Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法:运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果:survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论:Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。

早产儿血液中Notch 3的变化对支气管肺发育不良早期诊断价值的研究

目的探讨早产儿血液中Notch 3的变化对支气管肺发育不良(BPD)的早期诊断价值。方法回顾性分析佛山市妇幼保健院2016年1月~2017年2月接收的胎龄27~32周,存活28 d以上的患儿78例,其中患有BPD 23例,非BPD患儿55例,将BPD患儿组设定为观察组,将同期在新生儿科诊治的、与BPD组患者胎龄性别相匹配、未诊断BPD的患儿设为对照组。测定两组患儿体内Notch 3表达情况。结果观察组患儿在第7、14、21天体内Notch 3值逐渐增加,且显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BPD的发病过程中存在Notch 3高表达,Notch 3值对BPD有较高的早期诊断价值。

Notch3/DLL4信号通路对颈部淋巴水囊瘤后淋巴管发育的影响

目的:探究Notch3/DLL4信号通路对颈部淋巴水囊瘤(CH)后淋巴管成熟发育的影响。方法:选取C57BL/6小鼠和C57BL/6背景Notch3基因敲入小鼠,将两种小鼠分为正常组(对照组)和Notch3基因敲入组(突变组)。选取F2代小鼠处死,取小鼠颈部淋巴结分别进行HE染色、Masson染色、RT-qPCR、Western blot、免疫组化检测。结果:HE及Masson染色结果显示,与对照组比,突变组小鼠的淋巴结构被显著破坏,细胞纤维化严重。RT-qPCR结果显示,与对照组比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1和VEGFR3 mRNA表达显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1和VEGFR3蛋白表达显著下降(P<0.05)。免疫组化结果显示,与对照组相比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1、Ang2、VEGFA和VEGFR3染色较浅,蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:Notch3/DLL4信号通路能够调控小鼠颈部CH的形成,其机制可能与淋巴管发育有关。

NOTCH3基因C260S位点突变导致CADASIL的临床和影像学特征分析

目的探讨NOTCH3基因第5外显子C260S位点突变导致的伴有皮层下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)家系的临床和影像学特征。方法选取2021年12月首都医科大学附属北京同仁医院来自同一家庭的CADASIL患者,对所有患者进行NOTCH3基因测序,回顾性分析患者的临床表现和头颅影像学特征。复习既往文献报道的导致同一位置氨基酸改变的其他突变类型的临床及影像学特征。结果4名家庭成员中,包括先证者(46岁,女)及其两个姐姐(分别为48岁和50岁)和女儿(18岁)。先证者及其父亲、两个姐姐都有偏头痛病史,其中大姐有记忆力减退;先证者患有脑梗死及伴有视觉先兆的偏头痛;先证者女儿体健;先证者父亲因脑梗死去世。4名家庭成员均存在C260S位点的NOTCH3基因突变。既往文献无此位点突变的报道,先证者头颅MRI示右侧脑桥亚急性梗死,颞叶、脑室周围及脑干异常高信号改变,其大姐脑桥可见腔隙性梗死灶。结论NOTCH3基因第5外显子c.778T>A(p.C260S)的罕见突变导致的CADASIL发病时间早,早期会出现认知障碍。合并偏头痛的脑干梗死患者,需警惕CADASIL的可能。

牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组(10 mg/L ARC)、ARC-M组(20 mg/L ARC)、ARC-H组(40 mg/L ARC)和ARC-H+Jagged1/FC组(40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC)。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖(c-Myc、cyclin D1)、凋亡(BAX、Bcl-2、survivin)、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路(Notch 1、Hes-1、NICD)相关蛋白的表达水平。结果:与0 mg/L相比,10~80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力(均P<0.05)。与对照组相比,ARC-L组、ARC-M组和ARC-H组HSC-3细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、S期和G2/M期细胞占比及c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、survivin、vimentin、Snail、Notch 1、Hes-1和NICD蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞占比及BAX、E-cadherin的蛋白表达均显著升高(均P<0.05),且呈浓度梯度依赖性。同时使用Notch激动剂Jagged1/FC,则可部分逆转ARC对HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的作用(均P<0.05)。结论:ARC可能通过抑制Notch/Hes-1信号通路抑制OSCC细胞HSC-3增殖和侵袭并促进细胞凋亡。

