低氧条件下共培养体系中肺动脉内皮细胞经Notch1/Jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖

目的探讨低氧条件下细胞共培养体系中肺动脉内皮细胞经由Notch1/Jagged1信号通路调控肺动脉平滑肌细胞的增殖。方法建立Transwell共培养体系,将肺动脉内皮细胞(PAEC)和平滑肌细胞(PASMC)分别接种于下室和上室,PAEC经DAPT(Notch信号阻断剂)或(和)S iR-NA-Jagged1预处理后,与PASMC共同置入自动常压缺氧孵箱进行低氧处理。根据PAEC是否行DAPT、Jagged1小RNA干扰预处理进行实验分组:常氧时PAEC与PASMC共培养对照组(N)、低氧时PAEC与PASMC共培养组(H1)、低氧时DAPT(终浓度10μmol/L)预处理PAEC与PASMC共培养组(H2)、低氧时S iRNA-Jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H3)、低氧时DAPT加S iRNA-Jagged1预处理PAEC与PASMC共培养组(H4)。用3H-TdR掺入法检测PAEC和PASMC增殖情况,RT-PCR检测PAEC中Notch1、Jagged1 mRNA表达水平。结果低氧时各组PAEC和PASMC的3H-TdR掺入量明显高于常氧共培养对照组(均P<0.01);与H1组比较,H2、H3、H4组PAEC和PASMC的3H-TdR掺入量均显著降低(P<0.05,P<0.01),表明Notch1、Jagged1单阻断和双阻断使低氧条件下PAEC和PASMC增殖细胞数明显减少。低氧时PAEC与PASMC共培养组PAEC中Notch1、Jagged1 mRNA表达水平明显高于常氧共培养组(均P<0.05);用DAPT或S iRNA-Jagged1单独、或者两者共同预处理PAEC,再在低氧条件下与PASMC共培养,DAPT使PAEC中Notch1 mRNA表达水平明显下降,S iRNA-Jagged1使Jagged1 mRNA表达水平显著降低,DAPT和S iRNA-Jagged1共同使Notch1、Jagged1 mRNA表达水平同时明显下调,与H1组比较差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。结论肺动脉内皮细胞表型的改变影响肺动脉平滑肌细胞表型的变化;经Notch1/Jagged1信号通路介导,低氧导致PAEC和PASMC异常增殖、低氧性肺动脉内皮细胞调控低氧性肺动脉平滑肌细胞的异常增殖。

丹皮酚抑制Notch1/Jagged1信号通路对妊娠糖尿病大鼠糖代谢紊乱的改善作用

目的探讨丹皮酚(PAE)抑制Notch受体(Notch1)/Notch配体(Jagged1)信号通路对妊娠糖尿病(GDM)大鼠糖代谢紊乱的改善作用。方法大鼠分为正常对照组(NC组)、模型组(GDM组)、低剂量PAE组(L-PAE组,100 mg/kg)、中剂量PAE组(M-PAE组,200 mg/kg)、高剂量PAE组(H-PAE组,400 mg/kg),高剂量PAE+Notch1信号激活剂Jagged1/FC嵌合蛋白组(H-PAE+JFC组,400 mg/kg+500 g/kg),每组12只。血糖仪测定大鼠空腹血糖(FBG)水平;胰岛素放射免疫分析试剂盒检测空腹胰岛素(FINS)水平;采用生化分析仪测定大鼠血清脂代谢指标;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、介素-6(IL-6)、瘦素(Leptin)、脂联素(APN)水平;微量法检测大鼠血清氧化应激指标;western blot法检测大鼠肝脏组织中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白水平。结果与NC组比较,GDM组大鼠FBG(0 d、7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1升高,FINS(0 d、7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT降低(P<0.05);与GDM组比较,L-PAE组、M-PAE组、H-PAE组大鼠FBG(7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1降低,FINS(7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT升高(P<0.05),且具有剂量依赖性;Notch1信号激活剂可减轻高剂量PAE对GDM大鼠糖代谢紊乱的改善作用(P<0.05)。结论PAE可能通过抑制Notch1/Jagged1信号通路,改善GDM大鼠糖代谢紊乱。

