发酵虫草菌粉和泼尼松对急性马兜铃酸肾病大鼠肾小管Notch2／hes-1信号通路活化的影响

目的探讨发酵虫草菌粉及泼尼松对急性马兜铃酸肾病(acute aristolochic acid nephropathy,AAAN)大鼠肾小管上皮细胞Notch2/hes-1信号通路的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、发酵虫草菌粉组(CS组)、泼尼松组及CS加泼尼松组,每组10只。以马兜铃酸A纯品100mg/(kg·d)连续灌胃3天建立AAAN模型。CS组予发酵虫草菌粉5.0g/(kg·d)灌胃,泼尼松组予泼尼松0.5mg/(kg·d)灌胃,CS加泼尼松组予两药联合灌胃,连续3周。检测各组大鼠肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)],HE染色观察肾脏病理改变,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组织化学法及Westernblot法检测大鼠肾组织Notch2、Hes-1蛋白表达。结果 HE染色结果显示,正常组大鼠肾组织结构正常;模型组大鼠出现肾小管坏死改变;泼尼松组、CS组及CS加泼尼松组肾小管病理明显改善。与正常组比较,模型组大鼠BUN和SCr水平、肾小管间质半定量评分、凋亡细胞比例以及Notch2、Hes-1蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,CS组、泼尼松组及CS加泼尼松组上述指标均显著降低(P<0.01)。以CS加泼尼松组降低更明显(P<0.05,P<0.01)。结论 Notch2/hes-1信号通路活化可能参与AAAN肾小管上皮细胞凋亡的发生。CS及泼尼松对AAAN有肾保护作用,但联合干预疗效更佳,其机制可能与抑制肾组织Notch2/hes-1信号通路活化有关。

Notch2/Hes-1信号通路活化参与调控肾缺血-再灌注诱导炎症因子的表达研究

目的观察肾缺血-再灌注(IR)大鼠肾小管Notch2/Hes-1信号通路的活化,及信号通路关键酶γ-泌肽酶抑制剂DAPT对血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法 45只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和γ-泌肽酶抑制剂组(DAPT组),每组15只,按先摘除右肾然后夹闭左肾蒂60 min的方法建立肾I/R模型。Sham组和I/R组手术前后灌服生理盐水2 ml/d,DAPT组手术前后灌服DAPT 500μg/(kg·d)。结果HE染色结果显示,Sham组大鼠肾小管间质未见明显病变;I/R组肾小管出现小管扩张、管腔内管型、刷状缘丢失、间质炎症细胞浸润等病变,小管损伤以I/R后24 h最重。I/R组大鼠24、48和72 h的尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)、肾小管间质半定量计分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间Sham组增高(P<0.01);而经DAPT处理后,小管结构较I/R组完整清晰,病理改变明显减轻。DAPT组BUN、Scr、肾小管间质半定量评分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间I/R组大鼠降低(P<0.01)。结论肾I/R可诱导肾小管Notch2/Hes-1信号通路活化,并参与调控炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1表达,γ-泌肽酶抑制剂DAPT可能具有一定的肾保护作用。

姜黄素后处理对缺血再灌注肾损伤大鼠Notch2/Hes-1通路的影响

目的探讨姜黄素后处理大鼠肢体缺血再灌注肾损伤对Notch2/Hes-1通路的影响。方法选取成年雄性SD大鼠80只,体重280~320 g,6~8月龄,采用随机数字表法,将其分成4组(各20例):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、姜黄素后处理组(I/R+Cur组)及抑制剂组(I/R+DAPT组)。采用夹闭双下肢股动脉4 h再灌注4 h复制肢体缺血再灌注肾损伤模型。在大鼠肢体缺血后4 h,I/R+Cur组经腹腔注射姜黄素200 mg/kg;I/R+DAPT组经腹腔注射DAPT 0.5μmol。于再灌注4 h时经颈动脉取血,待检血浆肌酐、尿素氮、丙二醛等指标。随后处死大鼠,采用HE染色检测肾组织病理变化,并对肾小管间质进行半定量评分;应用Western blotting和RT-PCR分别测定Notch2受体蛋白和靶分子Hes-1 mRNA的表达;通过ELISA测定肾组织TNF-α及IL-1β的表达。结果与Sham组比较,I/R组可见肾小管出现小管明显扩张,管腔内可见管型,刷状缘消失、肾间质炎症细胞浸润等病变,肾小管间质半定量评分升高(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);与I/R组比较,I/R+Cur组肾间质炎症细胞浸润减少,视野内未见肾小管扩张,偶可见少量管型等病理改变,肾小管间质半定量评分下降(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);I/R+DAPT组各指标与I/R+Cur组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素后处理可减轻大鼠肢体缺血再灌注时肾损伤,其作用机制可能与下调Notch2/Hes-1信号通路有关。

