Notch家族蛋白在银屑病发病机制中的作用研究

目的:探讨Notch家族蛋白在银屑病发病机制中的作用。方法:收集58例银屑病患者皮损组织病理标本为患者组,同期收集28例表皮痣组织病理标本为对照组,采用免疫组化法检测Notch信号受体、配体(Notch1-4、DLL1、3、4和Jagged1、2)在患者组和对照组皮损标本中的定位及表达。结果:1Notch1、2、3、4,Jagged1、2,DLL1、3、4在银屑病患者皮损表皮中的表达水平较对照组皮损表皮中增强,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);2Notch1、2、3、4,Jagged1,DLL1、3在银屑病患者皮损真皮中的表达水平较对照组皮损真皮中增强,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);3DLL4和Jagged2在银屑病患者皮损真皮中的表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Notch1-4,Jagged1、2,DLL1、3、4在银屑病患者皮损中表达增强,可能参与了银屑病的发病机制。

Notch家族蛋白、LCHAD在早发型重度子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨Notch家族蛋白、长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)的表达与早发型重度子痫前期发病的关系,揭示早发型重度子痫前期发病机理。方法选择早发型重度子痫前期患者45例、晚发型重度子痫前期患者42例为研究组,40例正常分娩者为对照组,免疫组化法检测Notch家族蛋白、LCHAD在胎盘绒毛组织中的分布和表达水平。结果各组胎盘组织的合体滋养细胞、血管内皮细胞、蜕膜细胞中均可以检测到Notch家族蛋白、LCHAD的表达。早发型重度子痫前期组Notch家族蛋白、LCHAD表达均显著低于晚发型重度子痫前期组及对照组。各组胎盘组织中Notch家族蛋白表达与LCHAD表达水平呈正相关。结论早发型重度子痫前期组胎盘中Notch家族蛋白、LCHAD低表达与疾病的发病发展密切相关。二者通过影响滋养细胞浸润,胎盘浅着床在早发型重度子痫前期发生发展中起重要作用。

体外脂肪变L02细胞Notch家族和脂质代谢变化研究

目的探讨脂肪变肝细胞Notch基因水平变化及其对脂质代谢的影响。方法使用棕榈酸(PA)处理人L02细胞,构建体外脂肪变性细胞模型,采用不同浓度(0 mM、0.1 mM、0.25 mM和0.5mM)PA处理,并在0.25mM PA处理细胞,给予不同浓度(0μM、1μM、2μM、5μM和10μM)的γ分泌酶抑制剂(DAPT)干预L02细胞24 h,分别以0mM PA为对照组和0μM DAPT为模型组,采用实时定量PCR法检测Notch家族中Notch1、-2、-3及其下游Hes-1和Hey-1mRNA水平,采用比色法测定细胞谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)水平。结果在0.25 mM和0.5 mM PA处理组,细胞Notch3 mRNA水平分别为(0.6±0.2)和(0.4±0.1),显著低于对照组【(1.0±0.1),P<0.01】,Hes-1 mRNA水平分别为(1.7±0.2)和(1.5±0.1),显著高于对照组【(1.0±0.1),P<0.01】;培养上清AST水平分别为(6.7±2.6)U/L和(12.4±1.6)U/L,显著高于对照组【(2.4±0.1)U/L,P<0.05】,ALT水平分别为(5.7±0.8)U/L和(10.3±0.7)U/L,显著高于对照组【(2.2±0.3)U/L,P<0.01】;细胞TG水平分别为(0.4±0.04)mmol/g和(0.4±0.04)mmol/g,显著高于对照组【(0.2±0.02)mmol/g,P<0.01】;在0.5mM PA处理组,细胞Notch1 mRNA、TC和FFA水平分别为(1.9±0.1)、(1.2±0.4)mmol/g和(0.07±0.004)mmol/g,显著高于对照组【分别为(1.0±0.1)、(0.2±0.02)mmol/g和(0.02±0.001)mmol/g,P<0.01】;采用不同浓度DAPT干预0.25mM PA处理细胞24 h,其中在2μM DAPT处理组,细胞Hes-1 mRNA、Hey-1 mRNA、培养上清AST和细胞TG水平分别为(0.5±0.1)、(0.6±0.3)、(6.4±2.9)U/L和(0.03±0.01)mmol/g,在5μM DAPT处理组分别为(0.4±0.2)、(0.6±0.1)、(7.3±1.3)U/L和(0.04±0.01)mmol/g,在10μM DAPT处理组分别为(0.3±0.2)、(0.4±0.1)、(4.9±0.7)U/L和(0.02±0.01)mmol/g,均显著低于模型组【分别为(1.0±0.1)、(1.0±0.04)、(12.2±0.3)U/L和(0.07±0.01)mmol/g,P<0.01】;在10μM DAPT干预细胞,TC水平为(0.2±0.03)mmol/g,显著高于模型组【(0.1±0.02)mmol/g,P<0.01】。结论通过抑制Notch信号能有效降低体外培养的脂肪变细胞TG和培养上清AST水平,提示Notch信号通路可能参与了肝细胞脂质代谢过程,值得进一步的研究。

