低频脉冲电刺激抑制Notch/NF-κB通路活化改善脑卒中后吞咽障碍的研究

目的研究低频脉冲电刺激对脑卒中后吞咽障碍患者吞咽功能影响,以及对神经源性基因同源蛋白(Notch)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法选择2021年6月至2023年1月在河北省退役军人总医院治疗的脑卒中后吞咽障碍患者120例,其中男性58例,女性62例;年龄45~68岁,平均年龄56.82岁;病程2~8周,平均病程4.61周。随机将患者分为2组,即研究组(常规训练+脉冲电刺激)、对照组(常规训练),每组60例。两组患者均进行营养脑神经细胞、降低颅内压、控制脑水肿和改善脑组织循环等常规治疗,且均进行吞咽康复训练;研究组加用低频脉冲电刺激治疗。治疗前和治疗结束后,应用洼田饮水试验对两组患者的吞咽功能进行检测。参考《摄食、吞咽障碍康复实用技术》评价患者临床疗效。评价治疗前后美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分。检测治疗前后血液组织中Notch、Hes1、p-NF-κBp65/NF-κBp65、Bax蛋白表达。结果治疗后,两组洼田饮水试验评分均降低,研究组比对照组更低[(2.23±0.64)分vs(3.02±0.81)分。P<0.01]。治疗后,研究组总有效率高于对照组患者(93.33%vs 75.00%。P<0.05)。治疗后,两组NIHSS评分均降低,研究组比对照组更低[(10.32±1.85)分vs(7.18±2.31)分。P<0.05]。治疗后,两组患者Notch、Hes1、p-NF-κBp65/NF-κBp65、Bax蛋白表达均有降低(0.86±0.09 vs 1.42±0.12、0.74±0.11 vs 1.39±0.09、0.86±0.09 vs 1.52±0.14、0.79±0.07 vs 1.52±0.10。P<0.05),且研究组Notch、Hes1、p-NF-κBp65/NF-κBp65、Bax蛋白表达低于对照组(0.86±0.09 vs 1.12±0.10、0.74±0.11 vs 1.04±0.12、0.86±0.09 vs 1.02±0.08、0.79±0.07 vs 1.04±0.11。P<0.05)。结论低频脉冲电刺激对脑卒中后吞咽障碍患者临床症状改善明显,且可能通过Notch/NF-κB信号通路改善患者症状。

基于Notch/NF-κB/NLRP3信号通路的巨噬细胞活化与溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎是一种以腹泻、腹痛、脓血便为主要表现的肠道免疫炎症性疾病,由巨噬细胞超活化所导致的非可控性炎症是溃疡性结肠炎发病和逐渐恶化的重要原因,因此抑制巨噬细胞超活化是治疗溃疡性结肠炎的有效途径之一。Notch信号通路参与了调节巨噬细胞的免疫应答并促进炎症反应,NF-κB信号通路是参与炎症反应的“明星通路”,NLRP3炎症小体参与了巨噬细胞的活化过程,在已有的免疫炎症性疾病中Notch,NF-κB,NLRP3炎症小体三者之间构成了上下游的信号转导通路,Notch可通过NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路调节巨噬细胞的活化。

硼替佐米通过激活Notch/NF-κB通路增强Vγ9Vδ2T细胞对套细胞淋巴瘤的杀伤效应

目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib,BZM)增强Vγ9Vδ2T细胞对套细胞淋巴瘤的杀伤作用及其相关机制。方法通过帕米磷酸二钠和IL-2刺激人外周血中单个核细胞得到Vγ9Vδ2T细胞。给予BZM刺激后,溴乙啡锭二聚体-1(ethidium homodimer-1,EthD-1)染色法检测Vγ9Vδ2T细胞对Maver细胞的杀伤效应;CD107a标记法检测Vγ9Vδ2T细胞的脱颗粒效应;CD25与CD69标记法检测Vγ9Vδ2T细胞的活化状况;ELISA法检测Vγ9Vδ2T细胞的TNF-α和IFN-γ的生成水平;Western blot检测Vγ9Vδ2T细胞中Notch1和p-NF-κB水平。结果 BZM增强Vγ9Vδ2T细胞对Maver细胞的杀伤效应和增加Vγ9Vδ2T细胞的脱颗粒能力(CD107a表达增加)。BZM增强Vγ9Vδ2T细胞活化(CD25与CD69的表达增加)以及活化效应功能(TNF-α和IFN-γ的生成水平增加)。BZM能增强Vγ9Vδ2T细胞的Notch1/NF-κB信号(Notch1和p-NF-κB水平增加)。给予Notch1和NF-κB抑制剂处理Vγ9Vδ2T细胞,BZM的以上效应可被部分逆转。结论 BZM可通过Notch/NF-κB通路增强Vγ9Vδ2T细胞的活化,并进一步增强Vγ9Vδ2T细胞对Maver细胞的杀伤效应。