雷帕霉素对肾间质成纤维细胞Notch1/Jagged1信号通路及FN表达的影响

目的:研究雷帕霉素(RAP)在体外抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)激活肾间质成纤维细胞(NRK-49F)作用及探讨RAP抗纤维化的作用机制。方法:以TGF-β1(2ng/ml)刺激培养的NRK-49F,采用Western印迹观察20～100ng/mlRAP对Notch1/Jagged1表达的影响,同时检测纤维连接蛋白(FN)表达水平以评价细胞外基质合成的变化。结果:以2ng/mlTGF-β1诱导的NRK-49F细胞经不同浓度的RAP干预后培养24、48、72h,呈剂量依赖性和时间依赖性抑制Notch1/Jagged1、FN表达,其中RAP(40ng/ml)抑制效应最为明显(P<0.01),Notch1/Jagged1蛋白表达分别下调53.12%、48.54%、44.55%和46.14%、47.22%、52.15%(P<0.01);FN分别下降37.84%、45.68%、51.65%(P<0.01)。结论:在体外条件下,RAP可以抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞FN表达增加,下调Notch1/Jagged1表达可能是其作用机制之一,提示RAP可能用于防治肾间质纤维化。

基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显升高(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(除Notch1抑制剂组)、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显降低(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显升高(P均<0.05)。结论复方雷公藤制剂可有效减轻佐剂关节炎大鼠关节炎症反应,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞极化,抑制促炎细胞因子的分泌有关。

Notch1/Jagged1信号通路在慢性心力衰竭免疫炎症相关发病机制中的研究进展

心力衰竭是由各种原因造成心肌受损,心脏功能降低而不能满足机体代谢需要的临床综合征。炎症细胞因子在心力衰竭的发生、发展过程中发挥重要作用,Notch1/Jagged1信号通路与炎症细胞因子、炎症反应和免疫反应有关。该文主要讨论了Notch1/Jagged1信号通路通过调节免疫炎症参与慢性心力衰竭的发生及发展情况。

加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Notch1/jagged-1信号通路的影响

目的:观察加味六味地黄汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织Notch1、jagged1蛋白表达的影响。方法:健康成年SD大鼠90只,按随机数字表法分为假手术组、模型组、中药组3组。假手术组和模型组给予生理盐水(2 ml/只/d)灌胃,中药组给予加味六味地黄汤组灌胃(2 ml/d)。HE染色和Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组化和Western blot观察大鼠肾组织Notch1、jagged1蛋白的表达。结果:假手术组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠出现肾间质纤维化,中药组大鼠小管间质病变减轻。与假手术组相同时间点相比较,模型组大鼠小管间质半定量评分、Notch1、jagged1蛋白表达均显著增高,差异有统计学意义;与模型组大鼠相同时间点相比较,加味六味地黄汤显著降低小管间质半定量评分、Notch1、jagged1蛋白表达。结论:加味六味地黄汤可能通过阻断Notch1/jagged1信号通路的活化,发挥抗肾间质纤维化作用。

