 为构建全基因组鸡马立克氏病病毒814株感染性细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC),首先通过构建表达Eco-gpt(xanthine-guanine phosphoribosyl transferase,XGPRT,gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1-3 kb)和带有细菌人工染色体的基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11,将重组病毒转移载体与鸡马立克氏病病毒细胞总DNA共转染鸡胚成纤维细胞,在选择培养基中经过8轮加压筛选,获得并纯化重组病毒;将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆菌,筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒,提取BAC-DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果表明,MDV-BAC2 DNA再次启动病毒感染,拯救了重组鸡马立克氏病病毒。成功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细菌人工染色体,为方便利用现代RED/ET基因重组系统对病毒进行反向遗传操作提供了技术平台;同时为研究鸡马立克氏病病毒的基因功能和开发新型马立克氏病疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病病毒 细菌人工染色体 分子克隆化病毒 感染性分子克隆
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酵母双杂交技术筛选克隆HCV核心蛋白结合蛋白基因1 被引量:66
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作者 李克 王琳 +12 位作者 成军 张玲霞 段惠娟 陆荫英 杨继珍 刘妍 洪源 夏小兵 王刚 董菁 李莉 钟彦伟 陈菊梅 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第12期1379-1383,共5页
目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法应用酵母双杂交系统3.构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出30个阳性克隆,对既... 目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法应用酵母双杂交系统3.构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出30个阳性克隆,对既能在4缺营养缺陷培养基上生长(SD/-Trp-Leu-Ade-His)又能在涂有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养平皿上长出蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后进行测序,进行生物信息学分析.将HCV核心蛋白基因分为大、中、小三段,与所克隆的未知功能基因回交,以证实其相互作用的部位。结果分析的结果显示,其中1号克隆的测序结果与GenBank中的1个未知功能序列有99%的同源性,初步证明了此基因与HCV核心蛋白有结合活性(GenBank号:AY032593).HCV核心蛋白的全长、2/3,1/3三段,回交显示三段均能在酵母中与此未知基因具有结合作用。结论 HCV核心蛋白结合蛋白肝细胞基因克隆成功,核心蛋白与此未知基因的作用部位应是氨基端.此项研究结果,为以后研究此基因在HCV致病机制以及在肝细胞中的生理功能提供了线索。 展开更多
关键词 C型肝炎样病毒属 遗传学 病毒蛋白质类 遗传学 病毒基因 分子克隆 遗传学技术
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中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆 被引量:8
10
作者 胡建和 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 韩雪清 刘在新 张永国 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期490-493,共4页
应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2... 应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM 5Zf(+)载体后,得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 4和pGEM 5Zf(+)/F5 7,再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM 5Zf(+)载体,构建出了CSFVC 株全长cDNA重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。 展开更多
关键词 中国 猪瘟 C-株 脾淋毒 CDNA 分子克隆 兔脾组织 RNA 克隆 多片段一步连接法
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鳜鱼传染性脾肾坏死病毒基因组文库和物理图谱的建立 被引量:8
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作者 邓敏 何建国 +2 位作者 翁少萍 曾征 龙綮新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期273-276,共4页
