声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1、果蝇母亲DDP同源物4表达水平与术后复发和恶变的相关性研究

目的探讨声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP-1)、果蝇母亲DDP同源物4(drosophila mothers against DDP homolog 4,Smad4)表达水平与术后复发和恶变的相关性。方法回顾性分析2018年8月~2021年8月郑州大学第一附属医院收治的162例声带癌前病变患者的临床和病理资料,收集手术切除癌前病变组织(癌前病变组)及病变旁正常黏膜组织(对照组),采用免疫组织化学法检测组织中TIMP-1、Smad4表达情况。分析TIMP-1、Smad4阳性率与临床病理特征的关系,并采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析法分析其对术后复发和恶变的影响。结果与对照组正常黏膜组织比较,癌前病变组的TIMP-1阳性率较高,Smad4阳性率较低(P<0.05)。不同病变范围、是否累及前连合、不同程度上皮异常增生患者的TIMP-1、Smad4阳性率存在差异(P<0.05)。术后随访时间24~60个月,中位随访时间36个月,随访期间失访患者6例,随访率96.30%(156/162),随访期间术后复发35例(21.60%),术后恶变16例(9.88%);Kaplan-Meier生存分析显示,TIMP-1阳性患者术后复发率和恶变率高于TIMP-1阴性患者(P<0.05);Smad4阴性患者术后复发率和恶变率高于Smad4阳性患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,喉咽反流、病变范围>1/2、中/重度异型增生、TIMP-1阳性、Smad4阴性是复发的独立危险因素(P<0.05),年龄>60岁、累及前连合、TIMP-1阳性、Smad4阴性是恶变的独立危险因素(P<0.05)。结论声带癌前病变组织中TIMP-1高表达、Smad4低表达,且TIMP-1阳性、Smad4阴性表达者术后复发和恶变风险较高。

BTB与CNC同源蛋白1通过调节MYC相关因子X二聚化蛋白1基因对套细胞淋巴瘤发生发展的影响

目的 探讨BTB与CNC同源蛋白1(BACH1)通过调节MYC相关因子X二聚化蛋白1(MXD1)基因对套细胞淋巴瘤(MCL)发生发展的影响。方法 采用靶向剪切及转座酶技术(CUT&Tag)检测BACH1下游靶基因,并通过序列比对分析寻找BACH1与MXD1的结合位点。通过双荧光素酶报告基因系统验证BACH1对MXD1的调控作用,并采用慢病毒技术构建BACH1过表达及敲低的稳转MCL细胞株,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测MXD1蛋白表达水平。应用GSE16411数据集分析MCL细胞和正常B细胞中MXD1 m RNA相对表达量。应用GSE132929及GSE21452数据集筛选MXD1共表达基因,对MXD1共表达基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。采用噻唑蓝(MTT)法检测MXD1正相关基因应激诱导磷蛋白1同源物含U-框蛋白1(STUB1)的特异性激活剂YL109处理后MCL细胞的活力。结果 BACH1能够靶向结合MXD1并抑制MXD1基因的启动子活性。BACH1敲低后MXD1蛋白表达水平升高,而BACH1过表达后MXD1蛋白表达水平降低。通过GSE16411数据集分析发现,MCL细胞中MXD1 mRNA相对表达量明显低于正常B细胞,差异有统计学意义(P﹤0.01)。在GSE132929数据集中筛选出2222个MXD1共表达基因,在GSE21452数据集中筛选出503个MXD1共表达基因。GO分析显示,MXD1共表达基因主要富集于信号转导、蛋白质磷酸化、细胞葡萄糖醛酸化、类黄酮葡萄糖醛酸化等代谢相关的生物学过程;KEGG信号通路分析显示,MXD1共表达基因主要富集于肝脏发育的代谢途径、蛋白质的消化和吸收、Janus激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路等。采用YL109处理MCL细胞后可显著降低细胞存活率。结论 BACH1通过结合MXD1近端启动子负向调控MXD1的表达水平,且BACH1介导的MXD1表达改变很可能通过调控代谢过程参与MCL的发生发展。

