免疫磁性捕获反转录-聚合酶链反应法检测Norwalk病毒

Norwalk病毒(NV)是人杯状病毒的原型,每年可引起2000多万急性胃肠炎病例,是美国暴发性胃肠炎的主要病因。本文建立了一种快速检测NV的免疫磁性捕获反转录-聚合酶链反应(IMC/RT-PCR)方法。

RT-LAMP快速检测Norwalk病毒GⅡ型

建立一种检测Norwalk病毒GⅡ型快速、敏感的一步逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription-loop-me-diated isothermal amplification,RT-LAMP)方法。针对Norwalk病毒RNA聚合酶基因特异性序列的6个区域设计4条LAMP引物,65℃保温约120 min,完成对Norwalk病毒GⅡ的扩增,扩增产物通过肉眼观察、SYBR GreenI染色、凝胶电泳及酶切消化进行鉴定。利用RT-LAMP和RT-PCR方法同时检测48份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本来验证RT-LAMP方法的特异性;将Norwalk病毒GⅡ RNA一系列稀释后用RT-LAMP和RT-PCR方法进行检测来比较两者敏感性。46份Norwalk病毒GⅡ粪便标本出现LAMP扩增反应:通过肉眼观察、SYBR Green Ⅰ染色和凝胶电泳均能观察到LAMP扩增产物的存在,LAMP产物的特异性通过酶切消化加以证实;2份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本未出现RT-LAMP扩增。RT-LAMP与RT-PCR特异性符合率为100%,RT-LAMP和RT-PCR检测Norwalk病毒GⅡ的检测下限均为15.6pg/管。与RT-PCR相比较,一步RT-LAMP法检测粪便中Norwalk病毒GⅡ的方法是一种快速、敏感、特异且准确的方法,有望用于快速检测感染性腹泻暴发时粪便中的Norwalk病毒GⅡ。

2002年5月在阿富汗英军中与Norwalk样病毒相关的急性胃肠炎暴发调查情况

美国Norwalk样病毒(NLVs)导致的散发病例估计每年达2300万,其中5万例住院,死亡300例。NLVs可通过被粪便污染的食物和水传播,也可通过人与人直接接触或感染人的飞沫传播。NLVs相关胃肠疾病的暴发是军营中的常事。2002年5月13日至19日,阿富汗野战医院有29名英国士兵经短暂潜伏期后急性发病,出现呕吐、腹泻和发热症状。本文摘要报道了此次调查情况,并强调提高NLVs诊断能力十分重要。

地中海型餐厅相关性胃肠炎与诺沃克样病毒

本文对多变感染原，Norwalk样病毒(NLV)与三次连续的(餐厅相关)的胃肠炎暴发的重要性进行评价。作者采用标准细菌学试验方法、大肠杆菌特异试验、vero毒素试验，电镜(EM)观察病毒及反转录PCR(RT—PCR)方法研究NLV。经以上方法无病原菌检出。在第一次暴发时，虽然以PCR检出vero毒素基因，但在大肠杆菌分离株中不能确定，故无意义。NLV是三次暴发中多次检测的重要对象。RT—PCR扩增产物阳性样的DNA序列和系统发育分析表明，仅NLV株与多次暴发相关，但NLV株对三次暴发的作用各不相同。PCR检测NLV敏感性高，但用EM都不能检出一例阳性样，与餐厅相关的暴发属地中海型餐厅，在这类餐厅，通常碟子中的食物直接用手指食用。试验分析表明，NLV是由客人或餐厅员工带人，而非因长期安置的贮水池引起。