A gene library of the infectious spleen and kidney necrosis virus(ISKNV) from mandarinfish,Siniperca chuatsi(Basilewsky) genome was established ISKNV DNA was cleaved with EcoRI,BamHI,HindⅢ,KpnI and PstI and the resul... A gene library of the infectious spleen and kidney necrosis virus(ISKNV) from mandarinfish,Siniperca chuatsi(Basilewsky) genome was established ISKNV DNA was cleaved with EcoRI,BamHI,HindⅢ,KpnI and PstI and the resulting fragments were inserted into the corresponding sites of the pBluescript Ⅱ KS plasmid vector using T4 DNA ligase Bacterial colonies harboring recombinant plasmids were selected All cloned fragments were individually identified by digestion of the recombinant plasmid DNA with different restriction enzymes and screened by hybridization of recombinant plasmid DNA to viral DNA Using these recombinant plasmids,the physical maps of the genome were constructed for BamHI,HindⅢ and KpnI restriction 展开更多
关键词 鳜鱼 传染性脾肾坏死病毒 基因组文库 物理图谱
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鸭瘟病毒gC基因的克隆及其分子特性分析 被引量:5
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作者 徐超 李欣然 +7 位作者 信洪一 练蓓 程安春 汪铭书 朱德康 贾仁勇 罗启慧 陈孝跃 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1038-1044,共7页
对已构建的鸭瘟病毒(DPV)DNA文库重组质粒测序后,运用ORF Finder、BLASTN等工具进行全面生物信息学分析,根据分析结果设计引物,以DPV DNA为模板进行PCR扩增和T克隆,获得完整基因,经测序和探针核酸斑点杂交进行验证。结果证实,获得的完整... 对已构建的鸭瘟病毒(DPV)DNA文库重组质粒测序后,运用ORF Finder、BLASTN等工具进行全面生物信息学分析,根据分析结果设计引物,以DPV DNA为模板进行PCR扩增和T克隆,获得完整基因,经测序和探针核酸斑点杂交进行验证。结果证实,获得的完整ORF片段(ORF1296)为DPV的gC基因(GenBank登录号EU076811),全长1 296 bp,与已报道的其他疱疹病毒gC基因具有较高的同源性,它编码432个氨基酸,蛋白分子质量为45 ku、等电点(PI)为5.292,具有疱疹病毒典型I型膜蛋白结构特征。gC基因进化树分析表明,DPV与α-疱疹病毒亚科的鸟源疱疹病毒亲缘关系最近,编码的gC蛋白多为柔性区域,富含无规卷曲,含少量α-螺旋和β-折叠,氨基酸序列的第21~24、50~58、67~70、161~171、273~281、387~393位最有可能为抗原表位。此结果为进一步开展DPV gC基因及其编码蛋白的深入研究提供了有用数据。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 GC基因 克隆 分子特性
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鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原基因的分子克隆与基因分型 被引量:7
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作者 江国托 刘思国 +3 位作者 步志高 祁贤 康丽娟 卢景良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期57-60,共4页
从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株,经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定,对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原... 从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株,经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定,对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原S1基因进行了分子克隆及基因分型;RT-PCR扩增病毒S1基因,将S1基因5′和3′端分别进行分子修饰之后插入克隆载体pUC18的BamHⅠ/HindⅢ位点,在Ecoli中实现了目的基因的克隆;利用英国病毒株S1全基因核酸探针与流行株S1基因的重组克隆质粒分子杂交及目的基因5′端高变区核苷酸序列分析鉴定后,采用HaeⅢ、PVUⅡ和XbaⅠ等限制性核酸内切酶酶切分析不同流行株S1基因cDNA。结果表明,我国流行的鸡传染性支气管炎病毒分为6个主要的基因型;试验发现除与M41和澳大利亚T株相近基因型毒株之外,我国流行的毒株存在明显的分子水平的变异,这与病毒血清型鉴定的结果一致,鸡传染性支气管炎病毒中国流行毒株免疫原基因S1的分子克隆及基因分型为该病毒分子流行病学及病毒遗传变异的主要分子基础的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡病 传染性支气管炎 分子克隆 基因分 IB病毒
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PCV2感染性分子克隆的制备及体内外感染性试验 被引量:5
14
作者 韩凌霞 刘建华 +3 位作者 陈艳 仇华吉 王云峰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期241-247,270,共8页