微RNA-204-5p、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1在新生儿肺炎血清中的表达

目的 探讨微RNA-204-5p(miR-204-5p)、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)在新生儿肺炎(NP)病儿血清中的表达变化及其在病情评估及预后预测中的临床价值。方法 选取2021年10月至2022年5月张家口市妇幼保健院收治的NP病儿80例为NP组,另选取同期该院出生的健康新生儿80例为对照组。检测血清miR-204-5p、ZEB1、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及C反应蛋白(CRP)水平并比较;采用Pearson法分析NP病儿血清miR-204-5p、ZEB1水平及其与临床指标的相关性;应用受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-204-5p、ZEB1及二者联合预测NP不良预后的价值。结果 NP组血清miR-204-5p水平(0.47±0.16比1.01±0.21)、血氧饱和度[(83.99±6.15)%比(95.32±6.74)%]显著低于对照组,血清ZEB1[(4.76±0.71)ng/L比(2.15±0.36)ng/L]、CK、CK-MB[(46.25±12.52)U/L比(23.22±9.64)U/L]及CRP水平[(18.09±4.29)mg/L比(3.31±0.71)mg/L]均显著高于对照组(P<0.05)。重症组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度显著低于轻症组,血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于轻症组(P<0.05)。血清miR-204-5p与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈负相关(r=-0.33、-0.30、-0.40,P<0.05),与血氧饱和度呈正相关(r=0.41,P<0.05);血清ZEB1水平与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈正相关(r=0.28、0.37、0.44,P<0.05),与血氧饱和度呈负相关(r=-0.36,P<0.05);血清miR-204-5p与ZEB1水平呈负相关(r=-0.56,P<0.05)。预后不良组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度低于预后良好组(P<0.05),血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-204-5p对NP不良预后预测的AUC为0.89,截断值为0.47,其灵敏度、特异度分别为95.12%、72.41%;ZEB1对NP不良预后预测的AUC为0.92,截断值为5.16,其灵敏度、特异度分别为87.80%、86.21%;二者联合对预后预测的AUC为0.99,明显高于二者单独诊断,其灵敏度、特异度分别为97.56%、94.83%。结论 miR-204-5p在NP病儿血清中低表达,ZEB1在NP病儿血清中高表达,均与NP病情严重程度有关,二者联合对NP不良预后具有较高的预测价值。

分裂相关增强子1、细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C在直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split related protein 1,HESR-1)、细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(Cell division cycle 25C,CDC25C)在直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法选择166例行根治性手术的直肠癌患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中HESR-1和CDC25C的表达,收集患者临床病理参数并进行随访,分析HESR-1和CDC25C表达对直肠癌患者临床病理参数及预后的影响。结果肠癌组织中CDC25C、HESR-1的阳性率均高于癌旁组织(46.9%vs 12.6%,41.6%vs 7.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。在癌组织中,CDC25C mRNA与HESR-1 mRNA的表达呈正相关(r=0.862,P=0.003)。癌组织CDC25C及HESR-1表达阳性患者的肿瘤直径和淋巴结转移率均高于表达阴性者(P<0.05)。Cox多因素分析结果显示,肿瘤直径、淋巴结转移、CDC25C阳性及HESR-1阳性是影响直肠癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论HESR-1和CDC25C在直肠癌组织中表达升高,且与患者预后密切相关。

藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎鼠软骨组织Notch1、Jagged1、炎性反应因子及基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨Notch/Jagged1信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型鼠软骨组织炎性反应因子及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)表达的影响,并揭示藤黄健骨胶囊可能的干预机制。方法60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组[0.27 g/(kg·d)]及藤黄健骨胶囊干预组[高剂量0.36 g/(kg·d)、中剂量0.18 g/(kg·d)、低剂量0.09 g/(kg·d)],每组10只。除假手术组外,其余5组采用改良Hulth法构建KOA大鼠模型,模型制备成功后,分别给予仙灵骨葆胶囊及相应剂量的藤黄健骨胶囊灌胃给药,假手术组和模型组给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液。给药2个月后股动脉采血处死大鼠,取患侧膝关节软骨采用苏木精-伊红(HE)染色观察关节软骨组织的形态变化;ELISA法检测关节软骨组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Notch1和Jagged1含量变化;免疫组化法观察关节软骨组织中Col-Ⅱ、MMP-9、MMP-13、Notch1和Jagged1蛋白表达变化。结果与假手术组比较,模型组关节面脱落、严重破坏,软骨细胞分布紊乱;模型组软骨细胞Mankin(5.56±0.85)评分、IL-1β(11.13±2.19)、TNF-α(98.29±9.13)、Notch1(5.03±0.37)和Jagged1(222.54±36.87)含量均显著升高,MMP-9(1.54±0.72)、MMP-13(0.41±0.04)、Notch1(0.39±0.05)和Jagged1(0.38±0.05)等蛋白的免疫反应性均显著增强,Col-Ⅱ(0.15±0.04)蛋白的免疫反应性则显著降低(P<0.05)。与模型组比较,藤黄健骨胶囊0.36 g/(kg·d)剂量组软骨细胞形态和分布趋于正常;其软骨组织Mankin(2.86±0.48)评分显著降低,Col-Ⅱ(0.39±0.03)蛋白的免疫反应性则显著增强(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18 g/(kg·d)剂量组Jagged1(170.54±41.09、183.46±33.12)含量显著降低,MMP-9(0.68±0.25、1.14±0.49)和Jagged1(0.21±0.05、0.26±0.07)等蛋白的免疫反应性也均显著降低(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18、0.09 g/(kg·d)剂量组IL-1β(5.71±1.03、8.71±1.53、8.81±2.31)、TNF-α(63.42±10.01、67.46±11.68、71.88±15.63)和Notch1(2.95±0.39、3.56±0.37、4.22±0.33)含量均显著降低,同时MMP-13(0.21±0.02、0.27±0.04、0.31±0.09)和Notch1(0.19±0.06、0.24±0.05、0.28±0.04)等蛋白的免疫反应性也均显著降低。结论藤黄健骨胶囊可能通过促进KOA模型鼠关节软骨组织Notch/Jagged1信号通路下游蛋白Col-Ⅱ表达,抑制其Notch/Jagged1信号通路关键蛋白Notch、Jagged1、炎性反应因子及MMPs表达,延缓关节软骨退变,从而改善KOA的临床症状。