MiR-15a-3p调节Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-15a-3p通过调节碱性螺旋环螺旋转录因子1(Twist1)/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4(KLF4)信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR实验检测肺腺癌组织、癌旁组织和肺腺癌细胞系(A549、HCC827)及人肺正常上皮细胞(BEAS-2B)中miR-15a-3p和Twist1 mRNA水平。A549细胞分成Control组(未转染)、NC mimics组(转染NC mimics)、miR-15a-3p mimics组(转染miR-15a-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Twist1组(转染si-Twist1)、miR-15a-3p mimics+pcDNA组(共转染miR-15a-3p mimics和pcDNA)、miR-15a-3p mimics+pc-Twist1组(共转染miR-15a-3p mimics和pc-Twist1)。CCK-8法检测细胞增殖情况;TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告分析实验确定miR-15a-3p和Twist1的靶向作用关系;Western blotting实验检测Twist1、Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达水平。结果:在肺腺癌组织和细胞系中,miR-15a-3p表达降低,Twist1 mRNA表达升高(P<0.05)。A549细胞通过转染miR-15a-3p mimics或si-Twist1,上调miR-15a-3p或下调Twist1后,细胞增殖率(24 h、48 h、72 h)显著下降,TUNEL阳性细胞比显著增加,细胞迁移数和侵袭数显著降低(P<0.05)。Twist1是miR-15a-3p的下游靶基因,被miR-15a-3p直接负调控。Twist1的上调明显逆转了miR-15a-3p过表达对A549细胞进展的抑制作用。miR-15a-3p过表达抑制Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达,而继续上调表达Twist1后Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:miR-15a-3p通过靶向抑制Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路,降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进凋亡。

FOXM1通过Hippo信号通路改善肠缺血损伤诱导的铁死亡

目的探讨FOXM1是否参与铁死亡及其在肠缺血损伤中的作用。方法首先评估了FOXM1过表达对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)的caco-2细胞模型中细胞增殖、凋亡、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)、脂质过氧化物(lipid hydroperoxide,LPO)以及铁水平、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和长链酰基辅酶A合酶4(Acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)的变化。此外,对FOXM1进行了体内过表达,并分析了FOXM1对铁水平、ROS产生、脂质过氧化、炎症反应和细胞死亡的影响。通过RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)初步探讨FOXM1保护肠道免受缺血损伤的潜在机制。结果过表达FOXM1可防止缺氧/缺血诱导的铁水平、ROS产生、脂质过氧化、炎症反应和细胞死亡。同时,FOXM1的过表达促进了GPX4的表达,抑制了ACSL4的水平。进一步研究发现,FOXM1的过表达抑制了Hippo信号的关键组分LATS1/Yes相关蛋白(YAP)活性。结论FOXM1通过抑制铁死亡保护肠道免受缺血损伤,其机制可能与Hippo信号有关。本研究为预防和治疗肠缺血损伤提供了新视角。

血液透析滤过对急性重症胰腺炎模型肠损伤及kelch样ECH相关蛋白1/核转录因子红系2相关因子2信号通路的影响

目的探讨血液透析滤过(hemodiafiltration,HDF)对重症急性胰腺炎(severe acute pan-creatitis,SAP)大鼠回肠损伤kelch样ECH相关蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Ke-ap1)/核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组(n=18)、SAP组(n=18)和HDF组(n=18)。假手术组只进行开腹手术;SAP组和血液透析滤过组制备模型,血液透析滤过组在制备模型后立即行12 h的血液透析滤过治疗。手术后检测各组大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡因子[BCL2相关X蛋白(BCL2-associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)]的表达、门静脉血浆内毒素含量、细菌培养情况以及Ke-ap1/Nrf2信号通路相关蛋白的表达。结果与假手术组相比,SAP组大鼠手术后肠黏膜上皮细胞中Bax表达提高(t=8.083,P=0.001),Bcl-2表达降低(t=4.765,P=0.008)。与假手术组相比,SAP组血浆内毒素含量(12小时:t=15.110,P<0.001;24小时:t=19.050,P<0.001;48小时:t=18.330,P<0.001)以及胰腺(12小时:t=23.712,P<0.001;24小时:t=20.901,P<0.001;48小时:t=36.740,P<0.001)、肝脏(12小时:t=23.983,P<0.001;24小时:t=29.692,P<0.001;48小时:t=35.694,P<0.001)中细菌培养阳性率提高。与SAP组相比,HDF组大鼠手术后肠黏膜上皮细胞中Bax表达降低(t=6.796,P=0.002),Bcl-2表达提高(t=5.825,P=0.004);血浆内毒素含量(12小时:t=6.235,P=0.003;24小时:t=12.251,P<0.001;48小时:t=12.980,P<0.001)以及胰腺(12小时:t=16.470,P<0.001;24小时:t=5.950,P=0.004;48小时:t=15.071,P<0.001)、肝脏(12小时:t=2.782,P=0.049;24小时:t=9.790,P<0.001;48小时:t=15.172,P<0.001)中细菌培养阳性率降低。与假手术组相比,SAP组大鼠Keap1(t=11.611,P<0.001)和Nrf2(t=12.241,P<0.001)的表达降低。与SAP组相比,HDF组大鼠Keap1(t=80.658,P=0.001)和Nrf2(t=12.312,P<0.001)的表达提高。结论HDF能够抑制急性重症胰腺炎大鼠肠上皮细胞通透性,有效改善肠功能障碍,并具有抑制内毒素与细菌移位的功能。

Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达

目的:探讨Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法:选取轻度子痫前期患者30例(轻度组)、重度子痫前期患者30例(重度组)、正常妊娠孕妇30例(对照组),采用免疫组化法检测其胎盘组织中Jagged1、Dll4的定位表达,采用荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达。结果:Jagged1主要表达于血管内皮细胞和绒毛滋养层细胞,Dll4主要表达于血管内皮细胞。轻、重度组胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),且重度组低于轻度组(P<0.05);对照组胎盘组织中Jagged1与Dll4在mRNA和蛋白水平上的表达均呈正相关(r=0.806和0.808,P<0.05),轻度组中两者表达的相关性减弱(r=0.675和0.560,P<0.05),而在重度组中未发现两者的相关性。结论:Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中表达失衡,与子痫前期的发病关系密切。

Notch信号通路中的Jagged1配体在血管形成中的作用

Jagged1是组成Notch信号通路的一种配体,Jagged1/Notch主导的Notch信号通路在血管形成中具有重要的作用。本文对Jagged1/Notch信号通路的结构与活化和Jaggedl在血管形成中的作用进行了综述。

针刺经筋点对膝关节骨性关节炎Notch信号通路调控机制及Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2蛋白表达的实验研究

目的 通过针刺经筋点对家兔膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis, KOA)的干预治疗,观察家兔治疗前后血清中缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、膝关节软骨细胞中Notch1、Notch2、以及Jagge1、Jagged2蛋白的表达情况,以探讨在经筋理论指导下的针刺方法对膝关节炎家兔的Notch信号通路的调控机制。方法 选取30只清洁级日本大耳白兔,雌雄各半,随机数字表法抽取8只正常饲养做为空白组,余下兔均按左后肢伸直位石膏固定制动法(Vidman法)制造兔膝关节炎模型。制动满6周时,拆除固定,随机选取空白组和造模家兔各2只,应用量角器检测膝关节关节活动度,并处死取关节软骨作病理观察。将造模后的家兔随机分为模型组、经筋组、西药组,6只/组,并分别于干预4周后处死取样。用量角器和改良Lequesne MG评分标准分别测量和观察治疗前后兔膝关节的关节活动度(ROM)和行为学指标,取关节软骨标本并观测其形态学改变,ELISA法检测血清中HIF-2α含量,并采用Western Blot法检测Notch1、Notch2、以及Jagged1、Jagged2蛋白表达量。结果 治疗后,经筋组和西药组的标本中HIF-2α、Notch1、Notch2、以及Jagged1、Jagged2蛋白的阳性表达率均低于模型组,但略高于空白组(P<0.01)。结论 经筋理论指导下,针刺对膝骨关节炎家兔有良好的疗效,其作用机制可能是降低HIF-2α、受体Notch1、Notch2、以及配体Jagged1、Jagged2蛋白的表达从而对Notch信号通路产生抑制作用,以减轻家兔膝骨关节炎的发展,为临床提供理论支持。