活血灵方对大鼠下肢深静脉血栓形成及Notch2/Hes-1表达的影响

目的:探讨活血灵方对大鼠下肢深静脉血栓形成(Deepvenousthrombosis,DVT)及Notch2/Hes-1通路的影响。方法:50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和活血灵方低剂量组(6.3 g/kg)、中剂量组(12.6 g/kg)、高剂量组(25.2 g/kg),每组10只。对照组仅进行缝合伤口,其余各组均通过结扎下肢静脉的方法构建下肢DVT模型;建模成功后按照各组给药剂量进行灌胃处理,持续灌胃14 d,模型组及对照组灌胃等量蒸馏水;以苏木精-伊红染法检测大鼠血栓形成处静脉组织病理学变化;全自动血凝仪测定大鼠凝血相关指标;全自动血液流变学仪测定大鼠血液流变相关指标;以酶联免疫吸附试剂盒检测大鼠血栓形成处静脉组织中炎症、氧化应激相关指标表达;蛋白免疫印迹法检测血栓形成处静脉组织中Notch2/Hes-1通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠活动量减少、双足肿胀、下肢皮肤青紫,股静脉血管中有紫黑色物质存在,血管壁呈现炎性浸润,D-二聚体水平(D-dimer)、血浆黏度、纤维蛋白、红细胞压积显著升高(P<0.05),凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)显著降低(P<0.05),血管中炎症因子、丙二醛(MDA)、Notch2、Hes-1蛋白表达水平显著增多(P<0.05),谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,活血灵方各剂量组大鼠血栓形成情况、APTT、TT、血浆黏度、炎性反应、氧化应激反应等均得到一定的缓解(P<0.05),Notch2、Hes-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:活血灵方缓解大鼠下肢DVT的作用可能是通过抑制Notch2/Hes-1通路实现。

腹炎消通过调控Notch2/Hes-1通路对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的影响

目的探究腹炎消对重症急性胰腺炎大鼠急性肺损伤的影响及可能的作用机制。方法SD大鼠随机选取12只作为假手术组,其余大鼠采用3.5%牛磺胆酸钠诱导建立重症急性胰腺炎模型。造模成功后将大鼠分为模型组,DAPT(Notch信号通路抑制剂)组,腹炎消低、高剂量组,腹炎消+DAPT组,每组12只,给药24 h。计算肺组织湿/干质量比,采用血气分析仪测定血氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2)),并计算氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2)),比色法检测血清淀粉酶(AMY)活性,ELISA法检测肺匀浆液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)水平,HE染色观察胰腺、肺组织病理学变化,免疫组化法和RT-qPCR法检测肺组织Notch2、Hes-1蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)降低(P<0.05),PaCO_(2),肺组织湿/干质量比,血清AMY活性,肺组织TNF-α、IL-6、ICAM-1水平及Notch2、Hes-1蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),胰腺和肺组织水肿严重、炎性细胞浸润明显,有出血和坏死,肺泡间隔增厚;与模型组比较,DAPT组和腹炎消各剂量组以上指标均得到改善(P<0.05)。结论腹炎消可能通过抑制Notch2/Hes-1通路的激活,降低肺部炎症,改善与重症急性胰腺炎相关的急性肺损伤。

姜黄素对脓毒症急性肺损伤的炎性反应及Notch2/Hes-1通路的影响

目的探讨姜黄素对脓毒症急性肺损伤的炎症反应及对Notch2/Hes-1通路的影响。方法36只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组及姜黄素干预组。HE染色观察各组大鼠肺组织病理学改变;测量各组大鼠肺组织湿/干重(W/D)比。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平;采用免疫组织化学方法与Western blot方法检测各组大鼠肺组织Notch2与Hes-1蛋白的表达。结果LPS诱导的急性肺损伤大鼠肺组织严重出血且有明显的炎性细胞浸润,血清TNF-α与ICAM-1水平显著升高;而给予姜黄素干预后,急性肺损伤大鼠肺组织炎性明显减轻,血清TNF-α与ICAM-1水平显著降低(P<0.01)。免疫组织化学结果与Western blot结果显示,模型组大鼠肺组织Notch2与Hes-1蛋白表达的平均光密度值显著升高(P<0.01);而给予姜黄素干预后,急性肺损伤大鼠肺组织Notch2与Hes-1蛋白表达的平均光密度值显著降低(P<0.01)。结论姜黄素能够减轻脓毒症急性肺损伤大鼠的炎性反应,其机制可能与Notch2/Hes-1通路相关。