肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化大鼠Notch-PI3K/PKB通路串话及足细胞EMT的影响

目的:观察中药肾苏Ⅱ方对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠肾脏功能、病理、足细胞及上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)标志蛋白、Notch、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路及其串话关键位点的影响。方法:采用左肾切除+阿霉素注射法诱发SD大鼠FSGS模型,依体质量随机分为3组,模型组、贝那普利组和肾苏Ⅱ方组。另设空白对照组,每组各12只。贝那普利组予贝那普利(9.25mg·kg-1·d-1)灌胃、肾苏Ⅱ方组予肾苏Ⅱ方(9.71g·kg-1·d-1)灌胃,空白对照、模型组予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。检测大鼠24h尿微量蛋白(24h Upro)、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)。观察肾脏病理形态学改变,分析足细胞标志CD2相关蛋白(CD2AP)及EMT标志desmin蛋白表达,Notch、PI3K/PKB通路关键位点的notch1、Hes-1、染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)、PKB基因及p-PKB蛋白表达。结果:与模型组相比,治疗第8周末开始,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组FSGS大鼠24h Upro、TP、ALB均明显改善(P<0.05);至治疗第12周末,贝那普利组及肾苏Ⅱ方组大鼠光镜、电镜肾脏病理改变明显减轻;CD2AP蛋白表达恢复与desmin蛋白表达减少明显(P<0.05);Notch1、Hes-1、PTEN m RNA及p-PKB蛋白表达与模型组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:肾苏Ⅱ方可能通过调控Notch-PI3K/PKB通路串话,阻抑足细胞EMT进程,进而延缓FSGS大鼠疾病进展。

PI3K/PKB信号通路在TGF-β_1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(OPN)的调控作用。方法:体外培养LX-2人肝星状细胞株,予TGF-β1(终浓度2.5、5、10、20μg/L)刺激24 h或予TGF-β1(终浓度10μg/L)刺激12 h、24 h、48 h;先经PI3K/PKB信号通路特异性抑制剂wortmannin(0.1μmol/L)预处理1 h,再予10μg/L TGF-β1刺激24 h,收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting法检测OPN表达情况。结果:TGF-β1能够促进LX-2细胞表达OPN,在一定浓度和时间范围内,其表达量随着TGF-β1浓度和时间的增加而增加,呈剂量和时间依赖性关系;经wortmannin预处理再予TGF-β1刺激的LX-2细胞,与对照组相比,OPN表达受到明显抑制(P<0.01)。结论:TGF-β1对LX-2人肝星状细胞OPN表达具有诱导作用,此作用可能受PI3K/PKB信号通路的调控。

高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响

目的:探讨高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响。方法:40只8周龄SD大鼠适应训练后,随机分为低住安静组(LC)、低住低练组(LoLo)、高住安静组(HC)和高住低练组(HiLo)。高住组每天低氧暴露12 h(氧浓度13.6%,相当于海拔3500 m),低练组进行35 m/min、1 h/d、5 d/周、共4周的跑台训练。采用实时荧光定量PCR检测大鼠腓肠肌PI3K、PKB、mTOR mRNA表达,以双因素方差分析进行统计。结果:低氧和运动均显著提高大鼠骨骼肌PI3K和PKB mRNA表达(P<0.01),但低氧和运动无显著交互作用(P>0.05);运动显著提高大鼠骨骼肌mTOR mRNA表达(P<0.01),低氧却显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01),且低氧和运动有交互作用,显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01)。结论:低氧和运动促进PI3K和PKB基因表达,低氧抑制而运动促进mTOR基因表达;HiLo训练促进PI3K和PKB基因表达,却抑制mTOR基因表达。不同条件下PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达水平不一致。

