Notch信号转导通路在原代肝星状细胞体外培养活化中的作用

目的探讨Notch信号转导通路在肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)体外培养活化中的作用。方法采用两步酶灌注法分离培养原代大鼠HSC并进行体外培养。激光共聚焦显微镜检测体外培养HSC第1天和第7天时形态、胞内维生素A、静止标志胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和活化标志α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的变化。采用RTPCR和Western blot检测HSC体外培养0天、3天和7天时上皮-间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关分子α-SMA、Ⅰ型胶原(collegenⅠ)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、蜗牛家族转录抑制因子1(snail family transcriptional repressor 1,Snail 1)等和Notch信号转导通路(受体Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4与靶基因Hes1、Hey1、Hey2、HeyL)的变化。使用Notch受体阻断剂DAPT干预后,检测体外培养的HSC中活化相关分子(α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snail 1等)的改变。结果 (1)初分离的HSC经7天体外培养后逐渐向肌成纤维细胞(myofibroblasts, MFs)样转化,表现为形态变长、维生素A水平和GFAP表达降低,α-SMA表达升高。(2)RT-PCR与Western blot结果表明,HSC体外培养存在自发EMT现象,表现为α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snai l表达上调及E-cadherin、CK7、CK19和Desmoplakin表达下调,同时Notch 2、Notch 3及Notch靶基因Hey2、HeyL表达逐渐增加。(3)使用DAPT后,可显著抑制原代HSC体外活化,表现为α-SMA、CollegenⅠ、N-cadherin和Snail 1的下调及E-cadherin、CK 7、CK 19和Desmoplakin转录或蛋白表达水平上调。结论 Notch信号转导通路的激活可能参与HSC的活化,可能是抗肝纤维化治疗的潜在靶点。

Notch信号转导通路在老年膝骨关节炎软骨中的表达及意义

目的探讨Notch信号转导通路在与老年患者膝关节骨性关节炎的相关性。方法选取老年膝骨关节炎并屈曲内翻畸形采取人工全膝关节置换术的患者35例,作为观察组;选取膝关节外伤行关节镜手术治疗患者13例,作为对照组。观察组取术中截骨成形去除的股骨髁负重面的退变软骨组织,对照组取因外伤脱落需要去除的股骨髁软骨组织。进行HE染色、番红O-固绿染色,观察软骨组织病变情况及免疫组织化学检测Notch1、Jagged1的表达情况。结果从组织病理学观察,观察组软骨表面粗糙变薄,软骨细胞数目大量减少,细胞排列不整齐,潮线不连续,软骨基质染色明显不均匀;对照组软骨面光滑,细胞排列整齐,潮线完整连续,软骨基质染色均匀。番红O-固绿染色结果,观察组软骨细胞数明显减少,排列成簇,番红染色深染或失染,钙化层变薄,潮线间隙增宽;对照组软骨细胞排列较均匀,番红染色轻染,潮线连续。免疫组化结果显示,观察组中Notch1为0.51±0.14、Jagged1为0.45±0.07;观察组中Notch1为0.22±0.11、Jagged1为0.27±0.09,观察组与对照组比较差异有统计学意义。结论Notch信号转导通路与老年骨关节炎膝关节软骨退行性改变密切相关,可能参与调控老年膝骨关节炎发生、发展的病理改变。

Notch信号转导通路对神经干细胞的调控

神经干细胞增殖、分化机制研究为神经系统疾病治疗提供了新的途径 ,具有巨大的潜在应用价值和理论研究意义。已发现Notch信号对神经干细胞的维持和抑制分化发挥着决定性作用 ,Notch信号由Notch受体、DSL(Delta/Serrate/LAG 2 )配体 ,CSL(CBF1/SuppressorofHairless(Su(H) ) /LAG 1)DNA结合蛋白和一些蛋白水解酶组成。本文主要综述了Notch信号通路及其在调控神经干细胞的增殖。

Notch信号转导通路与阿尔茨海默病发病机制相关性的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是最常见的神经退行性疾病之一,发病机制尚不明了。本文就中枢神经系统中Notch受体蛋白的结构、Notch信号转导通路及其与AD相关性的研究进展进行了综述。