将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋... 将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋巴结注射40日龄仔猪2头,分别接种2、3次,接种剂量500μg/次,首次注射35d心脏放血致死。在体内感染性试验期间,动物未出现明显临床症状。试验结束,病理切片结果显示,不同淋巴组织中分别存在淋巴细胞缺失或增多的现象;肾小球、扁桃体、空肠淋巴结和股前淋巴结等冰冻组织切片中存在大量PCV2病毒抗原;血清中PCV2特异性的ELISA抗体效价达12∶560,IFA效价为11∶280;通过聚合酶链式反应(PCR)可以分别从体外感染PK15细胞和体内感染动物及同圈饲养的空白对照猪的淋巴组织中扩增到病毒特异性基因片段。本研究证明含有单拷贝PCV2的重组质粒pMDT-PCV在体内、外均具有感染性,能衍生出病毒,并产生符合自然感染PCV2的大体病变和组织病理学变化,并激发较强的体液免疫应答。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 病毒分子克隆 感染性 抗体试验
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新疆加工番茄上番茄花叶病毒的分子鉴定 被引量:14
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作者 姜玉霞 向本春 +2 位作者 安仙丽 黄家风 汪铖华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第3期484-489,共6页
从表现花叶、畸形的加工番茄病株上获得分离物xj124,用1对ToMVCP基因引物进行RT-PCR,扩增得到了689bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物插入到克隆载体pMD18-T中再转化到大肠杆菌TOP10。经限制酶酶切鉴定,重组克隆中含有与PCR产物大小... 从表现花叶、畸形的加工番茄病株上获得分离物xj124,用1对ToMVCP基因引物进行RT-PCR,扩增得到了689bp的特异性核苷酸片段。将PCR产物插入到克隆载体pMD18-T中再转化到大肠杆菌TOP10。经限制酶酶切鉴定,重组克隆中含有与PCR产物大小相同的689bp的插入片段。cDNA全序列分析表明,所扩增出的689bpToMVCP基因,含1个480bp开放阅读框架(ORV),编码160氨基酸组成的蛋白,所克隆的基因包含完整的ToMVCP基因。所测得的xj124分离物与国内外已报道的部分ToMV CP基因序列比较。核苷酸同源性高达84.4%-99.8%,氨基酸同源性高达98.7%-100%。因此将该分离物鉴定为番茄病毒病花叶病毒。 展开更多
关键词 番茄花叶病毒 分子鉴定 克隆外壳蛋白基因 序列分析
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棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因克隆及在大肠杆菌中表达 被引量:11
16
作者 刘相国 杨恭 +1 位作者 邱并生 田波 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期379-383,共5页
用PCR技术从棉铃虫颗粒体病毒基因组中扩增得到增效蛋白基因DNA序列。PCR产物酶切后克隆至 pBluescript质粒中 ,核苷酸序列测定表明 ,有 8个核苷酸、5个氨基酸与Genbank发表的序列不同。继而构建了表达质粒 pET 30a En ,诱导后经SDS PAG... 用PCR技术从棉铃虫颗粒体病毒基因组中扩增得到增效蛋白基因DNA序列。PCR产物酶切后克隆至 pBluescript质粒中 ,核苷酸序列测定表明 ,有 8个核苷酸、5个氨基酸与Genbank发表的序列不同。继而构建了表达质粒 pET 30a En ,诱导后经SDS PAGE和West ernblot检测 ,表明获得了增效蛋白基因在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中包涵体形式的特异表达。生物测定结果表明 ,初步纯化的重组增效蛋白具有明显的增效活性 ,可提高棉铃虫核多角体病毒对 3龄幼虫致死率 31 7% - 34 1 %。重组增效蛋白的获得对研究其增效机理及构建新型杀虫剂提供了条件。 展开更多
关键词 棉铃虫颗粒体病毒 增效蛋白 基因克隆 大肠杆菌
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马传染性贫血病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建 被引量:6
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作者 王柳 童光志 +3 位作者 仇华吉 谷守林 涂亚斌 杨志彪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1560-1565,共6页
采用PCR方法分 3段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株 (EIAVDLA)的前病毒DNA ,这 3个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组 ,PCR产物经克隆后顺次连接 ,获得 1个含有EIAV全基因 (8.0kb)的重组质粒 ,将其命名为p8.0。将此 8.0kb... 采用PCR方法分 3段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株 (EIAVDLA)的前病毒DNA ,这 3个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组 ,PCR产物经克隆后顺次连接 ,获得 1个含有EIAV全基因 (8.0kb)的重组质粒 ,将其命名为p8.0。将此 8.0kbEIAV全基因再亚克隆到含有一完整EIAVDLA株长末端重复序列的质粒中 ,获得一含有EIAV驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒 ,将其命名为p8.2 ,经核苷酸序列分析 ,证明p8.2含有EIAV前病毒的全基因。用p8.2转染驴白细胞 ,将其作为种毒进行传代 ,于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶活性 ,说明在驴白细胞中由p8.2衍生出了EIA病毒。驴白细胞经该克隆毒感染后 ,第 4天出现病变 ,经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子 ,进一步证明p8.2具有感染性 ,笔者获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆 。 展开更多