EGFR和Notch1在女性甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)和神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch1)在女性甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2019年1月—2020年1月于孝感市中心医院行手术治疗的90例女性甲状腺乳头状癌患者作为研究对象,收集其病理标本与癌旁正常甲状腺组织,采用免疫组化法检测标本中EGFR及Notch1的表达水平。比较EGFR和Notch1在甲状腺乳头状癌、癌旁正常组织中的阳性表达率,分析EGFR、Notch1表达与甲状腺乳头状癌临床病理特征,EGFR与Notch1在女性甲状腺乳头状癌组织表达的相关性。结果:EGFR和Notch1在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段甲状腺乳头状癌患者EGFR阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);发生淋巴结转移的患者EGFR阳性表达率高于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P=0.001)。不同年龄段甲状腺乳头状癌患者Notch1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);发生淋巴结转移的患者Notch1阳性表达率高于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P=0.002)。EGFR、Notch1在女性甲状腺乳头状癌中的表达水平呈正相关(r=0.329,P=0.002)。结论:甲状腺癌组织中EGFR和Notch1呈高表达,EGFR和Notch1可能与肿瘤淋巴结转移有关,且EGFR和Notch1可能存在协同作用。

磷酸酶及张力蛋白同源物、AT丰富结合域1A基因及昼夜运动输出周期在子宫内膜异位症相关卵巢癌组织中的表达及诊断价值

目的 探讨子宫内膜异位症相关卵巢癌(EAOC)组织中磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)、AT丰富结合域1A基因(ARID1A)及昼夜运动输出周期(CLOCK)的表达,分析PTEN、ARID1A、CLOCK预测EAOC发生风险的价值。方法 回顾性收集2016年3月—2020年3月本院收治的30例EAOC患者的资料,并设为EAOC组;采集同期收治的30例未发生EAOC的单纯子宫内膜异位症(EMS)患者的资料,并设为非EAOC组。比较2组患者入院时病变组织的PTEN、ARID1A及CLOCK的表达,分析上述指标与EAOC发生的关系。结果 与非EAOC组相比,EAOC组患者癌组织的PTEN与ARID1A蛋白及基因相对表达量较低,CLOCK蛋白及基因相对表达较高,差异有统计学意义(P<0.01)。Logistic回归分析显示,PTEN、ARID1A及CLOCK基因异常表达可能与EAOC发生有关,其中PTEN和ARID1A是EAOC发生的保护因子,CLOCK是促进EAOC发生的风险因子(OR>1,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,癌组织的PTEN、ARID1A及CLOCK单独及联合预测EAOC发生的曲线下面积(AUC)分别为0.856、0.860、0.870、0.931。结论 未发生EAOC的单纯EMS及EAOC病变组织的PTEN、ARID1A及CLOCK表达存在显著差异;PTEN、ARID1A及CLOCK可能参与了EAOC发生;检测病变组织PTEN、ARID1A及CLOCK有助于临床诊断EAOC,且三者联合检测的诊断价值最高。