血清circRNA、Notch-3联合胃蛋白酶对胃癌的诊断价值及与分期的相关性

目的探究血清环状RNA(circRNA)、神经源位点缺口同源蛋白3(Notch-3)、胃蛋白酶对胃癌的诊断价值及其与胃癌分期的相关性。方法选取2021年3月至2023年3月该院收治的150例胃癌患者和150例胃部良性病变患者分为研究组和良性组。依据胃癌分期将研究组分为Ⅰ期组(36例)、Ⅱ期组(37例)、Ⅲ期组(35例)及Ⅳ期(42例)组。检测并比较研究组和良性组circRNA、Notch-3及胃蛋白酶表达水平;分析不同胃癌分期circRNA、Notch-3及胃蛋白酶表达水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA、Notch-3、胃蛋白酶单独及联合检测对胃癌的诊断价值;采用Spearman相关进行circRNA、Notch-3、胃蛋白酶与胃癌分期的相关性分析。结果研究组circRNA、Notch-3及胃蛋白酶表达水平高于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circRNA、Notch-3及胃蛋白酶的表达水平比较,Ⅰ期组<Ⅱ期组<Ⅲ期组<Ⅳ期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,circRNA、Notch-3、胃蛋白酶单独检测胃癌的曲线下面积(AUC)分别为0.797、0.802、0.848,低于3项指标联合检测的0.901(Z=10.799、11.231、14.492,P<0.05)。circRNA、Notch-3、胃蛋白酶均与胃癌分期呈正相关(r=0.585、0.581、0.645,P<0.05)。结论circRNA、Notch-3及胃蛋白酶的表达水平在胃癌中均有所升高,且胃癌分期越高,其表达水平越高;circRNA、Notch-3及胃蛋白酶均对胃癌有一定诊断价值,其联合检测灵敏度及特异度更高,且circRNA、Notch-3及胃蛋白酶与胃癌分期呈正相关。

皮质下梗死伴白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病两家系NOTCH3基因突变分析

皮质下梗死伴白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL)是一种较少见的、以反复脑卒中发作与血管性痴呆为特征的遗传性脑小血管疾病[1]。该病多于中年起病,早期可有先兆性偏头痛、短暂性脑缺血发作等症状,随着年龄增长逐渐出现反复脑卒中发作,最终导致精神异常和血管性痴呆;头颅MRI特征包括皮层下腔隙性梗死灶、颞极、侧脑室周围和皮层下白质病变[2]。CADASIL致病基因NOTCH3位于染色体19p13.2-13.1,大部分变异为错义突变,也有少部分为缺失、插入和剪切[3]。随着分子检测技术的进步和普及,越来越多的CADASIL家系经基因检测确诊[4-5]。本文分析了两个CADASIL家系NOTCH3基因突变情况,并对其临床特点进行了总结,报道如下。

香菇多糖通过IL-6/STAT3/Notch信号通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移及化疗敏感性

目的:香菇多糖(Lentinan,LNT)已被证明对癌细胞具有直接的细胞毒性。然而,这种抗肿瘤作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨香菇多糖对胰腺癌细胞增殖、迁移及化疗敏感性的影响及其机制。方法:将胰腺癌Capan-1细胞随机分为对照组、IL-6组、IL-6+LNT组,MTT检测细胞存活率,Western blot检测p-STAT3、STAT3、Notch1和Hes1表达水平,Transwell实验检测细胞迁移。建立顺铂耐药细胞模型(Capan-1/DDP),检测各组顺铂半抑制浓度(IC50),分析Ki-67、MMP-9、MRP1和P-gp蛋白相对表达水平。选择Capan-1/DDP细胞株进行裸鼠成瘤实验,验证LNT对裸鼠体内瘤体的瘤重、IL-6/STAT3/Notch信号通路的影响。结果:7.5~240μg/m L香菇多糖对胰腺癌细胞增殖有抑制作用;与IL-6组比较,IL-6+LNT组增殖率显著降低,p-STAT3/STAT3、Notch1和Hes1表达和迁移水平(极)显著下调(P<0.05,P<0.01);与IL-6组比较,IL-6+LNT组Capan-1/DDP细胞株增殖率极显著下调,IC50极显著降低,Ki-67、MMP-9、MRP1和P-gp表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01)。体内实验显示,与IL-6组比较,顺铂+IL-6组、LNT+IL-6组瘤体体积、瘤重极显著下调,p-STAT3/STAT3、Notch1、Hes1表达水平(极)显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:LNT抑制胰腺癌Capan-1细胞增殖、迁移和耐药,与调控IL-6/STAT3/Notch信号通路相关。

