Notch3/DLL4信号通路对颈部淋巴水囊瘤后淋巴管发育的影响

目的:探究Notch3/DLL4信号通路对颈部淋巴水囊瘤(CH)后淋巴管成熟发育的影响。方法:选取C57BL/6小鼠和C57BL/6背景Notch3基因敲入小鼠,将两种小鼠分为正常组(对照组)和Notch3基因敲入组(突变组)。选取F2代小鼠处死,取小鼠颈部淋巴结分别进行HE染色、Masson染色、RT-qPCR、Western blot、免疫组化检测。结果:HE及Masson染色结果显示,与对照组比,突变组小鼠的淋巴结构被显著破坏,细胞纤维化严重。RT-qPCR结果显示,与对照组比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1和VEGFR3 mRNA表达显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1和VEGFR3蛋白表达显著下降(P<0.05)。免疫组化结果显示,与对照组相比,突变组小鼠淋巴结中DLL4、Hes1、Ang2、VEGFA和VEGFR3染色较浅,蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:Notch3/DLL4信号通路能够调控小鼠颈部CH的形成,其机制可能与淋巴管发育有关。

乳岩宁对三阴乳腺癌荷瘤裸鼠Notch1信号通路的作用机制

目的 观察乳岩宁方与卡培他滨联用对MDA-MB-231乳腺癌荷瘤裸鼠的瘤组织中Notch1信号通路的作用。方法 用对数生长期的MDA-MB-231细胞悬液,于裸鼠左侧胸壁接种,成功长出瘤组织后将其移植到未接种裸鼠的胸壁,建立三阴乳腺癌模型,共40只荷瘤裸鼠,分5组,每组8只,日1次灌胃,连续21 d灌药。观察裸鼠状态并计算肿瘤组织的抑制率;免疫印迹法测定Notch 1、Notch1受体的细胞内结构(Notch1 intracellular domain, NICD1)、与YRPW基序相关的发状分裂增强子1(Hairy and enhancer of split related with YRPW motif 1,Hey1)、发状分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split Homolog 1,Hes1)、髓细胞增生原癌基因(Cellular myelocytomatosis oncogene, C-myc)的蛋白表达量;实时荧光定量PCR测定Notch 1、Hey1、Hes1、C-myc的基因表达量。结果 与模型组对比,中药、西药和中药+西药组的肿瘤质量均有明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01),3组的抑瘤率分别为33.11%、59.60%、65.93%。免疫印迹法结果表明,与模型组相比,中药组、西药组、中药+西药组的Notch 1、NICD1、Hey1、Hes1、C-myc蛋白水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);而Notch 1和Hes1的蛋白表达水平在中药组和西药组中水平相当,差异无统计学意义(P>0.05);中药+西药组较西药组中Hes1蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量结果表明,与模型组相比,中药组、西药组、中药+西药组Notch 1、Hey1、Hes1、C-myc的mRNA水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与西药组相比,中药组与西药组Notch 1、Hes1、C-myc的mRNA水平相当,差异无统计学意义(P>0.05);中药+西药组较西药组中Notch 1及Hey1的mRNA水平明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 疏肝理气中药复方乳岩宁能够抑制三阴乳腺癌荷瘤裸鼠的肿瘤生长,其作用机制与三阴乳腺癌中的Notch1信号通路受到抑制相关。为疏肝理气中药治疗三阴乳腺癌,尤其是影响乳腺癌Notch1信号通路方面提供了实验依据。