自噬和PI3K/PKB通路在七氟烷麻醉结肠癌手术患者神经认知紊乱中的作用研究

目的探讨自噬和PI3K/PKB通路在七氟烷麻醉结肠癌手术患者神经认知紊乱中的作用。方法选取2016年1月至2019年1月在郑州人民医院接受腹腔镜下结肠癌根治术治疗的100例老年结肠癌患者作为研究对象,并随机分为SEV组(麻醉通过七氟醚)和ISO组(麻醉通过异氟烷),每组50例。比较两组术前和术后1 d血清PI3K和PKB的表达水平,分析血液中LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达水平;记录两组简易智力状态检查(MMSE)量表评分;比较两组不良反应发生情况,并进行线性关系分析。结果与ISO组比较,SEV组术后1 d血清PI3K和PKB表达水平降低(P<0.05),而血液LC3Ⅱ表达水平明显增加(P<0.05),MMSE评分增加(P<0.05)。SEV组术后1 d认知功能障碍的发生率低于ISO组(P<0.05)。MMSE评分与PI3K和PKB表达水平呈负相关关系(r=-0.412和-0.398,P<0.001),而与LC3Ⅰ和LC3Ⅱ表达水平呈正相关关系(r=0.452和0.427,P<0.001)。结论七氟烷可以通过PI3K/PKB信号通路调节神经细胞自噬,改善结肠癌手术患者术后的认知功能。

PI3K/PKB信号通路在重症急性胰腺炎肺损伤发病机制中的研究进展

PI3K/PKB信号通路广泛存在于组织细胞中,参与细胞的生长、增殖、凋亡等重要生理活动。近年来研究发现该信号通路与重症急性胰腺炎急性肺损伤的发病过程密切相关。因此,本文就该通路在重症急性胰腺炎肺损伤发病机制中的研究现状作一综述。

重症急性胰腺炎肺损伤患者中的PI3K/PKB信号转导通路临床表达及意义

目的:研究分析重症急性胰腺炎肺损伤患者中的PI3K/PKB信号转导通路临床表达及意义。方法:选取健康的成年大鼠30只作为主要的研究对象,随其进行随机分为三组,分别为A组、B组、C组,每组10只,应用胆胰管内递行注射法进行SAP模型的制作。在完成6小时制作之后,取出胰腺组织,完成各组指标的分析。结果:A组、B组、C组三组大鼠的相对指标均存在明显的差异,其中B组跟其他两组差异更为显著。其差异具有显著的统计学意义。A组、B组、C组三组大鼠的胰腺组织内TNF-、L-I蛋白变化以及PKB(碱的电离常数的负对数)变化差异存在明显的统计学意义。结论:重症急性胰腺炎肺损伤患者发病机制的主要原因可能是PI3K/PKB信号转导通路。

胸腺瘤中VEGF的表达与PI3K/AKT通路的相关性研究

目的:探讨胸腺瘤中VEGF的表达及其与PI3K/AKT通路的关系,以及它们在胸腺瘤发病过程中的作用。方法:通过免疫组化的方法检测患者胸腺瘤组织VEGF、PI3K、AKT蛋白的表达。结果:VEGF、PI3K、AKT蛋白在胸腺瘤患者中均高表达。VEGF的表达与转移、临床分期、组织学分型均无关;PI3K的表达与组织学分型有关,而与转移无关;AKT的表达与组织学分型有关,而与转移无关。胸腺瘤中PI3K与AKT的表达呈正相关(字2=36.54,r=0.510;P<0.01),胸腺瘤中VEGF与AKT的表达呈正相关(字2=36.54,r=0.440;P<0.01)。结论:VEGF和PI3K/AKT通路是胸腺瘤发展过程中的重要因素,而PI3K/AKT通路可能是直接调节VEGF基因的表达重要信号通路之一,VEGF和PI3K/AKT通路与胸腺瘤的发病发展过程密切相关,而它们均可以在一定程度上评估胸腺瘤的生物学行为。

miR-221靶向PTEN介导PI3K/AKT信号通路调节细胞自噬参与帕金森病的机制研究

目的探讨微小RNA-221(miR-221)靶向磷酸脂酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)介导磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB也称AKT)信号通路调节细胞自噬参与帕金森病(PD)进展的机制研究。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)作用于肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞建立PD模型;转染miR-221模拟物或抑制剂来调节miR-221的表达;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测PC12细胞存活率;电镜观察自噬体;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析确定miR-221的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测自噬蛋白标志物(LC3-II)和PTEN/PI3K/AKT信号蛋白的表达。结果在PD细胞模型中,miR-221的表达水平下降(P<0.01),LC3-II蛋白表达水平上调(P<0.01),自噬体增加;与6-OHDA组相比,过表达miR-221降低了LC3-II蛋白的表达水平(P<0.05),并增加了细胞存活率(P<0.001),而沉默miR-221增加了LC3-II蛋白的表达水平(P<0.05),并降低了细胞存活率(P<0.001);此外,与6-OHDA组相比,过表达miR-221降低了PTEN蛋白的表达(P<0.01),增加了PI3K蛋白的表达(P<0.001)以及AKT蛋白磷酸化程度(P<0.01),而沉默miR-221增加了PTEN蛋白的表达(P<0.01),降低了PI3K蛋白的表达(P<0.05)以及AKT蛋白磷酸化程度(P<0.05)。结论 miR-221在6-OHDA诱导的PC12细胞中表达降低,上调miR-221可靶向PTEN介导PI3K/AKT信号通路来调节自噬,从而发挥对PD细胞模型的保护作用。