IL-6调控STAT3/Notch信号通路促进胰腺癌细胞增殖 迁移及化疗抵抗的机制研究

目的观察白细胞介素(IL-6)对胰腺癌细胞的影响,并分析其机制。方法选取对数生长期胰腺癌细胞,随机分组:对照组,正常培养;IL-6组:IL-6终浓度为50 ng·ml^(-1)的培养基培养;IL-6+JSI-124组:含50 ng·ml^(-1) IL-6和0.1μmol·L^(-1) JSI-124(STAT3磷酸化特异性抑制剂)的培养基培养;IL-6+DAPT组:含50 ng·ml^(-1) IL-6和50μmol·L^(-1) DAPT(Notch通路抑制剂)的培养基培养。Western blot检测p-STAT3/STAT3、Notch1、Hes1蛋白表达,transwell实验检查细胞迁移。建立顺铂耐药细胞模型,分析Ki-67、MMP-9和P-gp蛋白水平。裸鼠成瘤实验验证IL-6对瘤体STAT3/Notch信号通路的影响。结果与IL-6组比较,IL-6+JSI-124组和IL-6+DAPT组p-STAT3/STAT3、Notch1、Hes1表达水平下调,增值率降低,迁移水平下调(P<0.05);与IL-6组比较,IL-6+JSI-124组和IL-6+DAPT组增殖率下调,IC 50降低,Ki-67、MMP-9和P-gp表达下调(P<0.05)。与顺铂组抑瘤率[(67.12±2.32)%]比较,IL-6+顺铂组抑瘤率[(21.71±1.37)%]明显下调(P<0.01),p-STAT3/STAT3、Notch1、Hes1表达上调(P<0.05)。结论IL-6调节STAT3/Notch通路促进胰腺癌sw1990细胞增殖、迁移和耐药。

伴高血压及脑出血的常染色体显性遗传脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病合并NOTCH3基因新突变的临床特点分析(附1家系报告)

目的探讨伴高血压及脑出血的常染色体显性遗传脑动脉病伴皮质下梗死和白质脑病(CADASIL)合并NOTCH3基因位点新突变的临床特点。方法回顾性分析2021年8月就诊于山东大学齐鲁医院神经内科1例CADASIL患者的病例资料、家系情况及致病基因,并检索国内外相关文献进行探讨。结果先证者以反复发生脑出血、进行性记忆力和计算力下降及认知功能障碍为主要临床表现,家系调查发现该家系4代10人中4人有轻重不等的CADASIL症状。先证者头颅MRI+MRA+SWI示右侧枕叶及邻近胼胝体亚急性血肿、脑内多发出血灶、脑白质高信号、左侧脑室增大,基因检测提示NOTCH3基因存在一处杂合变异(c.517dupAchr19:15302932p.T173Nfs*23)。结论CADASIL不仅可表现为缺血性脑卒中,而且可合并高血压及脑出血。根据临床表现、影像学检查和基因检测结果,先证者符合CADASIL的诊断,该家系携带的NOTCH3基因的突变位点c.517dupAchr19:15302932p.T173Nfs*23可能为其家系发病的病因。

Notch3信号通路在新生儿支气管疾病中的分子机制研究进展

支气管疾病是新生儿的常见病,包括支气管肺发育不良、毛细支气管炎、支气管哮喘等。支气管疾病可引起咳嗽、气喘、反复呼吸道感染,影响患儿的身心健康,严重者可导致患儿死亡,亦是新生儿重症监护病房最为棘手的问题之一。Notch是一种较为保守的信号转导通路,具有广泛的生物学效应,与特定的人类疾病有关。Notch3信号通路是Notch的一个亚型,与肺发育、高压氧肺损伤、免疫应答、气道重构等关系密切,可能参与支气管疾病的进展,未来有望成为治疗新生儿支气管疾病的靶点。