基于Notch/NF-κB串话作用探讨佐剂性关节炎大鼠肺功能降低的机制

目的观察佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠肺功能、肺组织Notch/NF-κB信号通路的变化以及这两条信号通路在AA大鼠肺功能降低机制中的串话作用。方法 SD大鼠,随机分为正常对照组(NC)、模型组(MC),每组15只,向MC组所有大鼠右后足趾注射弗氏完全佐剂0.1mL,复制AA大鼠模型。致炎19d后,观察2组大鼠足趾肿胀度(E),关节炎指数(AI),肺功能,肺炎系数,血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-35水平,肺病理形态学变化以及肺组织Notch/NF-κB通路的基因、蛋白表达变化。结果 (1)与NC组相比,AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、肺炎系数、IL-6、IL-17水平显著升高(P<0.05或P<0.01),IL-10、IL-35水平、肺功能参数显著降低(P<0.05或P<0.01),肺组织Notch1、Delta1、HES1、NF-κB mRNA和Notch4、Jagged1、Jagged2、NF-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。(2)相关性分析显示:AA大鼠肺功能参数与足趾肿胀度、关节炎指数、肺炎系数、IL-6、IL-10、IL-17、IL-35水平存在相关性,与肺组织Notch/NF-κB通路存在相关性,而肺组织Notch/NF-κB两条通路基因与蛋白之间也存在相关性。结论 AA大鼠肺组织Notch/NF-κB通路基因与蛋白存在相关性,且与肺功能参数相关,提示二者之间可能是通过串话在AA大鼠肺功能降低中发挥作用。

小豆蔻明通过调节Notch/NF-κB信号通路介导的细胞焦亡减轻蒽环类药物所致大鼠的心脏毒性

目的研究小豆蔻明(CAR)通过调节Notch/核转录因子κB(NF-κB)信号通路介导的细胞焦亡对蒽环类药物所致大鼠心脏毒性的保护作用。方法腹腔注射阿霉素(DOX)建立大鼠心脏毒性模型,将模型大鼠随机分为DOX组、CAR低剂量组、CAR高剂量组、Jagged1组。另取10只大鼠作为对照组。对照组和DOX组给予等量0.9%NaCl,CAR低、高剂量组分别给予大鼠40、80 mg·kg^(-1)CAR灌胃,Jagged1组灌胃80 mg·kg^(-1)CAR+和25 ng·kg^(-1)Jagged1,每天1次,连续4周。用试剂盒检测心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ);用免疫组化法观察焦亡蛋白Nod样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDM-D)表达;用蛋白质印迹法检测检测心肌组织Notch1、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达。结果对照组、DOX组、CAR低剂量组、CAR高剂量组和Jagged1组的CK-MB水平分别为(48.51±5.39)、(175.93±13.27)、(106.83±9.73)、(83.71±8.39)和(126.08±9.74)U·L^(-1),cTnⅠ水平分别为(1.95±0.18)、(12.46±1.83)、(7.15±0.64)、(4.13±0.38)和(8.01±0.78)ng·mL^(-1),NLRP3蛋白的平均光密度值分别为0.19±0.07、0.36±0.05、0.25±0.05、0.21±0.03和0.31±0.06,GSDM-D的平均光密度值分别为0.18±0.04、0.43±0.06、0.24±0.03、0.19±0.04和0.32±0.05。DOX组上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);CAR低、高剂量组上述指标与DOX组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05),且CAR低、高剂量组上述指标比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);Jagged1组上述指标与CAR高剂量比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论CAR能改善DOX心脏毒性大鼠心肌损伤,降低氧化应激、炎症反应和细胞焦亡,其作用机制可能与抑制Notch/NF-κB通路有关。