Notch信号转导通路在骨发育与骨重建中的作用

Notch信号转导通路是一广泛存在且高度保守的信号通路,参与细胞的增殖、分化和凋亡,并在胚胎发育和组织更新中起重要作用。骨重建的过程包括骨形成以及骨吸收。源于间充质干细胞的成骨细胞形成骨,以及单核细胞的破骨细胞吸收骨,二者协同在骨发育和骨重建过程中发挥重要作用。本文重点阐述Notch信号转导通路促进骨发育,调节基质干细胞的分化定型,以及调控成骨、破骨分化与功能,进而影响骨重建。

AW915115参与大鼠再生肝星形细胞的Notch信号转导

为了解新基因AW915115在Notch信号通路中的作用及与大鼠肝再生的相关性,用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选方法分离大鼠再生肝的8种细胞,用Rat Genome 230 2.0芯片等检测上述细胞的Notch信号通路基因在大鼠肝再生中的表达变化,用BLAST、Microsoft Excel等软件分别分析新基因与已知基因的序列同源性和共表达关系,用生物信息学和系统生物学等方法分析上述基因参与的生理活动.结果表明,AW915115与活化Notch受体的N-乙酰葡糖基转移酶基因lfng同源,并且在2 h和12 h再生肝星形细胞中表达下调.根据上述基因的同源性和共表达关系推测,新基因AW915115参与大鼠再生肝星形细胞的Notch信号转导.

Notch信号转导通路在肝纤维化形成中的作用与分子机制

慢性肝病及其并发症严重危害人类健康。各种原因导致的慢性肝病可经过肝纤维化阶段最终进展至肝硬化,而肝纤维化甚至早期肝硬化是可逆转的。因此,除强调针对肝病的基础病因防治外,临床中还迫切需要抗肝纤维化治疗。然而,目前尚缺乏公认的行之有效的治疗药物。因此,需要更深入地理解肝纤维化形成、进展和逆转的细胞分子机制,从而开发针对特异性靶点的药物,最终实现临床转化。Notch信号转导通路在肝纤维化形成中的作用近年来倍受关注,其可能是抗肝纤维化治疗的新的潜在靶点,值得进一步探索。本文就Notch信号转导通路在肝纤维化形成中的作用与分子机制进行综述。

基于Notch信号转导通路洋川芎内酯Ⅰ对大鼠颅脑损伤后中枢神经再生修复作用

目的研究洋川芎内酯Ⅰ(SEⅠ)基于Notch信号转导通路对颅脑损伤大鼠中枢神经再生修复功能的影响。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,SEⅠ低(SEⅠ-L,36 mg·kg^(-1))、中(SEⅠ-M,72 mg·kg^(-1))、高(SEⅠ-H,144 mg·kg^(-1))剂量组以及SEⅠ(144 mg·kg^(-1))+γ分泌酶抑制剂DAPT(50μg·kg^(-1))组,每组15只。采用改良Feeney自由落体法制备大鼠颅脑损伤模型,于造模成功后24 h内完成第一次给药,连续给药7 d;假手术组仅开颅不致伤。给药结束后对大鼠进行神经功能缺损评分(NSS);采用ELISA法检测外周血清脑源性神经营养因子(BDNF)与神经生长因子(NGF)含量;HE染色观察海马齿状回颗粒下区组织病理变化,q RT-PCR法检测海马组织中Notch1 mRNA的表达情况,Western blot法检测海马组织中Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达水平。结果HE染色结果显示,假手术组大鼠海马形态正常,未见损伤;模型组存在明显结构异常,神经元坏死、排列紊乱;SEⅠ3个剂量组随药物剂量升高,神经元排列逐渐整齐有序,坏死情况改善;SEⅠ+DAPT组与SEⅠ-H组相比,神经元改善情况较差。与假手术组比较,模型组大鼠NSS,外周血清BDNF、NGF含量以及海马组织中Notch1 mRNA和Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,SEⅠ3个剂量组NSS均显著降低,BDNF、NGF含量以及Notch1 mRNA和Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达均显著升高(P<0.05),且存在剂量依赖性(P<0.05);与SEⅠ-H组比较,SEⅠ+DAPT组NSS显著升高,BDNF、NGF含量以及Notch1 mRNA和Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论SEⅠ能够促进颅脑损伤大鼠中枢神经的再生修复,其机制可能与Notch信号转导通路有关。