老年结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达变化和意义

目的探讨染色体凝缩蛋白复合物I(NCAP)D2、Krüppel样因子(KLF)5蛋白及跨膜受体蛋白Notch1 mRNA对老年结肠癌患者预后的预测价值。方法选取老年结肠癌患者85例,术中采集肿瘤组织和正常组织(距离肿瘤组织5 cm以上),Western印迹检测组织标本中NCAPD2、KLF5蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本中Notch1 mRNA表达。收集老年结肠癌患者的人口学特征和临床病理资料;以患者出院时日期为随访起点,进行3年随访,记录患者生存情况,分为预后良好组(生存),不良组(死亡)。结果老年结肠癌患者结肠癌组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于正常组织(P<0.01)。NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平在不同病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、远端转移情况的结肠癌患者差异均有统计学意义(P<0.01);其中,浸润程度T3~T4、有淋巴结转移、有远端转移的结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于浸润程度T1~T2、无淋巴结转移、无远端转移的结肠癌患者(P<0.01);随着分化程度的降低,结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01)。不良组NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于预后良好组(P<0.01)。构建受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平对老年结肠癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.01);各指标联合检测对老年结肠癌患者预后的预测价值最高。结论老年结肠癌患者肿瘤组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA高表达,且与浸润程度、分化程度及转移情况密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

上皮性卵巢癌组织锌指蛋白反义链1和Notch1表达对患者预后的评估价值

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)组织长链非编码RNA(lncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)、Notch1的表达水平对患者预后的评估价值。方法选取本院2018年1月~2020年1月收治的96例EOC患者为EOC组,将同期卵巢良性肿瘤患者96例作为对照组。使用实时荧光定量PCR法测定所有研究者卵巢组织中ZFAS1、Notch1的表达水平;ROC曲线评估ZFAS1、Notch1诊断EOC的价值,并分析ZFAS1、Notch1表达与EOC患者临床病理特征的关系;使用Kaplan-Meier法绘制EOC患者生存曲线;使用多因素Cox回归分析EOC患者预后的影响因素。结果EOC组组织中ZFAS1、Notch1表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ZFAS1单独诊断EOC曲线下面积为0.861(95%CI:0.803~0.919),截断值为1.59,灵敏度为77.1%,特异度为69.8%;Notch1单独诊断EOC的曲线下面积为0.913(95%CI:0.870~0.955),截断值为1.54,灵敏度为79.2%,特异度为76.1%;ZFAS1表达与EOC患者的FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移、病理分级有关(P<0.05);Notch1表达与EOC患者的FIGO分期、淋巴结转移、病理分级有关(P<0.05);ZFAS1高表达患者(ZFAS1≥1.59)的3年累积生存率低于低表达患者(ZFAS1<1.59),Notch1高表达患者(Notch1≥1.54)的3年累积生存率低于低表达患者(Notch1<1.54),差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Cox回归模型分析表明,FIGO分期、淋巴结转移、ZFAS1、Notch1是影响EOC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论EOC患者癌组织中ZFAS1、Notch1表达水平升高,且ZFAS1、Notch1高表达的EOC患者生存期短,两者有望成为预测EOC预后的有效生物学标志物。

基于Notch1-Hes1-Prdx蛋白家族通路探究强骨胶囊治疗绝经后骨质疏松的炎症及氧化应激机制

目的基于Notch1-Hes1-Prdx蛋白家族通路探究强骨胶囊治疗绝经后骨质疏松(PMOP)的炎症及氧化应激机制。方法60只5月龄清洁级雌性SD大鼠,体重(300±20)g,采用随机数字表法分为假手术组,模型对照组,阳性对照组及强骨胶囊低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立PMOP模型,假手术组仅切除双侧卵巢周边脂肪组织。阳性对照组经皮下注射200μg/kg雌二醇,2次/周;强骨胶囊低、中、高剂量组分别予以100、200、300 mg/(kg·d)强骨胶囊灌胃;假手术组及模型对照组灌胃等量生理盐水,连续治疗12周。比较各组大鼠股骨骨密度(BMD)值,血浆炎症标志物[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、氧化应激标志物水平[单胺氧化酶A(MAOA)、总抗氧化能力(T-AOC)、高级氧化蛋白产物(AOPP)、超氧化物歧化酶(SOD)]及Jagged1、Notch1、Hes1、Prdx蛋白家族(Prdx1~6)的蛋白表达水平;RT-qPCR及Western blot测定外周血单个核细胞(PBMC)及骨组织中的Jagged1、Notch1、Hes1及Prdx1~6 mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠BMD值、T-AOC、SOD水平降低,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平升高;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平升高,Prdx1、Prdx6表达水平降低(P<0.05)。与模型对照组比较,强骨胶囊中、高剂量组大鼠BMD值、T-AOC和SOD水平升高,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平降低;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平降低,Prdx1、Prdx6表达水平升高(P<0.05)。与强骨胶囊低剂量组比较,强骨胶囊中、高剂量组大鼠股骨BMD值、T-AOC和SOD水平升高(P<0.05),IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平降低;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平降低,Prdx1、Prdx6表达水平升高(P<0.05)。与强骨胶囊中剂量组比较,强骨胶囊高剂量组大鼠股骨BMD值、T-AOC和SOD水平升高,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平降低;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平降低,Prdx1、Prdx6表达水平升高(P<0.05)。各组血浆、PBMC及骨组织中Prdx2~5表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论强骨胶囊可能是通过抑制Notch1-Hes1-Prdx信号通路下调Jagged1、Notch1、Hes1表达,上调Prdx1、Prdx6表达,增强机体抗氧化应激能力并改善炎症反应发挥抗骨质疏松作用,其中强骨胶囊作用呈剂量依赖性。