调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移灶miR-34a-5p、Notch1/NF-κB表达的影响

目的探讨调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移(colorectal cancer liver metastasis,CLM)灶组织中MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)及其靶基因Notch1/核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路表达的影响。方法选取30只雄性Balb/c裸鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组10只。脾脏原位注射HCT-116人结肠癌细胞(细胞数约为1×107个/mL)法构建CLM模型。中药组在CLM造模完成2周后开始调脾安肠方(2 g/mL,每日0.2 mL)灌胃2周,空白组和模型组同期予等体积0.9%生理盐水灌胃。苏木素—伊红染色观察肝转移灶病理组织形态;蛋白免疫印迹法测定肝转移灶Notch1、NF-κB p65蛋白水平;实时荧光定量PCR测定肝转移灶miR-34a-5p及Notch1、NF-κB p65 mRNA水平。结果与模型组比较,中药组裸鼠镜下病理转移灶面积明显减小,核分裂像减少,提示调脾安肠方抑制了结直肠癌细胞在肝脏的定植和迁移。与空白组比较,模型组肝转移灶中miR-34a-5p含量显著降低(P<0.01),Notch1、NF-κB p65蛋白表达升高(均P<0.05),Notch1、NF-κB p65的mRNA表达显著升高(均P<0.01)。与模型组比较,中药组Notch1蛋白及mRNA表达降低(P<0.05),NF-κB p65的mRNA表达显著降低(P<0.01)。miR-34a-5p与Notch1 mRNA在结肠癌肝转移灶组织中表达水平呈负相关(r^(2)=0.8845,P<0.05),Notch1与NF-κB p65在结肠癌肝转移灶组织中mRNA表达水平呈显著正相关(r^(2)=0.9291,P<0.01)。结论中药复方调脾安肠方能抑制裸鼠结肠癌肝转移灶形成,其机制可能与通过抑癌基因miR-34a-5p靶向负性调节Notch1/NF-κB通路表达有关。

从NF-κB和Notch-1通路探索紫杉醇-重组水蛭素介入涂层抗再狭窄的细胞学机制

目的 探索紫杉醇-重组水蛭素介入涂层复合物(LFN)调控Notch-1和NF-κB通路间交互作用关键位点抗再狭窄的微观机制。方法 利用网络药理学技术初筛LFN调控双信号通路交互作用的预测靶点,构建LPS+Jagged-1诱导人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMCs)增殖迁移模型,通过敲减或过表达双通路间枢纽基因,明确其交互作用与HCASMCs增殖迁移的相关性。在此基础上,对LFN初筛靶点进行精筛,进而在HCASMCs模型上予以LFN干预,从LFN双向调控Notch-1和NF-κB通路切入,深入阐释LFN防治介入术后再狭窄的细胞学机制。结果 网络药理学筛选结果表明,LFN对再狭窄的调控包含多种生物学模块和过程。联合LPS和Jagged-1以1μg/ml的浓度24 h持续刺激HCASMCs可诱导建立双通路活化细胞模型。与模型组比较,最佳浓度下的LFN(1μmol/L的紫杉醇配比0.2 mg/ml比伐芦定)对造模活化后的HCASMCs迁移和增殖变化具有显著抑制作用,可下调HCASMCs中NF-κB和Notch-1基因表达、上调IκBα基因表达,降低NICD、VEGF、MMP2、MMP9和Bcl-xL基因表达,同时下调OPN、PCNA、Notch-1和NF-κB(细胞核)蛋白表达、上调NF-κB(细胞质)蛋白表达(P<0.05)。其中,Notch-1与NICD表达的变化可直接影响LFN的作用效果。结论 LFN的抗再狭窄效应是通过调节Notch-1和NF-κB双通路间交互作用、阻断HCASMCs从收缩型向分泌型转变而实现。