Notch信号转导通路与乳腺癌靶向治疗

Notch信号转导通路参与调控细胞增生、分化及凋亡。异常的Notch信号转导通路可以诱导转基因鼠乳腺癌的发生，而在乳腺癌患者中，高表达Notch受体和（或）配体则与预后不良相关，因此靶向抑制Notch信号转导通路可能对乳腺癌治疗有益。

糖肾宁对糖尿病肾病KKAy小鼠的肾脏保护作用及其对Notch/Snail1信号转导通路的影响

目的:明确糖肾宁是否通过干预Notch/snail1通路抑制KKAy小鼠糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化肾间质纤维化。方法:KKAy小鼠30只,经过10周专用鼠料饲养,血糖>16.7 mmol·L-1,24 h尿蛋白>0.4 mg为糖尿病肾病动物模型。造模成功小鼠按血糖和体质量分层随机分为模型组、厄贝沙坦组与糖肾宁组,灌胃给药,雌性C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。检测小鼠一般状况,称体重、测24 h尿蛋白定量。干预16周后取材,检测血糖、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、血清肌酐(Serum creatinine,Scr);肾组织行HE、Mallory染色。原位杂交及Western blotting法检测小鼠肾组织中Notch/snail1通路、α-SMA、E-Cadherin蛋白及m RNA表达。SPSS20.0软件进行统计学处理。结果:与模型组比较,糖肾宁组小鼠一般状态改善,体质量、24 h尿蛋白定量显著减少(P<0.01),血清BUN及Scr含量降低(P<0.01,P<0.05),病理染色显示肾间质纤维化明显减轻,糖肾宁组肾组织Notch/snail1通路和α-SMA蛋白及m RNA表达明显降低,有显著统计学差异(P<0.01),E-Cad蛋白及m RNA表达显著升高(P<0.01)。结论:糖肾宁可以保护糖尿病肾病肾功能,延缓糖尿病肾病进展,抑制糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化肾间质纤维化,改善糖尿病肾病EMT的机制可能是通过抑制Notch/snail1通路表达实现。

人巨细胞病毒感染对人神经干细胞定向星形胶质细胞分化过程中Notch相关信号分子表达的影响

目的人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染可抑制神经干细胞（neural stem cell,NSC）的增殖和分化,Notch信号对NSC的增殖和分化具有重要的调控功能。文中研究HCMV感染对人NSC向星形胶质细胞分化过程中Notch信号相关分子Notch1~3、Jagged（JAG）1、delta-like（DLL）1及早老素（presenilin,PS）1表达的影响。方法体外分离培养海马NSC,并诱导其向星形胶质细胞分化。同时以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为5的HCMV AD169株感染NSC,分别在感染后0、1、3、5、7 d收获细胞,用实时RT-PCR法检测细胞内Notch1-3及其受体JAG1、DLL1的转录水平,Westernblot法检测Notch1细胞内段（Notch 1 intracellular domain,NICD）含量的变化。结果未分化状态的NSC含有大量Notch1NICD,Notch1-3、JAG1、DLL1mRNA呈高表达。诱导分化1d后,Notch各受体、配体mRNA表达均显著下降,3 d后表达回升,至第7天显著升高且可检出大量激活的NICD。HCMV感染组细胞在诱导分化1 d后Notch相关受体、配体mRNA水平亦明显下降,与对照组相比Notch1、Notch2和DLL1的表达更少。在以后各个时间点Notch相关受体、配体mRNA水平均低于对照组。PS1的表达仅在1 d时低于对照组。病毒感染7 d后,细胞内NICD含量明显低于对照组。结论HCMV感染可抑制Notch相关受体、配体的表达与活化,Notch信号异常表达参与HCMV感染所致NSC分化和增殖异常。

补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号通路Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达的影响

目的探讨补肾生髓方和益气活血方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch信号转导通路Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达的影响。方法采用线栓法复制右侧大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组和益气活血方组。脑缺血2h后,持续灌注7d。采用PCR检测额顶叶皮质Nurr1、SMO mRNA表达水平,采用Western blot检测其蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达水平均明显上调(P<0.05);益气活血方组和补肾生髓方组Nurr1mRNA及其蛋白、SMO蛋白相对表达水平均较模型组明显下调(P<0.05);模型组、益气活血方组和补肾生髓方组SMO mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);益气活血方组与补肾生髓方组Nurr1、SMO蛋白表达水平有显著差异(P<0.05)。结论补肾生髓方和益气活血方促进脑组织修复的作用与其下调Notch信号转导通路中Nurr1、SMO mRNA及其蛋白表达有关。