补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1/Jagged1信号通路的影响

目的：通过体外细胞实验研究补肾抑瘤汤对前列腺癌细胞增殖的干预作用及其机制。方法：首先按照血清药理学方法，给予SD大鼠连续灌胃用药7d，取血制备空白血清和补肾抑瘤汤含药血清；然后以人前列腺癌细胞PC-3为模型研究补肾抑瘤汤含药血清对前列腺癌细胞增殖及Notchl／Jaggedl信号通路的影响，噻唑蓝（MTT）比色法检测补肾抑瘤汤含药血清（2．5％，5％，10％，15％）处理PC-3细胞后不同时间点（12，24，36h）的细胞增殖情况，分别应用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Westernblot）分析补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notchl，JaggedlmRNA和蛋白表达的影响。结果：与空白组比较，经补肾抑瘤汤含药血清处理12，24，36h后，PC-3细胞增殖受到了不同程度的抑制，其中以36h的抑制作用最为显著（P〈0．01）；补肾抑瘤汤含药血清对Pc-3细胞Notchl，JaggedlmRNA和蛋白表达均有抑制作用，尤其是补肾抑瘤汤10％，15％含药血清组抑制效果明显（P〈0．05，P〈0．01）。结论：补肾抑瘤汤含药血清能明显抑制PC．3细胞增殖，作用可能与调控N0tchl／Jaggedl表达有一定相关性。

自体黄韧带干预TGF-β1/Smad3信号通路抑制兔硬膜外纤维瘢痕形成的实验研究

目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验动物中心购买的48只6~8月龄的日本大白兔,分为保留黄韧带组,自体脂肪回置组,不保留黄韧带组,对不同组别进行手术造模。术后对每组间的实验动物分别饲养3、6周后进行处死(3、6周各处死8只)。采用Western blot蛋白定量分析、RTPCR技术测定各组样本中的TGF-β1、Smad3蛋白含量及mRNA表达水平,并将以上数据分别进行组间比较,分析其差异性。结果①Western blot检测结果:3、6周保留组TGF-β1、Smad3蛋白表达量小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未发现明显差异。②RT-PCR结果显示:对于TGF-β1、Smad3两者的mRNA表达量而言,3、6周保留组明显小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未见明显差异。结论腰椎手术术后,会形成不同程度的硬膜外纤维瘢痕。若在术中保留自体黄韧带,可减少硬膜外成纤维细胞的形成,其机制与TGF-β1/Smad3信号通路有关。