Notch4 mRNA在口咽鳞癌组织中表达变化及其敲降癌细胞株增殖迁移侵袭能力观察

目的 观察Notch4 mRNA在口咽鳞癌组织和细胞株中的表达变化及敲降Notch4 mRNA表达的口咽鳞癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力。方法 收集12对口咽鳞癌组织与癌旁组织,采用RT-q PCR法检测癌组织、癌旁组织中Notch4 mRNA。培养口咽鳞癌细胞株Detroit 562、WSU-HN-30及对照细胞株Ha CaT、2BS,检测细胞株中Notch4 mRNA。将人口咽鳞癌细胞株Detroit 562和WSU-HN-30随机分为si-NC组、si-Notch4-1组和si-Notch4-2组,分别转染si-NC双链核苷酸、si-Notch4-1双链核苷酸、si-Notch4-2双链核苷酸,检测各组细胞株中Notch4 mRNA,使用RTCA法观察各组细胞株的增殖能力(CI值),通过Transwell实验观察各组细胞株的侵袭和迁移能力。结果 与癌旁组织相比,口咽鳞癌组织中Notch4 mRNA相对表达量高(P<0.01);在对照细胞株Ha CaT和2BS中Notch4 mRNA相对表达量差异无统计学意义;与对照细胞株Ha CaT相比,口咽鳞癌细胞株Detroit 562、WSU-HN-30中Notch4 mRNA相对表达量高(P均<0.001)。在口咽鳞癌细胞株Detroit 562、WSU-HN-30中,与si-NC组相比,si-Notch4-1和si-Notch4-2组的细胞株增殖、迁移和侵袭能力降低(P均<0.01)。结论 Notch4 mRNA在口咽鳞癌组织和细胞株中均高表达,敲降Notch4 mRNA表达的口咽鳞癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力降低。

基于Notch1-Hes1-Prdx蛋白家族通路探究强骨胶囊治疗绝经后骨质疏松的炎症及氧化应激机制

目的基于Notch1-Hes1-Prdx蛋白家族通路探究强骨胶囊治疗绝经后骨质疏松(PMOP)的炎症及氧化应激机制。方法60只5月龄清洁级雌性SD大鼠,体重(300±20)g,采用随机数字表法分为假手术组,模型对照组,阳性对照组及强骨胶囊低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立PMOP模型,假手术组仅切除双侧卵巢周边脂肪组织。阳性对照组经皮下注射200μg/kg雌二醇,2次/周;强骨胶囊低、中、高剂量组分别予以100、200、300 mg/(kg·d)强骨胶囊灌胃;假手术组及模型对照组灌胃等量生理盐水,连续治疗12周。比较各组大鼠股骨骨密度(BMD)值,血浆炎症标志物[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、氧化应激标志物水平[单胺氧化酶A(MAOA)、总抗氧化能力(T-AOC)、高级氧化蛋白产物(AOPP)、超氧化物歧化酶(SOD)]及Jagged1、Notch1、Hes1、Prdx蛋白家族(Prdx1~6)的蛋白表达水平;RT-qPCR及Western blot测定外周血单个核细胞(PBMC)及骨组织中的Jagged1、Notch1、Hes1及Prdx1~6 mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠BMD值、T-AOC、SOD水平降低,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平升高;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平升高,Prdx1、Prdx6表达水平降低(P<0.05)。与模型对照组比较,强骨胶囊中、高剂量组大鼠BMD值、T-AOC和SOD水平升高,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平降低;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平降低,Prdx1、Prdx6表达水平升高(P<0.05)。与强骨胶囊低剂量组比较,强骨胶囊中、高剂量组大鼠股骨BMD值、T-AOC和SOD水平升高(P<0.05),IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平降低;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平降低,Prdx1、Prdx6表达水平升高(P<0.05)。与强骨胶囊中剂量组比较,强骨胶囊高剂量组大鼠股骨BMD值、T-AOC和SOD水平升高,IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α、MAOA、AOPP水平降低;血浆、PBMC及骨组织中Jagged1、Notch1、Hes1表达水平降低,Prdx1、Prdx6表达水平升高(P<0.05)。各组血浆、PBMC及骨组织中Prdx2~5表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论强骨胶囊可能是通过抑制Notch1-Hes1-Prdx信号通路下调Jagged1、Notch1、Hes1表达,上调Prdx1、Prdx6表达,增强机体抗氧化应激能力并改善炎症反应发挥抗骨质疏松作用,其中强骨胶囊作用呈剂量依赖性。