电针对溃疡性结肠炎小鼠结肠Notch/NF-κB信号通路的影响

目的:观察电针对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠肠黏膜屏障的保护作用及其对Notch/NF-κB信号通路的影响,探讨电针治疗UC的相关机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠采用葡聚糖硫酸钠饮用法复制UC模型,造模成功后随机分为模型组、电针组,每组6只,另设6只为空白组。电针组给予电针“足三里”治疗,每日30 min,连续治疗7 d。观察各组小鼠的一般情况,进行疾病活动指数(DAI)评分,采用HE染色法观察各组小鼠结肠组织形态变化,ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6含量,免疫荧光法检测结肠组织Claudin-1蛋白表达,免疫组织化学法检测结肠组织黏液蛋白(Muc)-2、Notch-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测结肠组织Notch-1、Hes-1、核转录因子(NF)-κB、Toll样受体(TLR)-4、蛋白激酶B(AKT)mRNA含量。结果:与空白组比较,模型组小鼠DAI评分升高(P<0.001),血清中TNF-α、IL-6含量增加(P<0.01,P<0.001),结肠组织中Claudin-1、Muc-2蛋白阳性表达均减少(P<0.01),Notch-1、MMP-9蛋白阳性表达及Notch-1、Hes-1、NF-κB、TLR-4、AKT mRNA相对表达量均升高(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,治疗后电针组DAI评分降低(P<0.05),血清中TNF-α、IL-6含量降低(P<0.01,P<0.001),结肠组织中Claudin-1、Muc-2蛋白阳性表达均增加(P<0.05),Notch-1、MMP-9蛋白阳性表达及Notch-1、Hes-1、NF-κB、TLR-4、AKT mRNA相对表达量均降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。HE染色结果显示,空白组小鼠结肠上皮完整,杯状细胞丰富,无炎性细胞浸润;模型组结肠黏膜结构模糊,存在大小不等的缺损,杯状细胞脱落,炎性细胞大量浸润;电针组结肠损伤较模型组明显改善。结论:电针能促进UC模型小鼠肠黏膜屏障功能的恢复,减轻炎性反应,其作用机制可能与抑制Notch/NF-κB信号通路的过度活化相关。

天麻素抑制Notch/NF-κB信号通路对呼吸道合胞病毒感染大鼠的肺组织损伤及Th17/Treg细胞平衡的影响

目的 探讨天麻素(Gas)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺炎大鼠肺组织的保护机制及对Th17/Treg细胞平衡的影响。方法 将Wistar雄性大鼠60只分为对照组(C组)、模型组(M组)Gas低剂量组(Gas-L,5 mg/kg)、Gas中剂量组(Gas-M,10 mg/kg)、Gas高剂量组(Gas-H,20 mg/kg)、阳性组(0.15 g/kg利巴韦林),每组10只。药物干预结束后,称定大鼠体质量和肺组织干湿重,计算肺指数和肺组织W/D值;取肺组织作HE染色检查并进行损伤评分;qRT-PCR检测肺组织RSV病毒载量;流式细胞术检测脾组织Th17、Treg细胞比例;ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A、TGF-β含量;Western blot检测肺组织Notch/NF-κB通路蛋白表达。结果 与C组相比,M组肺组织出现中性粒细胞浸润,肺泡破裂连片等病变,肺指数、W/D值、肺损伤评分、RSV病毒载量、Th17细胞比例、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17水平、Notch-1、Hes-1、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白均显著升高(均P<0.05),Treg细胞比例和TGF-β水平均显著下降(均P<0.05)。Gas-M、H组和阳性组肺损伤程度显著改善,肺指数、W/D值、肺损伤评分、RSV病毒载量,Th17细胞比例,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17及Notch-1、Hes-1、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平均显著下降(均P<0.05),Treg细胞比例和TGF-β水平显著上升(均P<0.05)。结论 Gas具有减轻RSV感染肺炎大鼠的肺组织炎症损伤和维持Th17/Treg细胞平衡的作用,可能通过抑制Notch/NF-κB信号通路实现。

黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)、cAMP和脑组织NF-κB表达的影响

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制。方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3 d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达。结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE 2和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)与cAMP的分泌和减少脑组织NF-κB p65蛋白表达有关。

钩藤降压解郁方抑制TLR4/NF-кB信号通路对高血压并发抑郁症大鼠海马小胶质细胞极化的影响

目的探讨钩藤降压解郁方(钩藤、天麻、地龙、葛根等)调控TLR4/NF-кB信号通路对高血压并发抑郁症(HD)大鼠海马小胶质细胞极化的影响。方法将40只原发性高血压大鼠随机分为5组:模型组、阳性药组及中药(钩藤降压解郁方)高、中、低剂量组,每组8只;另取8只SD大鼠作为对照组。采用连续42 d慢性应激(CUMS)结合孤养的方式复制HD模型。造模同时给药干预,中药高、中、低剂量组分别给予钩藤降压解郁方29.61、14.81、7.40 g·kg^(-1)灌胃给药;阳性药组给予左旋氨氯地平0.45 mg·kg^(-1)+氟西汀1.8 mg·kg^(-1)灌胃给药;灌胃体积10 mL·kg^(-1),每天1次,连续42 d。采用无创血压计于给药前及每周最末日上午测量大鼠尾动脉收缩压;造模开始后的第2周和最后1周各进行1次糖水偏好行为学检测;造模结束后进行水迷宫实验;ELISA法测定血清炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10水平;HE染色法及尼氏染色法观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫荧光双染法检测海马区小胶质细胞M1(CD16)、M2(CD206)型表达情况;Western Blot法检测海马组织中TLR4、NF-κB p65蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠第1~6周的尾动脉收缩压均显著升高(P<0.01);糖水偏好率显著下降(P<0.01);逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间占比显著降低(P<0.01);血清TNF-ɑ、IL-1β含量显著上升(P<0.01),IL-10含量显著下降(P<0.01);胞核深染,胞质固缩,细胞凋亡明显;海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显降低(P<0.05);海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠第1~6周的尾动脉收缩压均显著降低(P<0.01);糖水偏好率均明显上升(P<0.05);血清TNF-ɑ、IL-1β含量显著下降(P<0.01),IL-10含量显著上升(P<0.01);尼氏体丰富,细胞凋亡明显减少。阳性药组及钩藤降压解郁方高剂量组大鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间占比明显增加(P<0.05);海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显升高(P<0.05,P<0.01);海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论钩藤降压解郁方可能通过抑制TLR4/NF-кB通路调节HD大鼠海马小胶质细胞极化状态,调控炎症因子分泌,减轻海马神经元损伤。

温针灸对兔膝骨性关节炎模型滑膜组织中TLR4/NF-κB信号通路诱导下滑膜修复作用机制的实验研究

目的通过观察温针灸对兔右膝骨性关节炎模型关节软骨滑膜组织中TLR4、NF-κB表达量的影响,探讨温针灸治疗膝骨性关节炎的机制。方法随机将40只兔分为空白组、模型组、双氯芬酸钠组、温针灸组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制作膝骨性关节炎模型,于造模成功后第3 d开始进行干预治疗。空白组不做任何处理,常规饲养;模型组不治疗,每天以石膏固定1次,时间15 min。温针灸组给予患侧鹤顶、后三里、内外膝眼、阳陵泉5个穴位行温针灸治疗,15 min/1次,1次/d。双氯芬酸钠组将药品研末、溶解在纯净水中,并以15 mg/kg体重的浓度灌胃。6 d为1个疗程,观察2个疗程,治疗结束后取材。通过HE染色法观察各组膝关节软骨的病理变化,并进行Mankin′s评分;采用ELISA法检测各组兔膝关节滑膜组织中NF-κB、TLR4的表达水平。结果与空白组兔比较,各组兔膝关节Mankin′s评分、NF-κB、TLR4的含量均增高(P<0.05),与模型组兔相比,温针灸组和双氯芬酸钠组兔膝关节Mankin′s评分和NF-κB、TLR4的含量均有所下降(P<0.05)。结论温针灸可改善兔膝关节软骨退行性变,减轻炎症反应,其机制可能与改善兔膝关节软骨形态,降低滑膜组织中NF-κB、TLR4的表达量相关。