SphK1/S1P/S1PR2信号通路促进肌生成:运动改善骨骼肌健康的新视角

背景:近年来,运动改善骨骼肌的健康已成为学者们关注的一个重要研究内容,适宜的运动对骨骼肌具有积极的作用,其中在运动激活鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体2(sphingosine-1-phosphate receptor2,S1PR2)信号通路如何改善骨骼肌的健康,正受到科研人员的重视。目的:研究运动经SphK1/S1P/S1PR2信号通路如何改善骨骼肌的健康,探索治疗相关肌肉疾病的新方法,以改善人的骨骼肌健康。方法:检索Web of Science、PubMed、中国知网、万方和维普数据库从建库至今与文章主题相关的文献,以“signaling pathway,SphK1,S1P,S1PR2,skeletal muscle,satellite cell,myogenesis,exercise”为英文检索词,以“信号通路,SphK1,S1P,S1PR2,骨骼肌,卫星细胞,肌生成,运动”为中文检索词,最终纳入69篇文献进行分析。结果与结论:①SphK1/S1P/S1PR2信号通路是一个复杂的调控网络,通过SphK1催化产生的S1P,与S1PR2等受体的相互作用,触发下游信号转导过程,进而调控细胞、组织、器官和系统的多种生物学功能。②SphK1/S1P/S1PR2信号通路能调控卫星细胞增殖和成肌细胞分化,改善肌生成。③文章通过文献资料调研法分析了SphK1/S1P/S1PR2信号通路的生理基础以及运动对其影响的可能性。急性有氧运动可提高骨骼肌中SphK1的表达,人体和动物研究中已证实急性和长期运动均可提高骨骼肌中S1P水平,另外研究表明长期抗阻运动可提高S1PR2在骨骼肌中的表达,部分实验结果表明急性和长期运动对肌肉或者血液中S1P水平无显著影响,出现不同结果的原因可能是选择的研究对象、方式、强度及频率不同,而具体机制尚不明确。④研究认为,运动能够促进SphK1/S1P/S1PR2信号通路在骨骼肌中的表达,调控下游相关信号通路,并且针对这一信号通路的研究可能为骨骼肌疾病的治疗提供新的策略和方法,从而改善骨骼肌健康。⑤未来应深化对SphK1/S1P/S1PR2信号通路与骨骼肌健康关联的研究,进一步揭示其与卫星细胞、成肌细胞的调控关系及与上下游通路的相互作用,挖掘其临床应用价值,制定康复方案时考虑该通路变化,探索不同运动对该通路的影响机制,并将其作为潜在治疗靶点,结合人体肌肉模型提升研究深度和准确性。

miR-155-5p介导PIK3R1负调控PI3K/AKT信号通路促进原发性干燥综合征人唾液腺上皮细胞增殖

目的探讨miR-155-5p靶向作用于PIK3R1调控PI3K/AKT信号通路对原发性干燥综合征人唾液腺上皮细胞(pSSHSGECs)的影响。方法通过双荧光素酶验证miR-155-5p与PI3K/AKT通路的靶向关系。利用TRAIL及INF-γ刺激细胞,模拟pSS-HSGECs细胞模型;空白组:HSGECs,模型组:TRAIL+INF-γ+HSGECs,空转组:TRAIL+INF-γ+HSGECs+miR-155-inhibitor-NC;miR-155抑制组:TRAIL+INF-γ+IHSGECs+miR-155-inhibitor;CKK-8法、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活力、细胞周期及凋亡率、细胞增殖能力。ELISA、RT-PCR方法分别检测相关细胞因子、miR-155-5p表达。蛋白质免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路蛋白表达。结果双荧光素酶检测结果表明,miR-155-5p与PI3K/AKT通路存在靶向关系,且PIK3R1mRNA为二者的结合位点。与空白组相比,模型组细胞活力、细胞克隆形成能力、IL-10、IL-4水平降低;细胞凋亡率、细胞周期G2期比例、TNF-α、IL-6、miR-155-5p、PIK3R1 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比率、PIK3R1mRNA蛋白相对表达显著升高(P<0.01)。与模型组及空转组相比,miR-155抑制组细胞活力、G1期比例、克隆形成能力、IL-10和IL-4水平上升;同时细胞凋亡率、细胞周期G2期比例、TNF-α、IL-6、miR-155-5p、PIK3R1 mRNA表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比率及PIK3R1蛋白相对表达下降(P<0.05)。结论miR-155-5p可靶向作用于PI3K1mRNA,负向调节PI3K/AKT信号通路的过表达,改善pSSHSGECs增殖与凋亡异常,调节炎症反应。