三七总皂苷对低氧状态下大鼠PASMCs增殖、凋亡及Notch3通路的影响

目的:探讨在低氧(hypoxia, Hypo)条件下三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)增殖和凋亡及其Notch3通路的影响。方法:以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 h后将细胞分为6组:正常对照(control, Con)组、Hypo组、Hypo+PNS组、Hypo+DAPT{N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester;Notch3通路抑制剂}组、Hypo+过表达Notch3(Hypo+Notch3)组和Hypo+Notch3+PNS组。Con组置于常氧环境(21%O_(2)、5%CO_(2)、74%N_(2))下培养48 h,其余5组预先进行相对应的干预后置于低氧条件(5%O_(2)、6%CO_(2)、89%N_(2))下培养48 h。造模结束后用细胞计数试剂盒8(Cell Counting Kit-8, CCK-8)测各组细胞活力;EdU染色法检测细胞增殖;TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-qPCR法检测PASMCs中Notch3、Hes-1、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和caspase-3的mRNA表达水平;Western blot检测PASMCs中Notch3、Hes-1、PCNA和caspase-3的蛋白表达水平;通过在细胞中过表达Notch3,探讨PNS是否通过Notch3影响PASMCs的增殖。结果:EdU和TUNEL结果表明,与Con组相比,Hypo组PASMCs增殖能力增强,且细胞凋亡显著减少(P<0.01),Notch3、Hes-1和PCNA的mRNA和蛋白表达水平显著升高,而caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);给予PNS干预后,Notch3、Hes-1和PCNA的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);给予Notch3通路抑制剂DAPT干预后,Notch3、Hes-1和PCNA的mRNA蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。进一步结果显示,在PASMCs中过表达Notch3可逆转PNS对Hypo诱导的PASMCs增殖的抑制作用(P<0.05)。结论:PNS可通过降低Notch3表达,抑制Hypo诱导的大鼠PASMCs增殖并促进PASMCs凋亡。

Notch3、LGR5及NF-κB在大肠腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨大肠腺癌中Notch3、富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(LGR5)及核转录因子κB(NF-κB)的表达及其临床意义。方法 选取2013年1月—2015年10月遵义医科大学附属医院大肠腺癌标本(腺癌组)54例、腺瘤(腺瘤组)30例、正常大肠黏膜组织(正常组)12例,采用免疫组化法,对各组织中的Notch3,LGR5,NF-κB的表达进行检测。结果 在正常大肠黏膜组、腺瘤组及腺癌组中,Notch3、LGR5、NF-κB的阳性率均呈逐渐递增趋势,Notch3、LGR5和NF-κB在大肠腺癌组织中的阳性率分别为63%(34/54)、57.4%(31/54)、63%(34/54),分别显著高于其在正常组的阳性率(8.3%、16.7%、25%)(P<0.05)和腺瘤组的阳性率(26.7%、36.7%、30%)。腺瘤组的阳性率与正常组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。上述指标的表达与大肠癌患者年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤分化程度及肿瘤直径等均不相关(P>0.05);但均与淋巴结转移和Dukes分期有关(P<0.05)。Notch3及NF-κB的表达还与肿瘤浸润深度有关(P<0.05);Notch3在大肠腺癌中的表达与LGR5呈正相关(r=0.325,P<0.05)。结论 Notch3、LGR5、NF-κB可能参与了大肠腺癌的发生、发展过程,有望成为新的肿瘤标志物,作为大肠癌的早期诊断及预后评价指标。

电针通过调节Notch3信号通路改善大脑中动脉闭塞小鼠海马神经元凋亡的作用机制

目的:探讨电针通过调节Notch3信号通路改善大脑中动脉闭塞小鼠海马神经元凋亡的作用机制。方法:将45只健康无特定病原体(SPF)级雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、大脑中动脉闭塞模型(MCAO)组和电针治疗组,各15只。通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和小鼠神经行为评分比较小鼠脑梗死神经损伤情况。采用免疫组织化学分析小鼠海马神经元Bax和Caspase-3蛋白表达。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)荧光染色分析小鼠神经元细胞凋亡率;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析小鼠海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达;通过免疫组织化学分析小鼠海马神经元细胞凋亡;通过蛋白印迹分析小鼠海马组织Bax、Bcl-2、Caspase-3及H19/EZH2/Notch3蛋白表达。通过免疫荧光染色分析小鼠脊髓组织Nestin和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。结果:连续干预14 d后,MCAO组小鼠神经损伤和脑梗死体积较对照组增加(P<0.05),电针治疗组小鼠神经损伤和脑梗死体积较MCAO组减小(P<0.05)。MCAO组神经细胞凋亡率较对照组升高(P<0.05),电针治疗组神经元细胞凋亡率较MCAO组减少(P<0.05);MCAO组TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表达较对照组升高(P<0.05),电针治疗组TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表达较MCAO组降低(P<0.05)。MCAO组Bax和Caspase-3蛋白表达较对照组升高(P<0.05),电针治疗组Bax和Caspase-3蛋白表达较MCAO组降低(P<0.05),MCAO组Bcl-2蛋白表达较对照组降低(P<0.05),电针治疗组Bcl-2蛋白表达较MCAO组升高(P<0.05)。MCAO组H19、EZH2和Notch3蛋白表达较对照组升高(P<0.05),电针治疗组H19、EZH2和Notch3蛋白表达较MCAO组降低(P<0.05)。MCAO组Nestin蛋白表达较对照组降低(P<0.05),GFAP蛋白表达较对照组升高(P<0.05);电针治疗组Nestin蛋白表达较MCAO组升高(P<0.05),GFAP蛋白表达较MCAO组降低(P<0.05)。结论:MCAO可诱导海马神经元凋亡,电针通过调控Notch3激活,调节Bax/Bcl-2及Nestin和GFAP蛋白,从而阻断Caspase-3激活,抑制神经元凋亡。