小檗碱通过NF-κB/iNOS-COX-2信号通路对睡眠剥夺大鼠认知功能的影响

目的探究小檗碱是否能够通过调控核因子(NF)-κB/诱导型一氧化氮合酶/环氧合酶(iNOS-COX)-2信号通路对睡眠剥夺(SD)大鼠认知功能产生影响。方法90只大鼠随机分为对照组、睡眠剥夺(SD)组、小檗碱低剂量组[小檗碱-L组,30 mg/(kg·d)]、小檗碱中剂量组[小檗碱-M组,60 mg/(kg·d)]、小檗碱高剂量组[小檗碱-H组,120 mg/(kg·d)]、艾司唑仑组[0.1 mg/(kg·d)],每组各15只,药物处理7 d后通过平台水环境法进行大鼠SD模型构建。通过Morris水迷宫实验和Y迷宫实验检测逃避潜伏期和行为正确率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组海马组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-17和血清中S100B、神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达水平;试剂盒检测海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;Western印迹检测海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白表达水平。结果与对照组比较,SD组逃避潜伏期,海马组织中TNF-α、IL-6、IL-17、MDA水平,血清中S100B和NSE水平及海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白水平明显升高,行为正确率和海马组织中SOD、GSH-Px水平明显降低(均P<0.05)。与SD组比较,小檗碱-L、M、H组和艾司唑仑组逃避潜伏期,海马组织中TNF-α、IL-6、IL-17、MDA水平,血清中S100B和NSE水平及海马组织中NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白水平均明显降低,行为正确率和海马组织中SOD、GSH-Px水平明显升高(均P<0.05)。小檗碱-H组与艾司唑仑组比较上述指标无明显差异(P>0.05)。结论小檗碱能够对SD大鼠认知功能产生保护作用,其机制可能与调控NF-κB/iNOS-COX-2信号通路,并减轻炎症和氧化应激损伤有关。

萝卜硫素通过调节ALOX5/NF-κB信号通路调控巨噬细胞糖酵解抑制糖尿病肾病进展

目的探讨萝卜硫素(SFN)调节花生四烯酸5-脂氧合酶基因(arachidonic acid 5-lipoxygenase,ALOX5)/核因子kappa B(NF-κB)信号通路调节巨噬细胞糖酵解对糖尿病肾病(DN)进展的影响。方法生物信息学分析SFN治疗DN的靶基因。使用30 mmol/L高葡萄糖(HG)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)诱导体外DN模型。将HK-2细胞分为如下组:正常糖(NG)组、HG组、HG+SFN(3 mmol/L)组、HG+ALOX5组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5组、HG处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组。CCK-8检测细胞活力,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞中葡萄糖和乳酸水平;Western blot检测各组细胞中ALOX5、NF-κB以及糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达;使用链脲佐菌素(STZ)构建DN小鼠模型,DN小鼠给与SFN(0.5 mg/kg)治疗;检测小鼠各项生化指标,HE染色检测肾组织病理变化;Western blot检测小鼠肾脏巨噬细胞中糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达。结果生物信息学分析结果显示ALOX5是SFN治疗DN的靶基因。与HG组相比,SFN处理增强HK-2细胞活力并抑制细胞凋亡(P<0.05);同时,SFN处理抑制HG诱导的巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达,减弱巨噬细胞介导的HK-2细胞损伤(P<0.05);Western blot结果表明SFN抑制ALOX5和NF-κB的表达(P<0.05);小鼠实验结果显示,SFN治疗改善DN小鼠肾功能和肾组织病理学改变,抑制肾组织中巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达(P<0.05)。结论SFN通过抑制ALOX5/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞糖酵解从而改善DN进展。

左归降糖舒心方调控TLR4/NF-κB通路抑制糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的机制研究