紫草素对离体子宫内膜癌细胞株增殖及凋亡信号通路PI3K/PKB的影响

目的:探讨紫草素对离体子宫内膜癌细胞株增殖及凋亡信号通路PI3K/PKB的影响。方法:将子宫内膜癌HEC-1B细胞置于培养液中培养,选用对数期生长细胞进行实验。分别加入浓度0.4 mg·L^(-1)、0.8 mg·L^(-1)、1.2 mg·L^(-1)的含紫草素的培养液,作为紫草素低剂量组、中剂量组、高剂量组,未加任何药为对照组,观察并比较各组细胞的增殖能力、Akt磷酸化水平、Bcl-2及Bax水平、细胞凋亡率。结果:与对照组比较,紫草素中剂量组以及紫草素高剂量组的OD值、Bax水平及细胞凋亡率较高,p-Akt、Bcl-2水平较低,差异均无统计学意义(P<0.05);紫草素中剂量组与紫草素高剂量组的OD值、p-Akt水平、Bax及Bcl-2水平、细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:紫草素能够通过调节凋亡信号通路PI3K/PKB,抑制离体子宫内膜癌细胞株的增殖,促进其凋亡。

基于PI3K/PKB通路研究EGCG对CVB3感染致病毒性心肌炎小鼠细胞凋亡的影响

细胞凋亡是造成病毒性心肌炎(VMC)发病过程中心肌损伤的重要因素;表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对缺血再灌注引起的细胞凋亡具有抑制作用,但是否抑制VMC发病过程中的心肌细胞凋亡尚不明确。因此,本研究将分析EGCG对VMC小鼠细胞凋亡的影响及分子机制。BALB/c小鼠随机分为对照组、VMC组(腹腔注射CVB3悬液造模)、VMC+EGCG组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG)、VMC+EGCG+LY组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG及PI3K抑制剂LY294002)。检测血清心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)及乳酸脱氢酶(LDH),心肌中CVB3滴度及RNA表达、HE染色、凋亡基因及p-PI3K、p-PKB表达。结果显示,与对照组比较,VMC组血清cTnI、LDH含量、心肌中CVB3滴度及RNA表达、细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05);与VMC组比较,VMC+EGCG组血清cTnI、LDH含量及心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达降低,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达升高(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05);与VMC+EGCG组比较,VMC+EGCG+LY组血清cTnI、LDH含量、心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05)。以上结果表明EGCG对VMC小鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用且该作用与激活PI3K/PKB通路有关。

瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的实验研究

柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎最常见的病毒株,感染心肌细胞后能够激活细胞凋亡、引起细胞损伤;已有研究证实,瓜蒌皮激活磷脂酰肌醇3⁃激酶(Phosphatidylinositol 3⁃kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB)通路减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,但瓜蒌皮对CVB3感染引起心肌细胞凋亡的调节作用及机制尚不清楚。因此,本研究将观察瓜蒌皮激活PI3K/PKB通路减轻柯萨奇病毒感染心肌细胞损伤的作用。在培养心肌H9c2细胞后分组,对照组给予不含药物及病毒的培养基,CVB3组给予含有CVB3病毒液的培养基,瓜蒌皮组含有CVB3病毒液及瓜蒌皮提取物的培养基,瓜蒌皮+抑制剂组含有CVB3病毒液、瓜蒌皮提取物及抑制剂LY294002的培养基。检测培养基中乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)及磷酸肌酸激酶同工酶(Creatine phosphokinase⁃isoenzyme⁃MB,CK⁃MB)的含量、细胞活力A490、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase⁃9、cleaved caspase⁃3、p⁃PI3K、p⁃PKB的表达。结果显示,与对照组比较,CVB3组培养基中LDH、CK⁃MB的含量、细胞凋亡率、细胞中天冬氨酸蛋白水解酶⁃9(cleaved caspase⁃9,cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase⁃9)、cleaved caspase⁃3的表达均增加,A490及细胞中p⁃PI3K、p⁃PKB的表达均降低(P<0.05);与CVB3组比较,瓜蒌皮组培养基中LDH、CK⁃MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase⁃9、cleaved caspase⁃3的表达均降低,A490及细胞中p⁃PI3K、p⁃PKB的表达均增加(P<0.05);与瓜蒌皮组比较,瓜蒌皮+抑制剂组培养基中LDH、CK⁃MB的含量、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase⁃9、cleaved caspase⁃3的表达均增加,A490及细胞中p⁃PI3K、p⁃PKB的表达均降低(P<0.05)。以上结果表明,瓜蒌皮提取物能够减轻CVB3感染心肌细胞的损伤及凋亡,激活PI3K/PKB通路是可能的分子机制。本研究首次发现瓜蒌皮提取物对CVB3感染心肌细胞的损伤和凋亡具有抑制作用;同时,本研究还初步阐明了瓜蒌皮提取物发挥心肌保护作用的分子机制、即激活PI3K/PKB通路。