藏红花素通过跨膜受体蛋白/发状分裂相关增强子1信号通路对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的探讨藏红花素对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的作用及其可能机制。方法于2021年1月至2022年1月采用不同浓度藏红花素处理视网膜神经节细胞RGC-5,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活情况并筛选合适浓度。培养RGC-5细胞并用氯化钴(CoCl_(2))处理建立缺氧模型,分为缺氧组、藏红花素组、阳性对照(抗坏血酸)组和藏红花素+跨膜受体蛋白信号通路抑制剂(DAPT)组,另设对照组。Cell counting kit-8法检测细胞存活情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;钙荧光探针(Flou-4)实验检测各组细胞钙离子水平;实时定量PCR法检测跨膜受体蛋白(Notch1)、发状分裂相关增强子1(Hes-1)mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、钙依赖性蛋白酶家族1(Cal⁃pain1)蛋白表达情况。结果藏红花素组细胞活力0.83±0.08高于缺氧组0.45±0.04,细胞凋亡率(17.92±1.21)%低于缺氧组(51.82±5.36)%,钙离子水平0.27±0.04低于缺氧组0.76±0.05,差异有统计学意义(P<0.05);藏红花素+DAPT组细胞活力0.50±0.06低于藏红花素组0.83±0.08,细胞凋亡率(36.50±3.50)%高于藏红花素组(17.92±1.21)%,钙离子水平0.65±0.05高于藏红花素组0.27±0.04,差异有统计学意义(P<0.05)。与缺氧组比较,藏红花素组Bcl-2蛋白表达水平升高,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与藏红花素组比较,藏红花素+DAPT组Bcl-2蛋白表达水平降低,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论藏红花素对体外培养的缺氧RGC-5细胞凋亡有一定的抑制作用,可能是通过抑制钙离子内流,阻滞Notch1/Hes-1通路,提高细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平发挥作用。

基于Notch信号通路探讨芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠Th1/Th2免疫平衡的调节机制

目的探讨果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)辅助性T细胞1(Helper T cells 1,Th1)和辅助性T细胞2(Helper T cells 2,Th2)失衡中的作用及芪蛭皱肺颗粒的干预机制。方法70只Wistar大鼠随机挑选10只作为空白对照组,其余大鼠均采用香烟烟雾(CS)联合气管滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)法建立COPD模型,空白对照组及造模组各随机挑选3只大鼠验证造模是否成功。造模结束进行灌胃给药干预,造模组大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组(67.5μg·kg^(-1))及芪蛭皱肺颗粒高中低剂量组(3.24、1.62、0.81 g·kg^(-1)),分别给予生理盐水、醋酸地塞米松混悬液、芪蛭皱肺高、中、低剂量混悬液进行灌胃干预,空白对照组同模型对照组,灌胃等体积生理盐水。经28天造模及28天治疗后,采用动物肺功能测试系统检测吸气峰流速(Peak Inspiratory Flow,PIF)和呼气峰流速(Peak Expiratory Flow,PEF),处死大鼠提取肺脏、脾脏、血清及支气管肺泡灌洗液(BALF),苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织病理变化,酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定血清及BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,流式细胞仪检测脾脏Th1/Th2细胞水平,免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织Notch1、Hes家族发状分裂相关增强子1(Hes1)、Hey家族发状分裂相关增强子1(Hey1)蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测肺组织Notch1、Hes1、Hey1基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠肺功能显著降低(P<0.05),肺组织出现炎性细胞浸润、支气管结构破坏等病变,血清及BALF中TNF-α含量显著升高(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著降低(P<0.05),Th2细胞百分比显著升高(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05),差异均具有统计学意义;与模型对照组比较,各给药组大鼠肺功能显著升高(P<0.05),肺组织病理损伤均有所减轻,血清及BALF中TNF-α含量显著降低(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著升高(P<0.05),Th2细胞百分比显著降低(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),差异均具有统计学意义。结论芪蛭皱肺颗粒通过抑制Notch信号通路调节Th1/Th2平衡,从而改善COPD大鼠肺功能及病理损伤,影响其免疫功能。