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR小鼠心肌纤维化及炎症因子的影响。方法 以8周龄雄性MKR小鼠为实验对象,采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)40 mg/kg构建糖尿病心肌病模型,随机分为中药高剂量组[33.67 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、中药低剂量组[16.84 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、西药联合组[0.23 g/(kg·d)二甲双胍联合1.5 mg/(kg·d)依那普利]和模型组(等容量蒸馏水);另设FVB小鼠为空白对照组(等容量蒸馏水)。每组10只,连续给药8周后取材。收集尾静脉血液检测空腹血糖水平;采用HE、Masson染色观察心肌病理改变,电镜观察心肌组织超微结构变化;采用ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达情况;RT-qPCR及Western blot检测小鼠心肌组织Ⅰ型胶原(collagen type I,CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,CollagenⅢ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量增高(P<0.01);心肌细胞结构紊乱,胶原含量增加,心肌细胞重度退行性变;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),中药高剂量组小鼠心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组和西药联合组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均降低(P<0.01);心肌结构改善,胶原沉积减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达下调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达下调(P<0.01)。与西药联合组比较,中药低剂量组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均升高(P<0.01),心肌结构无明显改善,胶原沉积无显著减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达上调(P<0.01)。结论 左归降糖舒心方能抑制心肌炎性反应、改善心肌细胞结构,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、下调细胞炎症因子表达、抑制心肌纤维化有关。

黄芪阳和汤调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路促进糖尿病足溃疡大鼠创面愈合

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子-κB(NF-κB)信号通路探究黄芪阳和汤对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠创面愈合的影响。方法构建DFU大鼠模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组,黄芪阳和汤低(8.5 g/kg)、高(17 g/kg)剂量组,黄芪阳和汤高剂量(17 g/kg)+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂,0.3 mg/kg)组;每组12只;另取12只大鼠为对照组。各组大鼠给予对应药物干预,连续4周。第14、28天给药后,观察大鼠一般状态及创面变化,计算创面愈合率,检测大鼠空腹血糖(FBG)水平和大鼠创面周围组织经皮氧分压(TcpO2);酶联免疫吸附试验检测大鼠血清血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6水平;苏木素-伊红染色观察大鼠创面组织病理学变化;免疫组织化学染色测定大鼠创面组织微血管密度;蛋白免疫印迹法检测大鼠创面组织中PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达。结果对照组大鼠毛色光滑,饮食、饮水、排泄均正常,较活跃,创面愈合快,创面组织炎症反应较轻,新生血管较多,肉芽组织中成纤维细胞及胶原基质丰富;模型组大鼠毛色暗淡无光泽,活动减少,且出现多饮、多食、多尿症状,创面颜色较深,且周围组织出现水肿、溃疡,创面组织可见大量炎性细胞浸润,伴组织坏死、渗出,新生血管及成纤维细胞较少,创面愈合率、创面周围组织TcpO2、血清VEGF、HIF-1α、创面组织微血管密度、p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表达水平降低,FBG、血清CRP、IL-6、创面组织p-NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,黄芪阳和汤低、高剂量组大鼠状态逐渐改善,创面组织病变程度依次减轻,创面愈合率、创面周围组织TcpO2、血清VEGF、HIF-1α、创面组织微血管密度、p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表达水平依次升高,FBG、血清CRP、IL-6、创面组织p-NF-κB p65蛋白表达依次降低(P<0.05);LY294002能部分逆转高剂量黄芪阳和汤对DFU大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论黄芪阳和汤能调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路,抑制DFU大鼠炎症反应,促进血管新生,从而促进创面愈合。

三黄糖肾康颗粒治疗糖尿病肾病患者的疗效观察及对TLR4、NF-κB、MCP-1的影响

目的:观察三黄糖肾康颗粒治疗糖尿病肾病的疗效及对血清Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-kB(NF-κB)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法:60例DN患者,随机分为观察组和对照组各30例。两组均予以西医基础治疗,观察组在对照组治疗基础上加用三黄糖肾康颗粒,两组疗程均为12周;评价疗效,ELISA检测血清TLR4、NF-κB、MCP-1含量。结果:观察组疗效优于对照组(P<0.05);两组治疗后血清TLR4、NF-κB、MCP-1均降低(P<0.05);与对照组比较,观察组TLR4、NF-κB、MCP-1降低更明显(P<0.05)。两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:三黄糖肾康颗粒可提高西医常规治疗DN的疗效,调节TLR4、NF-κB、MCP-1水平是其部分作用机制。