PI3K/Akt信号通路的调控与肿瘤血管生成

肿瘤对人类的生存危害极大,恶性肿瘤的治疗一直是世界性的难题。肿瘤血管生成是肿瘤赖以生长、转移的基础,受多种因子的调节。目前发现有多条信号网络参与调控肿瘤血管生成,PI3K/Akt是其中比较重要的一条信号传导途径,该通路与肿瘤的发生发展密切相关。本文介绍了PI3K/Akt信号通路的结构组成与活性调控,并重点阐述PI3K/Akt信号途径与肿瘤血管生成的关系。

补阳还五汤对失神经肌萎缩大鼠自噬调控作用的实验研究

目的:探究补阳还五汤对失神经肌萎缩大鼠自噬的调控作用,阐明益气活血法对失神经肌萎缩的保护机制。方法:制备神经夹伤大鼠模型,实验分假手术组、模型组、弥可保组、补阳还五汤、补阳还五汤+LY294002,每组8只;各组大鼠每日灌胃给药,第18天取胫前肌计算湿重比并进行形态学观察,Western-blot检测胫前肌PI3K/PKB/mTOR(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶/B/雷帕霉素靶蛋白)信号通路蛋白。结果:模型组大鼠胫前肌湿重比显著降低(P<0.05),而补阳还五汤组和弥可保组胫前肌湿重比显著提高(P<0.05),补阳还五汤+LY294002组胫前肌湿重比下降。形态学观察发现:模型组肌纤维横截面积减少,形态不规则,肌纤维结构紊乱,结缔组织增生较多,肌纤维明显萎缩变性。补阳还五汤组胶原纤维增生明显减少(P<0.05),形态较规则。补阳还五汤+LY294002组肌萎缩加重,胶原纤维明显增多。补阳还五汤组、弥可保组p-PI3K、p-PKB、mTOR蛋白相对表达量与模型组相比显著增加(P<0.05)。Atg5,Becline-1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05);补阳还五汤+LY294002组p-PI3K、p-PKB、mTOR蛋白表达降低而Atg5,Becline-1蛋白表达升高。结论:益气活血法代表方——补阳还五汤可通过PI3K/PKB/mTOR通路抑制自噬-溶酶体系统过度激活,发挥失神经肌萎缩的保护作用。

PI3K/AKT通路参与TGF-β1诱导HKCs间质转分化过程

磷脂酰肌醇3激酶是生长因子受体超家族信号转导过程中重要的细胞成员,在体内PI3K通过磷酸化PIP2成为第二信使PIP3从而引起一系列的细胞因子激活或抑制,这其中最重要的就是PKB/Akt。

参白解毒方通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制结直肠癌细胞增殖

目的:研究参白解毒方基于磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制结直肠癌细胞HCT116增殖的作用机制。方法:采用水提醇沉法提取参白解毒方有效部位进行冻干粉制备;体外培养HCT116细胞,用参白解毒方(2、4、8、16 g·L^(-1))对HCT116细胞进行处理,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测参白解毒方对HCT116细胞增殖的抑制作用;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞PTEN、PI3K、Akt、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、c-核蛋白类基因(c-Myc)、生存素(Survivin)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN、磷酸化磷酸酶及张力蛋白同源物(p-PTEN)、PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、GSK-3β、磷酸化糖原合成酶激酶-3(p-GSK-3β)、c-Myc、Survivin、CyclinD1的蛋白表达水平;免疫荧光检测β-连环蛋白(β-catenin)入核情况。结果:与空白组比较,参白解毒方各质量浓度均可以显著抑制HCT116细胞的增殖(P<0.01),且具有浓度依赖性。与空白组比较,参白解毒方处理细胞后PTEN、GSK-3βmRNA表达水平均上调,PI3K、Akt、c-Myc、Survivin、CyclinD1 mRNA表达水平均下调(P<0.01);细胞PTEN、p-PTEN和GSK-3β蛋白表达水平上调,PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、Survivin、CyclinD1蛋白表达水平均下调(P<0.05,P<0.01)。免疫荧光结果显示参白解毒方可以抑制结直肠癌细胞HCT116中β-catenin的入核。结论:参白解毒方可以抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖,其作用机制可能是通过调节PTEN/PI3K/Akt信号通路。