Notch信号通路在成人EB病毒感染所致传染性单核细胞增多症中的作用

目的:观察成人传染性单核细胞增多症(IM)患者Notch信号通路分子和Th22细胞的变化,检测抑制Notch信号通路对Th22细胞的调控作用。方法:纳入42例IM患者和21例健康对照者,采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞,酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素(IL)-17和IL-22水平,流式细胞术检测CD3+CD4+IL-17+Th17细胞和CD3+CD4+IL-22+Th22细胞比例,实时定量PCR法检测Th17转录因子维甲酸相关孤独核受体γt(RORγt)、Th22转录因子芳香烃受体(AhR)及Notch信号通路分子(包括Notch受体、Notch配体、Notch下游分子)mRNA相对表达量。纯化CD4+T细胞,使用γ-分泌酶抑制剂(GSI)刺激培养,检测GSI刺激后细胞增殖、Th17和Th22细胞比例、IL-17和IL-22分泌、转录因子mRNA相对表达量变化。结果:IM组外周血单个核细胞中Notch1和Notch2 mRNA的相对表达量分别为13.58±3.18、4.73±1.16,均明显高于对照组的1.09±0.12、1.07±0.15(均P<0.001),而Notch3和Notch4 mRNA相对表达量在IM组和对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。IM组Notch配体DLL1和Jagged1 mRNA相对表达量、Notch信号下游分子Hes1、Hes5和Hey1 mRNA相对表达量均高于对照组(均P<0.001)。IM患者Th17和Th22细胞比例分别为5.03%±1.15%、4.48%±1.29%,均高于对照组的4.36%±0.82%、3.83%±0.55%(均P<0.05);血浆IL-17和IL-22水平分别为(301.1±53.82)pg/ml、(101.2±16.45)pg/ml,均高于对照组的(237.2±72.18)pg/ml、(84.75±11.83)pg/ml(均P<0.001);RORγt和AhR mRNA相对表达量分别为1.25±0.22、1.21±0.12,均高于对照组的0.99±0.15、1.04±0.11(均P<0.001)。CD4+T细胞增殖水平、Th17细胞比例、IL-17分泌和RORγt mRNA相对表达量在无GSI刺激组和经GSI刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。经GSI刺激后Th22细胞比例、IL-22分泌和AhR mRNA相对表达量较无GSI刺激降低(均P<0.05)。结论:Notch信号通路通过AhR调控IM患者CD4+T细胞分泌IL-22,Notch-AhR-Th22细胞通路可能参与IM发病。

牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组(10 mg/L ARC)、ARC-M组(20 mg/L ARC)、ARC-H组(40 mg/L ARC)和ARC-H+Jagged1/FC组(40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC)。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖(c-Myc、cyclin D1)、凋亡(BAX、Bcl-2、survivin)、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路(Notch 1、Hes-1、NICD)相关蛋白的表达水平。结果:与0 mg/L相比,10~80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力(均P<0.05)。与对照组相比,ARC-L组、ARC-M组和ARC-H组HSC-3细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、S期和G2/M期细胞占比及c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、survivin、vimentin、Snail、Notch 1、Hes-1和NICD蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞占比及BAX、E-cadherin的蛋白表达均显著升高(均P<0.05),且呈浓度梯度依赖性。同时使用Notch激动剂Jagged1/FC,则可部分逆转ARC对HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的作用(均P<0.05)。结论:ARC可能通过抑制Notch/Hes-1信号通路抑制OSCC细胞HSC-3增殖和侵袭并促进细胞凋亡。

川楝素调节Notch信号通路对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究川楝素通过调节Notch信号通路对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 体外培养人甲状腺癌细胞8505C,CCK-8法检测不同剂量川楝素对8505C细胞存活率的影响;将8505C细胞分为对照组、川楝素-L、M、H组、川楝素+DAPT(Notch信号通路抑制剂)组;EDU法检测8505C细胞增殖;Transwell检测8505C细胞迁移与侵袭能力;RT-PCR检测不同8505C细胞组Notch1、HES1、HEY1、Ki67、MMP-2的mRNA水平;western blot检测不同8505C细胞组Notch1、HES1、HEY1、Ki67、MMP-2的蛋白水平。结果 与对照组相比,川楝素-L、M、H组8505C细胞EDU阳性细胞率、迁移与侵袭细胞数、Ki67、MMP-2的mRNA以及蛋白水平均显著性降低,Notch1、HES1、HEY1的mRNA以及蛋白水平显著性升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与川楝素-H组相比,川楝素+DAPT组EDU阳性细胞率、迁移与侵袭细胞数、Ki67、MMP-2的mRNA以及蛋白水平均显著性升高,Notch1、HES1、HEY1的mRNA以及蛋白水平显著性降低(P<0.05)。结论 川楝素可能通过激活Notch信号通路,抑制甲状腺癌细胞8505C增殖、迁移和侵袭。

Notch信号通路在呼吸道变态反应性疾病发生发展中的调控作用

呼吸道变态反应性疾病包括变应性鼻炎(allergicrhinitis,AR)和支气管哮喘(bronchial asthma,BA)。众所周知,AR是一种人体在接触变应原后产生的、由特异性免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)介导的Th2型鼻黏膜慢性非感染性炎症反应,其临床表现包括鼻塞、鼻痒、喷嚏和流涕等。AR的全球平均发病率高达5%~50%,这不仅会严重影响患者的生活质量,还是引发哮喘的一个独立高危因素[1]。《中国变应性鼻炎诊治指南(英文版)》(2018年)[2]指出,40%的AR患者可合并哮喘。

