补肾填精益髓法对脑出血模型大鼠神经保护作用及Notch-1蛋白表达的影响

目的探讨补肾填精益髓法对脑出血(ICH)大鼠神经保护作用及Notch-1蛋白表达的影响,明确其具体作用机制。方法将120只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、补肾填精益髓组、神经节苷脂组、γ-分泌酶抑制剂(DAPT)组。采用尾动脉注血法制作脑出血大鼠模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)腹腔注射标记脑内增殖细胞,在第3天、第7天、第14天、第28天4个时间点采用免疫组织化学法标记大鼠海马区BrdU/神经元核抗原(NeuN)阳性细胞数;尼色染色法观察大鼠脑出血灶周围组织病理形态结构;Werstern Blot法测定Notch-1蛋白表达情况。结果术后第7天、第14天、第28天,补肾填精益髓组、神经节苷脂组BrdU/NeuN阳性细胞数均高于模型组、DAPT组(P<0.01),且补肾填精益髓组BrdU/NeuN阳性细胞数均高于神经节苷脂组(P<0.01),以第7天、第14天增殖最明显,随后呈下降趋势;术后第7天、第14天,补肾填精益髓组大鼠Bederson神经功能评分较模型组、神经节苷脂组、DAPT组改善明显(P<0.01),至术后第28天Bederson神经功能评分基本降至正常;补肾填精益髓组和神经节苷脂组Notch-1蛋白表达高于模型组、DAPT组(P<0.01);在第7天、第14天时,补肾填精益髓组与神经节苷脂组Notch-1蛋白表达上升最明显,且补肾填精益髓组Notch-1蛋白表达高于神经节苷脂组表达(P<0.01)。结论补肾填精益髓法可以改善脑出血大鼠神经功能,促进神经干细胞(NSCs)增殖,其机制可能是补肾填精益髓法可通过Notch信号通路诱导尾状核出血区域NSCs增殖,提高Notch-1蛋白表达。

NF-κB、Notch-1和Ki-67在结肠癌中的表达及其意义

目的探索核因子κB(NF-κB)、Notch-1和Ki-67在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法收集泸州医学院附属医院病理科2008年12月至2010年1月存档结肠蜡块120例,其中结肠腺瘤20例;结肠癌90例,包括高分化腺癌45例,中分化腺癌33例,低分化腺癌12例;结肠正常黏膜组织10例。采用免疫组织化学的方法检测NF-κB、Notch-1和Ki-67的表达。结果 (1)在结肠正常黏膜-腺瘤-癌序列中,NF-κB的阳性率呈递增趋势,其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05);Notch-1的阳性率呈递增趋势,其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05);Ki-67的阳性率呈递增趋势,其在结肠癌组中的阳性表达率高于结肠腺瘤组及正常黏膜组(P<0.05)。(2)NF-κB的表达与结肠癌大小、不同侵袭深度,有、无淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05);Notch-1的阳性表达率与结肠癌大小、分化程度显著相关(P<0.05);Ki-67的阳性表达率与结肠癌的组织分化程度及有、无淋巴结转移有关(P<0.05)。秩和检验显示NF-κB、Notch-1、Ki-67在结肠癌不同分化程度中的表达率不同,分化越低,阳性率越高(P<0.05)。(3)NF-κB、Notch-1、Ki-67在结肠癌组织中的表达呈正相关(P<0.01)。结论 NF-κB、Notch-1、Ki-67与结肠癌的发生、发展有关;Notch信号通路和NF-κB信号通路可能相互影响共同参与结肠癌的发生、发展。

Notch-1在乳头状甲状腺癌和颈部转移淋巴结中的表达和临床意义

目的探讨Notch-1蛋白在乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)和颈部转移淋巴结(MLN)中的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测69例PTC患者癌组织及其癌旁组织和34例MLN组织中Notch-1蛋白的表达;分析Notch-1在PTC和颈部淋巴结转移中的作用。结果癌组织和MLN组织与癌旁组织比较,在癌组织和MLN组织中,Notch-1蛋白表达阳性率明显降低(P<0.05);癌组织中Notch-1蛋白的表达与PTC患者的肿瘤大小及包膜外浸润有关(P<0.05)。结论在癌组织和MLN组织中,Notch-1蛋白表达下调,可能与PTC发生、发展及侵袭转移有关。Notch-1蛋白在癌组织和MLN组织中表达阳性率差异无统计学意义,提示癌细胞在淋巴结转移过程中,恶性程度没有明显提高,生物学行为保持相对稳定。

沉默FOXC1基因调控Notch通路对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡影响

目的脑胶质瘤具有高发病率和高度恶性,目前的治疗方法效果不理想,且易复发。近年来,基因治疗逐渐被认识及广泛研究,但具体耙点及作用机制尚无定论。本研究探讨了siRNA靶向沉默FOXC1基因调控Notch通路对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法根据前期实验,选择靶向沉默FOXC1基因效率最高的siRNA序列(FOXC1-siRNA-1707,实验组)和阴性对照序列(FOXCl-siRNA-NC,阴性对照组),用Lipofectamine^TM 2000DNA转染试剂转染U251和TJ9052种人胶质瘤细胞。MTT法分析6.12.24和48h不同时间点细胞增殖变化。流式细胞术检测脑胶质瘤细胞凋亡率(亚凋亡峰值)。蛋白质印迹法检测沉默FOXC1基因后Notch-1和DH4蛋白水平的变化。结果MTT分析表明,在脑胶质瘤U251细胞中,实验组细胞增殖率与对照组、阴性对照组相比降低,且具有时间依赖性,差异均有统计学意义,F处理组=80169.8,F时间=115031.3,F处理组×时间=5604.1,均P<0.05;与对照组相比,阴性对照组细胞增殖率降低,但差异无统计学意义,P>0.05。在脑胶质瘤TJ905细胞中,实验组细胞增殖率与对照组、阴性对照组相比降低,且具有时间依赖性,差异均有统计学意义,F处理组=111037.1,F时间=153277.7,F处理组×时间=5208.2,均P<0.05;与对照组相比,阴性对照组细胞增殖率降低,但差异无统计学意义,P>0.05。流式细胞仪检测结果表明,U251细胞中FOXC1基因沉默后,脑胶质瘤细胞凋亡率增加,差异有统计学意义,F=155.9,P<0.01;TJ905细胞中FOXC1基因沉默后,脑胶质瘤细胞凋亡率增加,差异有统计学意义,F=243.1,P<0.01.蛋白质印迹法结果显示,U251细胞中靶向沉默FOXC1基因后,Notch1和D114蛋白的表达水平下降,差异有统计学意义,F值分别为7.4.12.3,均P<0.05;TJ905细胞中靶向沉默FOXC1基因后,Notch1和D114蛋白的表达水平亦下降,差异有统计学意义,F值分别为8.7、19.2,均P<0.05。结论沉默FOXC1基因可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Notch通路相关。