沉默Notch3表达对前列腺癌细胞侵袭能力的影响及机制

目的探讨靶向沉默Notch3表达对前列腺癌PC-3细胞侵袭能力的影响及机制。方法体外培养前列腺癌PC-3细胞,Notch3 siRNA转染前列腺癌PC-3细胞,RT-PCR及蛋白免疫印迹试验(Western blot)验证转染效果;Transwell小室法检测转染前后细胞侵袭能力的改变;Western blot检测转染后对细胞EMT相关通路蛋白(E-cadherin、ZO-1、Vimentin)及PI3K/Akt通路相关蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt)表达的影响。结果Notch3 siRNA转染后,前列腺癌PC-3细胞mRNA和Notch3蛋白表达均显著降低,同时细胞侵袭能力降低,细胞MMP-9蛋白表达下调,上皮标志物E-cadherin、ZO-1蛋白表达上调,间质标志物Vimentin蛋白表达下调;细胞总的PI3K和Akt表达水平无明显改变,而p-PI3K和p-Akt表达水平降低。结论Notch3 siRNA转染沉默前列腺癌PC-3细胞Notch3表达后可显著抑制细胞侵袭能力,其机制可能是通过阻滞前列腺癌细胞PI3K/Akt通路,继而抑制细胞EMT,提示Notch3可能成为前列腺癌治疗的潜在靶点。

野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时对肺血管壁Jagged2/Notch3信号分子表达的影响

目的:观察野百合碱诱导大鼠肺动脉高压时肺血管壁Jagged2/Notch3信号分子表达的变化,探讨Jagged2/Notch3信号在肺动脉高压发生中的作用和意义。方法:45只SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、溶剂对照组(S组)和野百合碱模型组(M组),每组15只,通过一次性腹腔注射野百合碱50 mg/kg建立肺动脉高压模型,溶剂对照组注射相同剂量的溶媒。4周时通过HE染色观察肺血管重构,通过右心导管测定平均肺动脉压(m PAP)和右心室收缩压(RVSP)。采用免疫组化和实时荧光定量PCR等方法检测肺血管壁Jagged2/Notch3/Hes5蛋白和mRNA表达的变化。结果:与正常对照和溶剂对照组相比,4周时野百合碱模型组的血管壁显著增厚,中膜厚度百分比增加(P<0.01);此外野百合碱模型组的m PAP和RVSP显著高于正常对照和溶剂对照组(P<0.01);免疫组化和实时荧光定量PCR结果提示Jagged2主要表达于肺小动脉内膜,Notch3、Hes5主要表达于肺小动脉中层平滑肌,与溶剂对照组以及正常对照组相比,野百合碱模型组肺小动脉的Jagged2、Notch3和Hes5表达显著增高。结论:Jagged2/Notch3信号分子的激活可能在野百合碱诱导肺动脉高压发生中起重要作用。