Nicastrin、N1ICD及hes1蛋白在小鼠肝脏及肝癌组织中的表达

目的 检测C57BL/6小鼠正常肝脏和肝癌组织中nicastrin、N1ICD和hes1蛋白的表达。方法 将12只6周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组6只。模型组小鼠注射Hepa1-6肝癌细胞构建小鼠原位肝癌模型,对照组注射等量的生理盐水。HE染色观察肝脏癌变情况。IHC与Western blot检测nicastrin、N1ICD和hes1蛋白在正常肝脏组织及肝癌组织中的表达情况。结果 IHC显示,nicastrin、N1ICD及hes1蛋白在正常肝细胞中均定位于肝窦内皮细胞,肝细胞基本不表达;相比对照组肝脏组织,在模型组小鼠肝癌组织中,nicastrin蛋白在肝癌细胞中表达增多(P <0.01),N1ICD及hes1蛋白表达均减少(P <0.05,P <0.01)。结论 NCSTN基因在小鼠肝细胞癌中发挥促癌作用;notch1与hes1在小鼠肝细胞癌中可能发挥抑癌作用。

NK2同源框蛋白-1在胚胎反复种植失败中的研究进展

胚胎着床是一个复杂的生理过程,除了拥有优质胚胎以外,还需要良好的子宫内膜容受性以及母胎之间的协调对话。NK2同源框蛋白-1(NK2 homeobox protein 1,NKX2-1)是一种含有同源结构域的转录因子。最近研究表明NKX2-1可以通过调控一系列细胞因子及黏附分子的作用影响胚胎着床过程,从而导致反复种植失败(recurrent implantation failure,RIF)的发生。本文就NKX2-1的结构、功能及其与反复种植失败之间的关系做一综述,并对今后研究方向作一展望,以期对RIF的发生机制和防治策略有更深入的了解。

黑色素瘤细胞外泌体通过Prospero同源异形盒蛋白1调控肿瘤淋巴转移机制的研究

目的探讨黑色素瘤外泌体(melanoma exosomes,MM-ex)携带的果蝇Prospero同源异形盒蛋白1(prospero homeobox protein 1,Prox-1),在调控淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)增殖、迁移以及生成具有转移肿瘤细胞功能淋巴管过程中的作用。方法采用慢病毒转染实验构建低表达Prox-1黑色素瘤细胞株(MM^(shProx-1))。采用试剂盒法获取MM和MM-ex^(shProx-1)的外泌体(MM-ex和MM-ex^(shProx-1))。采用免疫荧光检测、蛋白质印迹法检测、细胞增殖及细胞迁移实验,观察MM-ex及MMex^(shProx-1)对LECs生物学特性的影响。采用免疫组化(IHC)法检测2015年9月至2021年4月江苏大学附属医院收治的32例皮肤黑色素瘤病理标本中Prox-1及淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor-1,LYVE-1)的表达情况,统计微淋巴管密度(microlymphatic vessel density,MLVD),并分析Prox-1及MLVD与黑色素瘤生物学特性的相关性。结果细胞实验:MM-ex促进淋巴管内皮细胞增殖及迁移,促进了淋巴管的成形。MM-ex^(shProx-1)对LECs无增殖及迁移的影响,对淋巴管成形无促进作用。临床研究:免疫组化的结果表明Prox-1、LYVE-1在黑色素瘤组织及肿瘤周围组织中的阳性表达率显著高于正常皮肤组织。Prox-1信号在黑色素瘤淋巴结转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达率[87.50%(14/16)、79.17%(19/24)]明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组[37.50%(6/16)、12.50%(1/8)](均P<0.05)。LYVE-1在黑色素瘤转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达(9.30±4.65、5.15±1.72)明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组(5.66±1.69、5.30±1.65,均P<0.05)。Prox-1、LYVE-1的表达情况均与病人的年龄、性别无关(均P>0.05)。结论MM-ex通过Prox-1促进LECs的增殖及迁移,在肿瘤淋巴管再生中起到重要作用。Prox-1、LYVE-1及MLVD与黑色素瘤淋巴转移及预后呈明显相关性,为皮肤黑色素瘤的早期淋巴转移及预后提供一个新的判断指标,也为皮肤黑色素瘤的临床治疗提供新的方法和策略。