冬凌草甲素介导Notch信号通路对多发性骨髓瘤细胞生长水平、凋亡率及异常转化情况研究

目的探究冬凌草甲素介导Notch信号通路对多发性骨髓瘤细胞生长水平、凋亡率及异常转化情况。方法选取U266细胞、RPMI8226细胞和KAS-6/1细胞,采用CCK8法检测细胞生长水平,采用酶标仪492 nm处检测光密度检测物厚度D值测定细胞的生长抑制率,随后采用流式细胞仪检测RPMI8226细胞和U266细胞的凋亡情况,最后对所检测细胞进行异常转化的观察。结果研究组U266细胞、RPMI8226细胞和KAS-6/1细胞的生长水平均明显低于对照组(P<0.05)。研究组干预后Notch 1-siRNA与核因子κB(NF-κB)-siRNA表达水平变化明显优于对照组(P<0.05)。研究组RPMI8226细胞、U266细胞凋亡率明显优于对照组(P<0.05)。研究组异常转染、异常克隆、异常增生的发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论冬凌草甲素能够明显抑制多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞、KAS-6/1细胞体外生长,有效激活Notch信号通路调节诱导肿瘤细胞凋亡过程,值得临床推广应用。

顺铂致肝损伤小鼠Notch信号通路差异基因筛选及针灸对其调控的研究

目的通过筛选顺铂(Cisplatin,DDP)致肝损伤小鼠肝组织中Notch信号通路显著性差异基因,探讨针灸改善肝损伤的作用机制。方法雄性KM小鼠随机分成空白组、模型组、针刺组、艾灸组、阻断剂针刺组、阻断剂艾灸组,每组10只。空白组以10 mg·kg^(-1)剂量腹腔注射0.9%NaCl溶液,其余各组腹腔注射同等剂量的DDP溶液,24 h后模型成功。针刺组、阻断剂针刺组取“大椎”和双侧“肝俞”“肾俞”“足三里”干预,艾灸组、阻断剂艾灸组取相同腧穴干预,阻断剂组均于治疗前30 min腹腔注射同等剂量的DAPT。连续干预5天,于第6天取肝脏左外侧叶备检DEGseq、免疫组化以及透射电镜。结果DEGseq初步筛选出57个与Notch信号通路相关差异基因,7个热点基因Notch1、Hes1、Adam17、Lfng、Numb、Hdac1、Notch2与肝损伤关系密切。免疫组化法对7个热点基因进一步筛选,与空白组比,模型组中Notch1、Hes1、Adam17、Lfng、Numb、Notch2、Hdac1蛋白含量上调,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比,其余4组中Notch1、Hes1、Adam17、Lfng蛋白含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);Numb、Hdac1、Notch2各组间差异无统计学意义(P>0.05)。超微病理示针灸对损伤的肝细胞具有明显的修复作用,且优于阻断剂组。结论针刺和艾灸可能通过良性调节与Notch信号通路显著性相关的差异基因Notch1、Hes1、Adam17、Lfng的表达,抑制Notch信号通路异常激活,并能改善受损的肝细胞微观结构,减轻DDP化疗所致肝损伤,这可能是针灸减轻DDP致肝损伤的机制之一。

田蓟苷对大鼠A7R5血管平滑肌细胞增殖、迁移、表型转化及Notch1信号通路调控的影响

目的 研究田蓟苷对A7R5血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响及其抗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法 采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激A7R5细胞建立血管平滑肌表型转化模型,将细胞分为正常组、模型组、田蓟苷组、Notch1通路抑制剂组(DAPT组)和辛伐他汀组。采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,实时荧光定量PCR法检测细胞SM22α、α-SMA、Notch1、Hes1、Hes5、Jagged-1 mRNA表达,Western blot法检测细胞Notch1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达。结果 与模型组比较,各给药组均可抑制A7R5细胞的异常增殖和迁移(P<0.05,P<0.01),上调α-SMA mRNA表达(P<0.01);田蓟苷组和DAPT组下调Notch1通路相关基因Notch1、Hes-1、Hes-5和Jagged-1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);田蓟苷组下调Notch1、Hes-1、RBP-Jκ蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 田蓟苷通过抑制VSMCs的异常增殖、迁移、表型转化及调控Notch1信号通路,从而保护ox-LDL诱导的A7R5细胞损伤。