Notch家族成员在星形细胞瘤及髓母细胞瘤中的表达

目的检测Notch家族成员Notchl-4蛋白在人脑星形细胞瘤及髓母细胞瘤中的表达，探讨其在肿瘤生成中的作用。方法应用组织芯片免疫组化染色及WesternBlot检测正常脑组织、不同级别大脑星形细胞瘤、小脑髓母细胞瘤中Notch1、2、3、4蛋白的表达。结果正常脑组织中Notch1、2、3、4蛋白均无表达；星形细胞瘤中Notch1、3、4蛋白的阳性表达率及表达强度随肿瘤病理级别的增高而增高，Notch2无表达；髓母细胞瘤中Notch1、3、4低或无表达，Notch2呈高表达。结论Notch1、2、3、4在星形细胞瘤及髓母细胞瘤中表达有所差异，可能与Notch家族成员在脑发育过程中的作用不同有关。

NOTCH受体在乳腺癌组织中的表达及其与预后的相关性

目的:探讨乳腺癌组织中NOTCH受体表达情况及其与乳腺癌患者预后的相关性。方法 :通过Oncomine、bc-Gen Ex M iner、Kaplan-M eier Plotter等在线数据库研究NOTCH蛋白在乳腺癌组织中的转录水平及其与临床特征及预后的相关性。结果:与正常乳腺组织相比,NOTCH1/2/4在乳腺癌组织中表达降低(P<0.05);与相应受体阴性患者相比,NOTCH1在雌激素(ER)、孕激素(PR)阳性乳腺癌患者中表达下调(P<0.05),同时在三阴性乳腺癌中NOTCH1显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);NOTCH3在ER阳性乳腺癌患者中表达下调(P<0.05),而HER2阳性患者NOTCH3的表达升高(P<0.05);生存分析发现,NOTCH2/3/4的表达与乳腺癌患者更长的无复发生存期(RFS)相关(HR=0.81、0.84、0.73,P<0.05)。结论:不同NOTCH受体蛋白在不同亚型的乳腺癌患者中表达各异,NOTCH2/3/4可作为新的乳腺癌预后良好的生物学指标。

脑出血前后灯盏花素腹腔注射大鼠脑损伤程度观察

目的观察脑出血前后灯盏花素腹腔注射的大鼠脑损伤程度。方法 96只SD雄性大鼠随机分为A(假手术组)、B(脑出血组)、C(低剂量灯盏花素干预组)、D组(高剂量灯盏花素干预组),每组各24只。B、C、D组采用尾状核定位注射制作脑出血模型,A组仅针刺尾状核定位注射。C、D组分别于造模前1 h及造模1、6、12 h时腹腔注射50、100 mg/kg的灯盏花素,B组分别于造模前1 h及造模1、6、12 h时腹腔注射1 m L生理盐水,A组分别于同时腹腔注射1 m L生理盐水。造模24 h时取各组大鼠,断头取脑,利用大体组织估算各组脑出血体积、干湿重法测定各组脑组织含水量,取血肿周围脑组织,免疫组化法检测各组血肿周围脑组织炎症因子核因子κB(NF-κB)p65,采用Western blotting法检测各组脑组织通路蛋白NF-κB p65、Notch家族受体蛋白1(Notch1)。结果与A组比较,B、C、D组大鼠脑出血体积、脑组织干湿比重增加(P均≤0. 05),与B组比较,C、D组大鼠脑出血体积、脑组织干湿比重减小,且D组减少更明显(P均≤0. 05)。与A组比较,B、C、D组血肿周围脑组织NF-κB p65相对表达量增加(P均≤0. 05),与B组比较,C、D组血肿周围脑组织NF-κB p65的相对表达量降低(P均≤0. 05),与C组比较,D组血肿周围脑组织NF-κB p65的相对表达量降低(P≤0. 05)。与A组比较,B、C、D组脑组织脑组织NF-κB p65、Notch1的相对表达量增加(P均≤0. 05),与B组比较,C、D组脑组织NF-κB p65、Notch1的相对表达量降低(P均≤0. 05),与C组比较,D组脑组织NF-κB p65、Notch1的相对表达量降低(P≤0. 05)。结论灯盏花素腹腔注射可减轻脑出血模型大鼠早期脑损伤程度,其机制可能为抑制NF-κB p65、Notch1的表达。