血UA、Smad1蛋白、尿mALB含量与2型糖尿病肾病患者达格列净治疗效果的相关性分析

目的观察2型糖尿病肾病患者血尿酸(uric acid,UA)、Smad同源物1(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 1,Smad1)蛋白、尿微量白蛋白(urine microalbumin,mALB)含量,并分析三者与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果的相关性。方法选取2021年6月至2022年9月皖南医学院第二附属医院2型糖尿病肾病患者纳入糖尿病肾病组(n=170),另取同期单纯2型糖尿病患者纳入单纯糖尿病组(n=120),所有患者入院时均接受血UA、Smad1蛋白、尿mALB检测,对比糖尿病肾病组与单纯糖尿病组上述3项指标水平。所有2型糖尿病肾病患者均采用达格列净治疗,随访3个月,观察患者治疗效果。依据治疗效果分为有效组(n=142)与无效组(n=28),对比有效组与无效组血UA、Smad1蛋白、尿mALB含量,分析3项指标与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析上述3项指标对达格列净治疗2型糖尿病肾病效果的预测价值。结果糖尿病肾病组血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平高于单纯糖尿病组(t=8.843、12.097、8.858,P<0.05);治疗3个月后,170例2型糖尿病肾病患者中有效142例(83.53%),无效28例(16.47%);无效组血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平高于有效组(t=3.508、4.622、3.563,P<0.05);经点二列相关性分析结果显示,血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果呈负相关(r=-0.261、-0.336、-0.265,P<0.05);经Logistic回归分析,结果显示,血UA(95%CI:1.001~1.021)、Smad1蛋白(95%CI:1.167~1.610)、尿mALB(95%CI:1.011~1.048)水平升高是达格列净治疗2型糖尿病肾病无效的危险因素(OR=1.011、1.371、1.029,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC),结果显示,血UA(95%CI:0.622~0.793)、Smad1蛋白(95%CI:0.685~0.841)、尿mALB(95%CI:0.630~0.803)水平对达格列净治疗2型糖尿病肾病效果具有一定预测价值(AUC=0.707、0.763、0.716),联合检测(95%CI:0.734~0.881)预测价值更高(AUC=0.808)。结论血UA、Smad1蛋白、尿mALB水平与达格列净治疗2型糖尿病肾病效果密切相关,可用于预测其治疗效果。

烟酰胺磷酸核糖基转移酶及沉默信息调节因子2同源蛋白1在乳腺癌组织中的表达及与患者临床病理特征的关系

目的:探讨在乳腺癌组织中烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)及沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT-1)的表达率及与患者临床病理特征的关系。方法:选取手术成功切除乳房的381例乳腺癌患者为研究对象,均随访5年或随访至患者死亡,采用免疫组织化学方法检测三阴性乳腺癌患者、非三阴性乳腺癌患者NAMPT及SIRT-1的蛋白表达,并分析其与临床病特征的关系及NAMPT表达与SIRT-1表达的关系,分析NAMPT、SIRT-1表达与临床特征之间的相关性。结果:三阴性乳腺癌患者NAMPT高表达率高于非三阴性乳腺癌患者(P<0.05);年龄≥56岁、有淋巴结转移、无病生存期<55个月的乳腺癌患者NAMPT高表达率高于年龄<56岁、无淋巴结转移、无病生存期≥55个月的乳腺癌患者(均P<0.05);有淋巴结转移、无病生存期<55个月的乳腺癌患者SIRT-1高表达率高于年龄<56岁、无病生存期≥55个月的乳腺癌患者(均P<0.05);NAMPT高表达的乳腺癌患者SIRT-1高表达率高于SIRT-1低表达率(P<0.05),乳腺癌患者NAMPT、SIRT-1表达与淋巴结转移、无病生存期呈正相关(r=0.079、0.505;0.462、0.497,P<0.05)。结论:NAMPT在三阴性乳腺癌中表达上调,NAMPT可影响SIRT-1的表达,同时年龄可影响NAMPT及SIRT-1的表达,且两者高表达预示患者可能出现淋巴结转移、预后差。