白藜芦醇抑制Notch1信号通路对抗小鼠急性T淋巴细胞白血病

目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Res(M-Res)和high-Res(H-Res)3个浓度给药组。应用流式细胞术和瑞氏-吉姆萨染色法检测外周血及脾细胞悬液中白血病细胞百分比,HE染色法观察脾脏和骨髓组织病理形态,RT-q PCR法检测脾脏组织中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b和PTEN m RNA表达水平,Western blot法检测Notch1、Hes-1、c-Myc、p-PTEN和PTEN蛋白表达水平。结果:与对照组相比,T-ALL组小鼠外周血中白血病细胞明显增多,脾脏及骨髓组织中白血病细胞弥漫性浸润,脾脏中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b m RNA表达水平和Notch1、Hes-1、c-Myc蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),PTEN m RNA及其蛋白水平显著降低(P<0.01),经白藜芦醇处理后,H-Res组以上各项指标较T-ALL组均获得逆转。结论:白藜芦醇具有抗小鼠T-ALL的作用,其机制可能通过抑制Notch1信号通路发挥作用。

基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显升高(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(除Notch1抑制剂组)、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显降低(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显升高(P均<0.05)。结论复方雷公藤制剂可有效减轻佐剂关节炎大鼠关节炎症反应,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞极化,抑制促炎细胞因子的分泌有关。

Notch信号通路调控间充质干细胞的增殖与分化

背景:研究发现,Notch的配体和受体都是细胞膜表面蛋白,是介导细胞间通讯的一种重要蛋白,Notch信号通路在间充质干细胞增殖与分化过程中起着至关重要的调控作用。目的:就Notch信号通路对间充质干细胞增殖与分化过程的调节机制进行综述,总结和阐述Notch信号通路如何调控间充质干细胞的增殖与分化相关研究进展,为未来利用干细胞治疗各种相关疾病提供理论支持。方法:由第一作者应用计算机在中国知网、万方、维普、PubMed、Web of Science和Nature数据库检索涉及Notch信号通路调控间充质干细胞增殖与分化的相关文献,中文检索词为“间充质干细胞,Notch,Notch信号通路,增殖,分化”,英文检索词为“mesenchymal stem cells,MSC,Notch,Notch signaling pathway,proliferation,differentiation”,结合文献追溯法查找部分文献,最终纳入87篇文献进入综述分析。结果与结论:①Notch信号通路是一条存在于多细胞生物中保守的信号通路,通过受体与配体结合介导相邻细胞间的通信,在调节细胞分化、增殖、凋亡和细胞周期中发挥重要作用。②间充质干细胞是一类具有自我增殖和多向分化潜能的成体干细胞,可受外界信号通路的调控从而影响其增殖与分化,而Notch信号通路作为其中之一,当Notch配体被激活后,Notch蛋白会经历2次蛋白水解裂解,释放出Notch细胞内结构域NICD随后进入细胞核,进而促进靶基因的转录以达到调控骨髓、脂肪和脐带等不同来源的间充质干细胞增殖与分化的作用,但是调控同物种不同组织来源间充质干细胞在增殖与分化过程中的具体机制有所不同。③Notch信号通路可以调控间充质干细胞分化成不同的靶细胞,但是由于分化的靶细胞不同,Notch信号通路的受体或配体表达水平有差异。④临床上以Notch信号通路为靶点,促进间充质干细胞治疗各种难治性疾病,如再生障碍性贫血症、严重的关节损伤、缺血性脑卒中和心肌梗死等都有很好的应用前景。⑤通过探究Notch信号通路调控大鼠、小鼠和人的骨髓间充质干细胞受体及配体的表达水平,不同物种来源的间充质干细胞其Notch信号通路在增殖与分化的过程中的调控作用也有所不同。⑥间充质干细胞因其安全、免疫排斥性低及治疗前景广等优势在组织工程中的作用逐渐凸显,Notch信号通路调控间充质干细胞增殖与分化的影响因素繁多,后续研究应进一步优化影响因素变量,探索调控间充质干细胞增殖与分化的标准化研究。