坎离颗粒对血管紧张素II阻断骨骼肌细胞糖代谢PI3K/PKB/GLUT-4信号途径的影响及机制探讨

目的:探究坎离颗粒对小鼠骨骼肌成肌细胞(C2C12细胞)糖代谢的影响;探明坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ阻断C2C12细胞糖代谢的影响是否通过PI3K/PKB/GLUT-4信号途径。方法:以C2C12细胞为研究对象,以胰岛素激活细胞糖代谢通路,以血管紧张素Ⅱ阻断被激活的通路,在此基础上设胰岛素组、模型对照组、坎离颗粒2、20、200μg/ml组,另设空白对照组。药物干预结束后,检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)及同工酶、乳酸、三磷酸腺苷(ATP)含量,葡萄糖运载体4(GLUT-4)、蛋白激酶B(PKB)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶p38(P38MAPK)蛋白及mRNA表达。结果:与空白组比较,胰岛素组对荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)摄取率显著升高;与胰岛素组比较,模型组对2-NBDG摄取率显著降低;与模型组比较,坎离颗粒三个剂量组对2-NBDG摄取率均显著升高。坎离颗粒2μg/ml组可明显降低乳酸水平。坎离颗粒20、200μg/ml组均可明显降低LDH4水平。与胰岛素组比较,模型组GLUT-4蛋白及mRNA、P-PKB、P-PI3K蛋白表达显著下调;与模型组比较,坎离颗粒可上调GLUT-4蛋白及mRNA、P-PKB、P-PI3K蛋白表达,以20、200μg/ml组最显著。结论:坎离颗粒可促进C2C12细胞糖摄取,改善糖代谢。并通过上调GLUT-4蛋白和mRNA表达、PKB、PI3K磷酸化蛋白表达,改善C2C12细胞的糖代谢,坎离颗粒对血管紧张素Ⅱ阻断骨骼肌细胞糖代谢的改善作用是通过PI3K/PKB/GLUT-4信号通路。

ECE-1基因去甲基化在腹主动脉缩窄术后左室肥厚大鼠中的作用及机制研究

目的:探讨内皮素转换酶1(ECE-1)基因去甲基化在腹主动脉缩窄术(AAC)左室肥厚大鼠中的作用,及对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为3组:空白组、模型组和假手术组,每组10只。模型组采用腹主动脉缩窄术建立压力超负荷心肌肥厚模型,假手术组分离腹主动脉但不结扎。6周后,超声心动图检测左室舒张末内径(LVED)、左室舒张末后壁厚度(LVPWT)、射血分数(EF)、短轴收缩率(FS),称重计算心脏质量指数(HWI),HE染色观察心肌细胞面积(AMC),甲基化特异性PCR检测心肌E CE-1基因去甲基化水平的变化,实时荧光定量PCR检测心房利钠肽(ANP)、ECE-1 mRNA表达变化,ELISA检测血浆内皮素1(ET-1)水平,Western blot检测p-PI3K、PI3K、p-PKB、PKB蛋白表达变化。结果:假手术组大鼠LVPWT、LVED、EF、FS、HWI、AMC、ANP和ECE-1 mRNA、ECE-1基因去甲基化水平以及p-PI3K、p-PKB蛋白水平与对照组无明显差异。与假手术组相比,模型组大鼠LVPWT、HWI、AMC增大,心肌组织E CE-1基因去甲基化水平升高,ECE-1和ANP mRNA表达上调,血浆ET-1水平上升(P<0.01),LVED、EF、FS减小,心肌组织p-PI3K、p-PKB蛋白表达下调(P<0.01或P<0.05)。结论:ECE-1基因去甲基化可能参与了压力超负荷大鼠心肌肥厚的形成过程,该过程可能与PI3K/PKB信号通路的抑制有关。