白藜芦醇通过ERK1/2和NF-κB通路调节NADPH氧化酶表达改善急性肺损伤

目的探讨白藜芦醇对急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶的影响,并分析相关信号通路机制。方法将50只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组10只。对照组和模型组给予生理盐水干预,地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组分别给予2 mg/kg地塞米松、100 mg/kg白藜芦醇、500 mg/kg白藜芦醇干预,1次/d,连续干预14 d。干预结束后,除对照组外,其余组别大鼠构建急性肺损伤模型。比较各组大鼠肺组织病理状态、肺湿重/干重比(W/D)、肺损伤评分,采用ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用RT-PCR法检测各组NADPH氧化酶亚基p47^(phox)、p22^(phox),及ERK、NF-κB mRNA水平;采用Western bloting法检测各组p47^(phox)、p22^(phox)、p-ERK1/2、ERK1/2、p-NF-κB、NF-κB蛋白水平。结果模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组W/D及肺损伤评分、MDA水平、p22^(phox)、p47^(phox)、ERK1/2、NF-κB mRNA、p47^(phox)蛋白、p-ERK/ERK、p-NF-κB/NF-κB、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组,而SOD、GSH-Px水平低于对照组(P<0.05)。结论白藜芦醇可改善LPS诱导的急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶及氧化应激状态,其作用机制可能与ERK1/2-NF-κB通路有关。

基于NF-κB经典信号通路研究黄芩素对高糖诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的:从NF-κB经典信号通路探讨黄芩素对高糖诱导近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用及机制。方法:5.5 mmol/L浓度的葡萄糖设为正常糖对照组,45 mmol/L浓度的葡萄糖设为高糖组,NF-κB特异抑制剂PDTC(100μmol/L)作为阳性对照组,观察不同剂量黄芩素(25~100μmol/L)对高糖诱导的HK-2细胞NF-κB通路激活及其下游炎症因子的影响。Western blot法检测NF-κB信号通路关键蛋白(IκBα、p65、p-p65、IKKα)及其下游炎症分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达。结果:与正常糖对照组比较,高糖组能显著下调IκBa蛋白表达,上调p-p65/p65比值和IKKα、MCP-1、ICAM-1蛋白表达(P<0.01);与高糖组比较,黄芩素中、高剂量组呈剂量依赖性地显著抑制IκBα蛋白表达下调,p-p65/p65比值和IKKα、MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01);与高糖组比较,NF-κB特异抑制剂PDTC组能显著抑制IκBα蛋白表达下调,及p-p65/p65比值和MCP-1、ICAM-1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩素可以通过抑制高糖诱导的HK-2细胞NF-κB信号通路关键蛋白(IKKα/IκBα/p65)的激活,下调其下游炎症分子MCP-1、ICAM-1表达,从而减轻肾脏细胞炎症。

胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的实验研究

目的:探究胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的作用。方法:通过缺氧/复氧(H/R)诱导H9C2细胞建立心肌细胞损伤模型,细胞分为空白对照组、模型组、胡黄连提取物低浓度(250μg/mL)组、胡黄连提取物中浓度(500μg/mL)组、胡黄连提取物高浓度(1000μg/mL)组、miR-NC组、miR-26a-5p组、anti-miR-NC+胡黄连提取物高浓度组、anti-miR-26a-5p+胡黄连提取物高浓度组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测cleaved Caspase-3、Bax、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达;ELISA检测MDA、SOD、CAT水平;qRT-PCR检测miR-26a-5p表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA、p-NF-κB/NF-κB水平及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,细胞增殖能力、SOD、CAT水平及miR-26a-5p表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,胡黄连提取物可显著降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡率及MDA、p-NF-κB/NF-κB水平和cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达,显著升高细胞增殖能力及SOD、CAT水平和miR-26a-5p表达(P<0.05)。抑制anti-miR-26a-5p可逆转胡黄连提取物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论:胡黄连提取物可能通过调控miR-26a-5p/NF-κB通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。