Notch信号通路与妇科恶性肿瘤的关系

宫颈癌、子宫内膜癌以及卵巢癌是妇科常见的三大恶性肿瘤,都具有生长迅速、易转移以及预后较差的特点,严重损害患者的生理及心理健康。而Notch信号通路与肿瘤关系的研究一直是医学热点,探索其在肿瘤生长、转移、治疗等过程中发挥的作用可为妇科恶性肿瘤的治疗提供理论依据。该文对Notch信号通路和妇科恶性肿瘤的关系作一综述。

Notch信号通路在腹膜透析患者腹膜纤维化中的研究进展

腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是一种替代性治疗方法,应用人体腹膜的半透膜特性进行物质交换。通过向腹腔内重复灌入透析液,透析液与血浆间的溶质浓度和渗透梯度差异,排出体内代谢废物和过多水分,纠正酸碱失衡和改善电解质紊乱,同时补充机体所需物质[1]。腹膜透析相关性腹膜纤维化(peritoneal fibrosis,PF)的发病机制尚不完全清楚,有研究报道细胞因子及其介导的跨膜细胞信号转导通路在PF的进展中起关键作用。如何延缓腹膜纤维化,提高腹膜透析质量,是目前肾脏病透析治疗领域的研究重点之一。研究发现,Notch信号通路在纤维化进展中起重要作用,是组织发育、损伤及修复的关键调节因素。

基于Notch信号通路探讨中医药治疗骨关节炎的研究进展

骨关节炎是骨科疾病中常见的一种退行性疾病,严重影响患者的工作和生活。Notch信号通路是目前骨关节炎研究的最新热点之一。Notch信号通路与骨关节炎的发生、进展等密切相关。研究证实,中医药治疗骨关节炎具有独特优势,且取得了较好的临床效果。本文旨在概述中医药干预Notch信号通路治疗骨关节炎的相关研究成果,以期为中医药预防和治疗骨关节炎提供临床参考。

转录因子RUNX1上调MFAP2调控Notch信号通路促进甲状腺癌血管生成

目的探究微纤维相关蛋白2(MFAP2)在甲状腺癌中的功能以及其影响血管生成的分子机制。方法生信分析靶基因在甲状腺癌组织中的表达量及其富集通路,预测靶基因潜在的上游转录因子并分析其表达量与靶基因的相关性以及结合位点。双荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀(ChIP)实验验证基因之间的结合关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测靶基因的表达水平,western blot检测信号通路和血管形成相关蛋白的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和血管形成实验检测细胞活力和血管形成能力。结果生信分析确定MFAP2在甲状腺癌中高表达(P<0.05),qRT-PCR发现MFAP2在甲状腺癌细胞FTC-133、TCP-1和IHH-4显著高表达于人甲状腺正常细胞NTHYORI3-1(均P<0.05)。MFAP2富集在Notch信号通路上,Runt相关转录因子1(RUNX1)与MFAP2表达呈正相关,RUNX1与MFAP2上游2000 bp处有结合位点。qRT-PCR实验证实RUNX1与MFAP2在甲状腺癌细胞中高表达(P<0.05),双荧光素酶报告实验和ChIP实验验证了RUNX1与MFAP2之间存在靶向结合关系。CCK-8实验和血管形成实验证实MFAP2通过激活Notch信号通路促进甲状腺癌细胞的活力和肿瘤的血管生成。回复实验证实RUNX1/MFAP2轴通过Notch轴促进甲状腺癌的血管生成。结论RUNX1/MFAP2/Notch信号网络在甲状腺癌进展中有促癌机制,提示抑制该调控网络的药物开发可能是甲状腺癌治疗的新途径。

羽扇豆醇可能通过调控Notch信号通路抑制肺癌A549细胞恶性进展

目的探讨羽扇豆醇通过调控Notch信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的机制。方法体外培养肺癌细胞A549,用浓度为0、15、30、60 mg/L的羽扇豆醇处理细胞,其中0 mg/L记对照组,其余记为羽扇豆醇各剂量组;采用浓度为60 mg/L羽扇豆醇和浓度为10μmol/L Notch通路抑制剂DAPT处理细胞,记为羽扇豆醇+DAPT组。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测细胞增殖核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、神经钙粘素(N-cadherin)、上皮钙粘素(E-cadherin)、Notch-1、发状分裂相关增强子(Hes-1)蛋白表达。结果15、30、60 mg/L羽扇豆醇组能明显抑制肺癌细胞的活力、迁移和侵袭细胞数目,提高凋亡率,降低PCNA、N-cadherin、Bcl-2、Hes-1、Notch-1表达,上调E-cadherin表达(P<0.05)。与羽扇豆醇组相比,羽扇豆醇+DAPT组明显降低细胞活力、迁移细胞数目、侵袭细胞数目,增加细胞凋亡率,降低PCNA、Bcl-2、Hes-1、Notch-1、N-cadherin蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。结论羽扇豆醇可能通过Notch信号通路阻碍肺癌细胞侵袭、迁移和增殖,诱导凋亡。