款冬酮对过敏性鼻炎模型小鼠肥大细胞活性的抑制作用

目的探究款冬酮(tussilagone,TUS)对过敏性鼻炎模型(allergic rhinitis,AR)小鼠肥大细胞的抑制作用及其分子机制。方法将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、TUS组和Ly294002组,每组10只。AR小鼠模型采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)联合鼻腔滴注OVA方法构建。造模完成后第1~7天,TUS组小鼠按照5 ml/kg的剂量每天腹腔注射8×10-2 mol/L款冬酮药剂;Ly294002组小鼠每天腹腔注射6.0 mg/kg的PI3K/AKT信号通路抑制剂Ly294002溶液。采用HE染色检测小鼠鼻黏膜组织病理情况,Giemsa染色检测鼻黏膜组织嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润;采用ELISA法检测致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4、IL-5和IFN-γ水平;流式细胞术检测小鼠脾脏组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)T细胞水平。Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平。将RBL-2H3细胞分为对照组、模型组、款冬酮组(C-TUS组)和Ly294002组(C-Ly294002组)。采用100 ng/ml的DNP-IgE处理12 h致敏细胞后,C-TUS组细胞加入1μl浓度为8×10^(-2) mol/L的款冬酮处理2 h,C-Ly294002组细胞加入10μl浓度为25 mol/L的Ly294002溶液处理2 h。采用ELISA法检测β-己糖氨酸酶和组胺水平,采用Fura-2/AM钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度,Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠鼻黏膜组织出现了大量炎性细胞浸润,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均增加;TUS组和Ly294002组小鼠鼻黏膜组织炎性浸润较模型组显著改善,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均减少。与对照组比较,模型组小鼠血清中致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均升高(P<0.05),IFN-γ水平降低(P<0.05),脾脏组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)T细胞比例降低(P<0.01),鼻黏膜组织中PI3K和PKB蛋白磷酸化水平升高(P<0.05);与模型组比较,TUS组和Ly294002组小鼠血清中致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均降低(P<0.05),IFN-γ水平升高(P<0.05),脾脏组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)T细胞比例升高(P<0.05),鼻黏膜组织中PI3K和PKB蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05);与TUS组比较,Ly294002组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组RBL-2H3细胞中β-己糖氨酸酶、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均升高(P<0.01),IFN-γ水平降低(P<0.05),Ca 2^(+)内流强度增强(P<0.01),PI3K和PKB蛋白磷酸化水平升高(P<0.05);与模型组比较,C-TUS组和C-Ly294002组RBL-2H3细胞中β-己糖氨酸酶、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均降低(P<0.05),IFN-γ水平升高(P<0.05),Ca 2^(+)内流强度减弱(P<0.05),PI3K和PKB蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05);与C-TUS组比较,C-Ly294002组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论款冬酮通过抑制肥大细胞的活化和维持细胞免疫稳态,对过敏性鼻炎起到缓解作用,该机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路激活有关。

抗胶质瘤Ⅰ号方对脑胶质瘤细胞侵袭性的影响

目的:探讨抗胶质瘤Ⅰ号对胶质瘤细胞侵袭性降低的作用及其与PI3K/PKB信号传导通路之间的关系。方法:MTT法检测抗胶质瘤Ⅰ号处理培养的C6胶质瘤细胞的抑制率,免疫印迹法检测肿瘤细胞内PI3K和PKB表达水平,最后,利用结晶紫染色法检测Transwell下室面的胶质瘤细胞数。结果:抗胶质瘤Ⅰ号可以抑制PI3K和PKB蛋白表达水平,抗胶质瘤Ⅰ号作用0.5 h时PI3K蛋白表达水平最低为(25.1±3.1),作用1 h时PKB蛋白表达水平最低为(25.1±3.8),与对照组的(99.1±1.6)、(91.2±3.5)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。而抗胶质瘤Ⅰ号作用3 h时对胶质瘤细胞的抑制程度最大,抑制率为(91.2±5.7)%,与对照组的(68.0±5.2)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。且此时Transwell下室面的细胞数最少,为(1.4±0.4)×106个,与对照组的(35.6±2.7)×106个比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抗胶质瘤Ⅰ号可能是通过抑制PI3K/PKB而抑制胶质瘤细胞的增殖,从而引起胶质瘤细胞侵袭性的降低。