关键词 传染性贫血病毒 弱毒疫苗株 感染性 分子克隆 基因构建
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口蹄疫病毒反向遗传学研究进展 被引量:6
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作者 白兴文 李平花 +2 位作者 刘在新 刘湘涛 谢庆阁 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期106-112,共7页
反向遗传学操作技术在口蹄疫病毒(FMDV)病原学基础研究领域的应用,使得人们能够在基因组整体水平上研究病毒基因的功能。得益于反向遗传学系统的不断完善和发展,目前人们对FMDV分子病原学也有了更加深入的认识和理解。本文结合实验室在F... 反向遗传学操作技术在口蹄疫病毒(FMDV)病原学基础研究领域的应用,使得人们能够在基因组整体水平上研究病毒基因的功能。得益于反向遗传学系统的不断完善和发展,目前人们对FMDV分子病原学也有了更加深入的认识和理解。本文结合实验室在FMDV反向遗传学方向上所开展的探索性研究工作,综述了国内外利用反向遗传学操作技术在研究FMDV分子致病机制、病毒毒力与变异的关系、病毒复制的影响因素、新型FMD基因疫苗的研制等领域所取得的进展,展望FMDV反向遗传学研究新动向。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 反向遗传学 感染性分子克隆
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一对父亲与胎儿所携乙型肝炎病毒前S基因的序列分析 被引量:11
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作者 彭桂福 王珊珊 +2 位作者 姜普林 曾年华 王志斌 《现代预防医学》 CAS 2000年第3期277-279,共3页
目的 :筛选一位父亲 HBs Ag、 HBe Ag、抗 HBc均阳性的慢性携带者和母亲无任何乙型肝炎病毒 (HBV)标志的子宫内受染胎儿为研究对象 ,分析父、儿所携 HBV前 S基因的基因序列 ,探讨 HBV男性垂直传播的存在。方法 :应用半套式 PCR检测父亲... 目的 :筛选一位父亲 HBs Ag、 HBe Ag、抗 HBc均阳性的慢性携带者和母亲无任何乙型肝炎病毒 (HBV)标志的子宫内受染胎儿为研究对象 ,分析父、儿所携 HBV前 S基因的基因序列 ,探讨 HBV男性垂直传播的存在。方法 :应用半套式 PCR检测父亲、胎儿的 Pre S1 / S2 基因 ,将扩增的片段克隆到 PGEM— T载体进行克隆测序 ,并与文献中的中国人参照株序列相比较。结果 :父、儿血清中均扩增出前 S基因 ,测序结果表明二者的基因同源性达 99%以上 ,且均有 183bp的 Pre S1基因缺失 ,而与中国人参照株序列的同源性为 89%。结论 :父、儿前 S序列的高度一致性表明 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前S基因 分子克隆 序列分析 胎儿 父亲
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犬细小病毒VP2基因的克隆与生物信息学分析 被引量:5
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作者 叶新慧 申魁魁 +6 位作者 符欣蕙 王丽霞 李恭贺 张明 卢晟盛 卢克焕 郑喜邦 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期554-558,共5页
本研究旨在克隆犬细小病毒VP2(Canine parvovirus VP2,CPV-VP2)基因,构建克隆载体pMD18-T-VP2,分析其生物信息学特征。以犬细小病毒(CPV)阳性病犬血液基因组病毒DNA为模板,PCR扩增CPV-VP2基因,通过TA克隆获得pMD18-T-VP2重组质粒,测序... 本研究旨在克隆犬细小病毒VP2(Canine parvovirus VP2,CPV-VP2)基因,构建克隆载体pMD18-T-VP2,分析其生物信息学特征。以犬细小病毒(CPV)阳性病犬血液基因组病毒DNA为模板,PCR扩增CPV-VP2基因,通过TA克隆获得pMD18-T-VP2重组质粒,测序后对其进行生物信息学分析。结果表明:(1)CPV-VP2完整的开放阅读框由1755个核苷酸组成,共编码585个氨基酸残基,其序列同源性与浣熊最高,达97.6%;(2)信号肽在线预测认为,CPV-VP2基因无信号肽;(3)CPV-VP2大多数氨基酸偏好以T、A结尾的密码子;(4)CPV-VP2蛋白可能存在7个糖基化位点,其丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸分别存在8个、10个和7个磷酸化位点;(5)CPV-VP2可能存在76个B细胞抗原表位;(6)CPV-VP2蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构;(7)CPV-VP2蛋白二级结构的α-螺旋区域占9.93%、β-折叠区域占24.49%、无规则卷曲区域占65.58%;(8)CPV-VP2蛋白三级结构存在多个螺旋和折叠区域,主要以无规则卷曲为主。本研究为制定CPV-VP2基因原核或真核高效表达策略提供了参考资料,并为进一步制备CPV胶体金快速诊断试纸条和基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2基因 分子克隆 生物信息学分析
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