缬沙坦抑制高糖刺激下系膜细胞血管紧张素Ⅱ-Notch通路

目的探讨血管紧张素Ⅱ-Notch通路对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(RMC)基质分泌的影响以及缬沙坦的保护作用。方法将传代培养的RMC同步化后分为正常糖对照组(含5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(含30.0 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(含5.5 mmol/L葡萄糖联合24.5 mmol/L甘露醇)、正常糖联合1μmol/L N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)组、正常糖联合(1、5、10)μmol/L缬沙坦组、高糖联合1μmol/L DAPT组、高糖联合(1、5、10)μmol/L缬沙坦组。培养12、24、48 h后,收集细胞及上清液,Western blot法检测Notch1蛋白表达情况,ELISA检测上清液转化生长因子β(TGF-β)、纤维连接蛋白(FN)的水平。结果与正常糖组相比,高糖刺激RMC 12 h,可检测到Notch1表达升高,峰值出现在24 h;与正常糖组相比,高糖状态下RMC上清液中TGF-β、FN含量随时间明显升高;高糖状态下缬沙坦或DAPT预处理组与未处理组相比,培养24 h左右,Notch1表达明显减少;与未处理组相比,随缬沙坦浓度增加,Notch1表达逐渐降低。高糖状态下,与未处理组相比,缬沙坦或DAPT预处理组TGF-β、FN水平均明显下降。结论高糖可活化培养的RMC中Notch通路,TGF-β以及FN分泌增加;缬沙坦可通过浓度依赖性的方式抑制血管紧张素Ⅱ-Notch通路,减少下游FN的分泌。

六味地黄汤及其拆方对正常小鼠和SAMP8胸腺淋巴细胞分化相关基因表达的影响

目的:研究六味地黄汤及其"三补(SB)"、"三泻(SX)"拆方对正常小鼠和快速老化模型小鼠(SAMP8)胸腺淋巴细胞分化相关的Notch信号转导通路基因表达的影响。方法:以荧光实时定量PCR方法检测Notch1、PS1、PS2、HES1等基因表达的变化。结果:口服LW(5、10、20g/kg)可明显促进正常小鼠胸腺细胞PS2、HES1基因的表达;口服LW(10g/kg)及其SB、SX拆方,可不同程度地降低SAMP8的PS2、HES1基因表达水平。结论:LW可增强正常的小鼠胸腺细胞Notch信号强度;对免疫老化的SAMP8,LW能够降低胸腺细胞Notch信号强度。

NOTCH、VEGF信号通路在急性髓性白血病发生及血管新生中的作用

急性髓性白血病（acute myeloid leukemia,AML）是一种侵袭性很强的造血祖细胞恶性克隆性血液病,近年研究表明AML的发生、发展及化疗敏感性都与血管新生密切相关[1-2]。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）与NOTCH通路在调节胚胎血管发育和肿瘤血管新生（angiogenesis）中起到关键调控作用。然而,

Notch和Wnt信号通路交叉串话在皮肤肿瘤发病机制中的研究进展

Notch和Wnt信号转导通路是2条广泛存在且高度保守的信号转导通路,它们以不同机制调控着诸多代谢过程,在细胞生长、分化、发育和各类疾病的发生、发展过程中发挥重要作用。近期研究表明,Notch和Wnt信号转导通路之间存在交叉串话,并与皮肤肿瘤的发生与发展密切相关。了解Notch和Wnt信号转导通路间的交叉串话在皮肤肿瘤中的作用将有助于揭示皮肤肿瘤的发病机制,为治疗提供新思路。