Notch信号通路在肝纤维化中的作用及中医药调控机制研究进展

肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝细胞受损后细胞外基质在肝组织中的过度沉积与异常分布状态。据统计,全球肝纤维化的患者发病率高达1%~2%,每年超过100万人死于肝纤维化的并发症[1]。目前,引发肝纤维化的主要原因包括病毒、酒精、肥胖和胆汁淤积,其发病机制主要是由于各种病因造成肝细胞损伤,从而诱导肝星状细胞(HSCs)活化,HSCs被激活后转变为肌成纤维细胞(MFs)并大量增殖,分泌胶原物质构成细胞外基质(extracellular matrix,ECM),ECM的过度沉积导致肝纤维化的发生[2]。

YAP调控Notch信号通路影响小鼠NASH肝纤维化的机制及慈菇消脂方的干预作用

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)调控Notch信号通路影响非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝纤维化的机制及解毒化痰法中药慈菇消脂方的干预作用。方法将小鼠随机分为正常组、NASH肝纤维化模型组、维替泊芬(VP)组、VP+中药低剂量组、VP+中药高剂量组和DMSO对照组。采用蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食联合小剂量CCl4建立小鼠NASH相关肝纤维化模型,采用HE、Masson染色观察肝脏纤维化程度,ELISA法检测肝纤维化四项,碱水法测定小鼠肝脏中羟脯氨酸含量,免疫组织化学法检测α-SMA、ColⅠ、YAP、Notch1蛋白在肝脏中的定位,Western blotting及实时定量PCR检测Notch信号通路中Notch1/2、Jagged1和DLL4蛋白及mRNA表达。结果NASH肝纤维化组小鼠肝细胞肿胀、胞质透明,肝小叶、门管区以及窦周均存在明显纤维化,并伴有大量炎症细胞浸润及多量脂肪小滴,局部出现肝细胞坏死、溶解以及肝硬化;肝纤维化四项指标显著升高(P<0.01);肝细胞中α-SMA、ColⅠ、YAP以及Notch1定位于细胞质中;肝脏中YAP、Notch1/2及Jagged1均呈高表达(P<0.01)。经VP及VP联合高、低剂量中药慈菇消脂方分别干预后,小鼠肝脏中YAP、Notch1/2及Jagged1均呈低表达(P<0.05),DLL4因子在VP联合中药高剂量组上调(P<0.05)。结论YAP可能通过下调Notch1/2、Jagged1及上调DLL4,抑制Notch通路活化,干预NASH肝纤维化发生。中药慈菇消脂方通过多成分、多靶点下调YAP、Notch1/2、Jagged1、上调DLL4,抑制Notch信号通路活化,改善NASH肝纤维化进展。

党参炔苷调节AKT/GSK-3β/snail信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探究党参炔苷(LOB)调节蛋白激酶B(AKT)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/Snail信号通路对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将GC细胞株SGC7901随机分为对照组(Control组)、低浓度LOB组(LOB-L组,10μmol/L LOB)、中浓度LOB组(LOB-M组,20μmol/L LOB)、高浓度LOB组(LOB-H组,40μmol/L LOB)和高浓度LOB+AKT激活剂SC79组(LOB-H+SC79组,40μmol/L LOB+20μmol/L SC79)。CCK-8法检测5组细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定5组细胞AKT、GSK-3β、snail1 mRNA的表达。Western Blot检测5组细胞AKT/GSK-3β/snail信号通路和凋亡、EMT过程相关蛋白表达。结果与Control组比较,LOB-M组、LOB-H组SGC7901细胞OD450值(48 h、72 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数目、AKT、GSK-3β、snail1 mRNA表达和AKT、GSK-3β磷酸化水平、snail1、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。SC79减弱了LOB对GC细胞增殖和EMT的抑制作用,抑制了细胞凋亡。结论LOB可能通过下调AKT/GSK-3β/snail信号通路抑制GC细胞增殖和EMT过程,促进细胞凋亡。