肺癌中TSG101蛋白与Notch3受体表达的相关性

背景与目的TSG101蛋白是内吞分选通路的重要因子,该通路的异常会减少果蝇中Notch受体的降解,导致此受体信号对细胞分化、发育调节的紊乱。在哺乳动物中,Notch受体家族中的3亚型与肺组织发育及肺癌发生密切相关。本实验的目的是初步探讨在人类肺癌中,TSG101蛋白与Notch3受体之间的表达是否也存在关联。方法分别采用Western blot和免疫组化SP法检测TSG101蛋白与Notch3受体在肺癌组织、细胞系中的表达,并应用抗体封闭TSG101蛋白功能后观察Notch3受体的表达变化。结果TSG101蛋白在肺癌中比正常肺组织表达减少,而Notch3受体在肺癌中比正常肺组织表达则增多,此变化均与肺癌的分化及淋巴结转移相关。当用抗体封闭肺癌细胞系中TSG101蛋白功能时,Notch3受体检测水平呈上升变化。结论肺癌中TSG101蛋白表达下调,与Notch3受体检测水平上升有相关性。

Notch3在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

目的探讨卵巢上皮性癌组织中Notch3的表达与卵巢癌血管生成以及临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测91例卵巢肿瘤组织中Notch3的表达和CD34标记的微血管密度（MVD）,结合临床病理特征进行综合分析。结果在恶性和交界性卵巢肿瘤组织中Notch3阳性率及MVD计数均显著高于正常卵巢和良性卵巢肿瘤（均P〈0.01）。Notch3在FIGOⅢ-Ⅳ期,低分化和有腹水的卵巢癌患者中的阳性率高于FIGOⅠ-Ⅱ期,高、中分化和无腹水者（均P〈0.05）,MVD计数与患者组织学分级和有无腹水相关（均P〈0.05）,Notch3在卵巢癌组织中的表达与MVD计数之间存在相关性（rs=0.531,P〈0.01）。结论 Notch3可能参与卵巢癌的血管生成,促进卵巢癌的发生发展过程。

siRNA下调Notch3表达对非小细胞肺癌骨转移能力的影响

目的:研究Notch3在肺癌骨转移中的作用。方法:通过RT-PCR方法检测Notch3在NSCLC及其伴骨转移患者的肺癌组织中的表达情况;利用慢病毒包装Notch3 siRNA载体抑制Notch3的表达后,通过体外迁移和侵袭试验观察Notch3 siRNA对肺癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;通过体外ELISA法检测骨转移相关分子pTHrP和IL-6的表达,研究阻断Notch3的表达后是否能够逆转TGF-β诱导的肺癌骨转移。结果:Notch3在NSCLC发生骨转移的患者肺癌组织中过表达。体外试验发现,通过慢病毒包装Notch3 siRNA载体抑制Notch3的表达后,NSCLC细胞的转移能力下降,且Notch3-si可明显抑制NSCLC细胞中由TGF-β介导的pTHrP和IL-6的表达。结论:Notch3高表达在促进NSCLC骨转移中发挥重要作用。

TGF-β上调Notch3诱导上皮间质转化在促进肺癌骨转移中的作用

目的:研究TGF-β上调Notch3表达诱导EMT在肺癌骨转移中的作用。方法:免疫荧光、蛋白印记和RT-PCR方法检测Notch3在TGF-β诱导下上皮、间质标记物以及上皮间质转化相关转录因子Twist、Snail和ZEB-1的表达变化;利用慢病毒包装Notch3正义表达载体和ZEB-1 siRNA载体分别上调Notch3和抑制ZEB-1的表达后,采用免疫荧光、蛋白印记方法检测抑制EMT转录因子ZEB-1的表达后,对上皮间质标记物的影响;进而通过体外迁移和侵袭试验观察抑制ZEB-1的表达后对Notch3高表达细胞系的迁移和侵袭能力的影响;最后体外ELISA法检测骨转移相关分子p THr P和IL-6的表达,探讨Notch3通过诱导EMT在促进肺癌骨转移中的作用。结果:Notch3 siRNA抑制其表达后能够逆转TGF-β诱导的上皮标记物和间质标记物的表达变化,这一现象是通过影响EMT转录因子ZEB-1实现的。进而利用慢病毒包装系统,构建了Notch3过表达细胞株和ZEB-1 siRNA细胞株,免疫荧光和蛋白印记试验发现,Notch3过表达载体能够抑制上皮标记物的表达,上调间质标记物的表达,促进EMT的发生,而抑制ZEB-1的表达后能够逆转这一现象。最后,体外侵袭试验和ELISA试验发现,Notch3高表达能够增加肺癌细胞的侵袭能力以及p THr P和IL-6的分泌,而抑制ZEB-1的表达后可明显降低其转移能力以及p THr P和IL-6的分泌。结论:Notch3参与了TGF-β诱导肺癌细胞上皮间质转化过程,并在NSCLC骨转移中发挥作用。