应用GSI药物阻断Notch-1通路对骨肉瘤小鼠模型肿瘤生长及血管形成的影响

[目的]研究Notch-1通道阻断剂γ分泌酶抑制剂(gamma-secretase inhibitor,GSI)在抑制骨肉瘤小鼠模型中肿瘤增长以及其抑制肿瘤血管生成作用,进而探讨Notch-1信号通路在小鼠骨肉瘤模型中的作用及其作用机制。[方法]建立人骨肉瘤荷瘤SCID小鼠模型,将荷瘤成功后小鼠随机分为三组,实验组肿瘤内注射Notch通路阻断药物GSI,对照组注射PBS和DMSO。研究各组小鼠生物学指标、肿瘤增长变化及肿瘤组织检测微血管密度(microvessel density,MVD)的表达情况与差异。[结果]处死小鼠测量瘤体,同对照组相比,GSI治疗组小鼠的生物学指标明显较好,其小鼠的体重、饮食、睡眠、运动情况、精神状态、对刺激的反应及小鼠的皮毛光泽度等优于对照组,其皮下肿瘤体积明显较小,实验组平均体积为(196.3 mm3)较DMSO对照组平均体积(650.3 mm3)及PBS对照组平均体积(694.6 mm3)明显缩小,差别具有统计学意义,P<0.01。实验组及对照组内瘤体切片内血管均见不同程度的CD31表达,其表达于血管内皮细胞内,与对照组相比实验组CD31表达均明显降低,实验组及PBS、DMSO对照组CD31平均秩次分别为4.03、28.9和32.5,P<0.05,差异具有统计学意义。[结论](1)证实GSI可抑制SCID小鼠骨肉瘤动物模型肿瘤的生长;(2)GSI对SCID小鼠骨肉瘤动物模型的治疗作用可通过抑制Notch通路进而干预肿瘤血管形成来实现;(3)应用GSI药物阻断Notch信号通路有望成为骨肉瘤抗肿瘤治疗的新方法。

Jagged1蛋白在膝关节骨性关节炎软骨组织中的表达

目的:研究Jagged1蛋白在膝关节骨性关节炎关节软骨中表达的特点,探讨Jagged1蛋白的表达对关节软骨病理改变的影响。方法:选取宁夏医科大学总医院骨科2018年11月1日至2019年10月31日34例因膝关节骨性关节炎行全膝关节置换的患者,取术中去除的股骨髁软骨组织,磨损较重的一侧为负重区(实验组),磨损较轻的一侧为非负重区(对照组)。通过番红、HE染色观察软骨组织形态学变化,通过免疫组织化学检测Jagged1蛋白在不同软骨组织中的表达强度,对比分析Jagged1蛋白表达的差异对关节软骨病变的影响。结果:外观照可见实验组软骨面色泽暗淡,表面粗糙,有大量软骨缺失,对照组软骨面较平整,呈白色,未见软骨明显缺失;HE染色可见实验组软骨面不整,软骨细胞排列紊乱,呈簇状分布,对照组软骨面平整,软骨细胞数量多,胞质丰富;番红染色见实验组软骨组织残留较少,软骨层结构模糊不清,软骨细胞较少,对照组软骨层次结构清晰,软骨细胞及软骨下骨细胞排列整齐;免疫组化可见Jagged1蛋白实验组软骨中有较多阳性表达,在对照组中表达较少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Jagged1蛋白在软骨中的表达强度与关节软骨的磨损程度呈正相关,在膝关节骨性关节炎的病理变化过程中有着重要的作用。

β-雌二醇对小鼠子宫内膜Hes-1基因表达的影响

目的:研究β-雌二醇(E2)对去卵巢小鼠子宫内膜组织中Hes-1基因表达水平的影响。方法:将16只雌性昆明系(KM)小鼠随机平均分为卵巢切除生理盐水干预组(OVX+NS)和卵巢切除β-雌二醇干预组(OVX+E2);采用Trizol一步法抽提内膜组织总RNA,进行RT-PCR实验,扩增出Hes-1基因和内参基因(GAPDH)目标条带,采用QuantityOne-4.6.2凝胶分析软件对Hes-1基因与GAPDH基因的目标带进行半定量分析。结果:OVX+NS组和OVX+E2组小鼠子宫内膜组织中Hes-1基因mRNA的相对表达强度分别为:0.16±0.06和0.06±0.01,P<0.05,具有统计学差异。结论:高剂量的β-E2可能通过下调Hes-1基因的表达促进子宫内膜上皮细胞增生,Hes-1基因和ER活性状态之间的相互作用可能在子宫内膜疾病的发展机制中发挥了重要作用。