去整合素-金属蛋白酶17、Notch1及α-平滑肌动蛋白在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

目的研究去整合素-金属蛋白酶(deintegrin metalloproteinase,ADAM)17、Notch1及α-平滑肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)在子宫内膜异位症(EMs)组织中的表达,及其与子宫内膜异位症的临床病理特征之间的相关性。方法选取2019年10月至2020年10月潍坊医学院附属医院收治的EMs病人异位内膜40例(异位内膜组)、在位内膜25例(在位内膜组),正常内膜25例作为对照组。采用免疫组化法及半定量分析法分别检测ADAM17、Notch1、α-SMA在三组中的表达。分析异位内膜组织中ADAM17、Notch1、α-SMA的表达与病理特征的关系。采用Pearson相关分析分析ADAM17、Notch1、α-SMA在三组中的表达的相关性。结果ADAM17、Notch1、α-SMA在异位内膜组中的表达高于在位内膜组(4.77±1.35比3.24±1.09,4.40±1.24比3.44±0.96,4.42±1.30比3.36±0.95),差异有统计学意义(P<0.05),在位内膜组的表达高于正常内膜组(2.36±1.22、2.24±1.01、2.16±1.028),差异有统计学意义(P<0.05)。异位内膜组中ADAM17、Notch1、α-SMA在Ⅲ~Ⅳ期中的表达高于Ⅰ~Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。EMs病人异位内膜组中ADAM17、Notch1、α-SMA的表达与年龄及囊肿大小差异无统计学意义(P>0.05)。ADAM17、Notch1、α-SMA在异位内膜中的表达两两之间具有正相关性(P<0.05)。结论ADAM17、Notch1、α-SMA在EMs发生及发展中起重要作用,ADAM17可能通过Notch通路参与EMs的纤维化发生并调控EMs的纤维化严重程度。

基于VEGF-Notch 1通路探索调神益智针法对血管性痴呆大鼠神经血管单元的重塑作用

目的 探讨调神益智针法对血管性痴呆(vascular dementia, VD)大鼠脑组织微环境及血管重塑的影响,为临床及后续深入研究提供一定的参考与依据。方法 将SPF级成年雄性SD大鼠60只,体重(200±25)g,按随机数字表法随机分为3组,空白组即假手术组(Sham group)、模型组(VD)、治疗组(vascular dementia and acupuncture group, VD+AC),每组20只。模型组使用四血管阻断法实现血管性痴呆模型,治疗组于造模后使用“调神益智”针法干预,而假手术组仅分离双侧颈总动脉而不予结扎。通过Morris水迷宫实验来判断大鼠学习记忆的能力,免疫荧光法检测大鼠脑组织海马区NeuN、GFAP阳性细胞表达数量,Western blot检测大鼠Notch1、VEGF蛋白表达情况。结果 Morris水迷宫实验显示,造模结束后,模型组、治疗组与空白组相比,定位航行实验逃避潜伏期明显延长(P<0.05),空间探索实验2 min内穿越原平台次数显著减少(P<0.05);治疗结束后,治疗组大鼠与模型组相比,定位航行实验逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),空间探索实验2 min内穿越原平台次数显著增加(P<0.05),而模型组大鼠两项指标均未见明显改善。免疫荧光法检测显示,与空白组比较,模型组大鼠神经元标记NeuN阳性细胞表达显著减少(P<0.05),同时星形胶质细胞活化增加,胞体水肿,GFAP阳性细胞表达显著增加(P<0.05),并出现对神经元的缠绕覆盖性占位;与模型组比较,治疗组大鼠神经元标记NeuN阳性细胞表达显著增加(P<0.05),同时星形胶质细胞活化减缓,GFAP阳性细胞表达显著减少(P<0.05),星形胶质细胞有所增加但未形成对神经元的缠绕覆盖。Western blot检测显示,与空白组对比,模型组大鼠脑组织Notch1蛋白表达显著下降(P<0.05),而治疗组与模型组对比,治疗组大鼠脑组织Notch1蛋白表达明显升高(P<0.05);与空白组对比,模型组大鼠脑组织VEGF蛋白表达显著下降(P<0.05),而治疗组与模型组对比,治疗组大鼠脑组织VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 “调神益智”针法具有明显改善VD大鼠记忆能力,提升NeuN阳性细胞表达,Notch1蛋白表达,VEGF蛋白表达,同时降低星形胶质细胞活化,GFAP阳性细胞表达,具有改善脑部微环境的作用。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。