抑制Notch1/Jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞“归巢”并改善哮喘

目的观察间充质干细胞(BMSCs)归巢调节哮喘Th1/Th2“漂移”与Notch1/Jagged1通路的关系。方法20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组:正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、BMSCs移植组(BMSCs)、BMSC+Notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型,尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学,酶联免疫吸附法检测肺组织白介素(IL)-5、IL-13、IFN-γ,RT-PCR法检测肺组织Notch1、Jagged1基因表达,免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达,免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、Notch1、Jagged1蛋白表达。结果与NC组比较,MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低,IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高,Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高,BMSCs组Notch1、Jagged1蛋白表达降低,BMSCs+Notch抑制剂组IL-5、IL-13、Notch1、Jagged1mRNA和蛋白降低(P<0.05或P<0.01)。与BMSCs组比较,BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高,IL-13、Notch1mRNA表达降低(P<0.05)。结论BMSCs向哮喘肺组织归巢对Th1/Th2“漂移”产生调节作用,Notch1/Jagged1通路可能参与其过程。

可溶性Jagged1/Fc对大鼠骨骺干细胞Notch信号通路的影响研究

目的探究可溶性Jagged1/Fc对鼠骨骺干细胞Notch信号通路的激活及生物学特性的影响.方法将2周龄内SP大鼠离体培养获取大鼠骨骺干细胞,设置不同浓度(0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL)的Jagged1/Fc对第3代骨骺干细胞进行干预诱导,体外培养,在倒置显微镜下观察细胞生长情况,记录细胞贴壁情况及时间、细胞形态变化及增殖情况,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,及使用Western印迹检测Jagged1/Fc对骨骺干细胞增殖分化影响.结果经可溶性Jagged1/Fc干预诱导后,与对照组比较,实验组与对照组细胞形态变化基本类似,但浓度为0.5μg/mL的Jagged1/Fc实验组细胞增殖速度显著加快,贴壁所需的时间较对照组缩短(P<0.05).CollagenⅡ蛋白表达明显增多,胶原蛋白X表达明显减少.结论单个Jagged1/Fc配体可激活Notch信号通路,促进骨骺干细胞增殖的最适浓度是0.5μg/mL.

敦煌平胃丸对胃癌前病变大鼠Notch信号通路中Notch2和Jagged1表达的影响

目的:观察敦煌平胃丸对胃癌前病变(PLGC)模型大鼠胃黏膜组织Notch信号通路中Notch2和Jagged1表达的影响。方法:采用复合法建立PLGC大鼠模型,将32只大鼠随机分为4组,每组8只。敦煌平胃丸组用敦煌平胃丸浸膏按每日生药96 g/kg掺入饲料中喂养给药,共计12周。观察大鼠胃黏膜病理组织学变化;采用Western Blot检测Notch2和Jagged1蛋白表达;采用RT-PCR检测Notch2和Jagged1mRNA的表达。结果:PLGC大鼠胃黏膜组织Notch2与Jagged1mRNA及蛋白表达较正常大鼠胃黏膜组织均明显上调(P<0.05)。敦煌平胃丸能明显改善PLGC大鼠胃黏膜腺体萎缩、肠化增生,下调PLGC大鼠胃黏膜组织中Notch2与Jagged1表达水平(P<0.05)。结论:Notch2、Jagged1激活了Notch信号通路,在PLGC发生发展中有重要意义。敦煌平胃丸治疗PLGC可能与下调Notch信号通路中Notch2与Jagged1表达有关。

中药调控TGF-β1/Smad信号通路防治肝纤维化的研究进展

肝纤维化(Hepatic fibrosis,HF)是各种慢性肝病向肝硬化进展的必经阶段,不及时治疗将发展为肝硬化,甚至肝癌。因此,延缓或逆转HF具有重要临床意义。目前,西医尚无针对HF治疗的特效药物,故寻找新的治疗方案势在必行。TGF-β1/Smad信号通路是影响HF进展的关键通路,本文以TGF-β1/Smad信号通路为切入点,梳理、总结近年来该信号通路对炎症反应、细胞凋亡、氧化应激、细胞自噬、细胞外基质失衡等HF病理过程的调控作用,并对中药通过抑制TGF-β1/Smad信号通路治疗HF的相关研究予以综述,旨在揭示中药的作用靶点,为中医药防治HF及其现代化研究提供新的思路和策略。