Hes1调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路的一种物理机制

基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究发状分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split 1,Hes1)调控蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)-鼠双微体2(Murine Double Minute2,MDM2)-抗癌基因p53(p53)-第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)通路的一种物理机制.研究发现,Hes1通过与PTEN结合抑制PTEN表达,并调控AKT信号.表明了Hes1蛋白的合成,以及Hes1与PTEN相互作用调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路信号,将会有效地控制细胞结果.Hes1作为AKT-MDM2-p53-PTEN信号通路中上游调节的重要因素,还可以在一定程度上通过影响p53蛋白功能,改变p53对肿瘤的抑制性.理论结果可用于预测Notch通路信号异常诱导的致癌性,并进一步揭示了Notch信号通路影响细胞AKT-MDM2-p53-PTEN通路的激活机制.

基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显升高(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(除Notch1抑制剂组)、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显降低(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显升高(P均<0.05)。结论复方雷公藤制剂可有效减轻佐剂关节炎大鼠关节炎症反应,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞极化,抑制促炎细胞因子的分泌有关。

ORY-1001靶向赖氨酸特异性去甲基化酶1下调胶质母细胞瘤Notch/HES1通路的表达并发挥抗肿瘤作用

目的 探究赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)抑制剂ORY-1001对胶质母细胞瘤(GBM)的抑瘤作用和机制。方法 从公开数据库(TCGA和HPA)下载相关数据,分析LSD1在GBM和正常脑中的表达情况。将24只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组与ORY-1001组,12只/组。肿瘤细胞种植后,每7 d用400μg/kg ORY-1001进行灌胃,检测肿瘤生长和动物生存时间,评估ORY-1001对GBM的抗肿瘤效应。检测A490 nm值测定ORY-1001对GBM细胞活力的影响。Western blotting检测ORY-1001对LSD1表达的影响。利用慢病毒试剂,构建稳定敲降LSD1的GBM细胞(sh-LSD1),并通过动物成瘤实验评估沉默LSD1在活体动物内的作用以检测LSD1药物抑制获得的表型特异性。运用生物信息学方法分析与LSD1相关的基因及通路。Western blotting检测沉默LSD1及不同剂量ORY-1001治疗后Notch/HES1通路的表达。通过慢病毒转染,构建稳定过表达Notch1(oeNotch1)的U87细胞。测定过表达Notch1后,ORY-1001对GBM动物模型肿瘤生长及生存时间的影响。通过ChIP揭示ORY-1001对Notch/HES1通路的具体调控机制。结果 LSD1在GBM中高表达,并与患者的预后呈负相关(P<0.001)。ORY-1001治疗以及LSD1基因沉默都使荷瘤动物肿瘤负荷减轻(P<0.05)和生存时间延长(P<0.001),对多种GBM细胞的活力均表现出抑制作用(P<0.05)。ORY-1001呈剂量依赖性地抑制LSD1的表达。Notch通路富集了与LSD1抑制相关的差异基因,LSD1沉默及ORY-1001治疗后Notch/HES1通路表达显著下调(P<0.05),逆转了ORY-1001对GBM的抗肿瘤作用(P<0.05)。结论 ORY-1001通过抑制GBM中LSD1的表达而下调Notch/HES1通路,并发挥抗肿瘤效应。

基于Notch1/Hes1通路分析替莫唑胺对肺癌干细胞增殖、分化的影响

目的基于Notch1/Hes1通路探讨和分析替莫唑胺抑制肺癌干细胞增殖、分化的影响作用及机制。方法选取2020年1月至2022年12月江西省新余市人民医院呼吸与危重症医学科收治的60例肺癌患者开展此次临床实践研究,对患者行肺癌干细胞A549(A549-SCs)分离培养,采用流式细胞术鉴定A549-CSCs,检测筛选肺癌干细胞。采用随机数字表法将筛选出的肺癌干细胞分为对照组和观察组,每组30例。对照组不作任何处理,观察组采用替莫唑胺进行处理,对比两组对肺癌干细胞活力抑制情况、对肺癌干细胞迁移能力的影响以及A549-CSCs的细胞分化能力相关因子Sox2和Oct4的mRNA水平。结果观察组肺癌干细胞mRNA及蛋白表达量、Notch1、Hes1蛋白表达量低于对照组,观察组A549-CSCs的细胞分化能力相关因子Sox2和Oct4的mRNA水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于Notch1/Hes1通路角度来看,替莫唑胺对于肺癌干细胞增殖、分化具有抑制作用,替莫唑胺主要是通过对肺癌干细胞Sox2、Oct4、mRNA蛋白表达产生抑制来实现上述功效。

基于Notch/Hes1和PI3K/AKT/mTOR信号通路研究蜈蚣败毒饮对银屑病小鼠的治疗作用及机制

目的:基于Notch/Hes1和PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨蜈蚣败毒饮治疗银屑病模型小鼠的作用机制。方法:采用脱毛区域涂抹咪喹莫特诱导建立银屑病小鼠模型,将成模小鼠按随机数字表分为模型组、甲氨蝶呤(2.2 mg/kg)阳性对照组及蜈蚣败毒饮低(30 g/kg)、中(60 g/kg)、高(120 g/kg)剂量组,以脱毛区域涂抹凡士林的10只小鼠作为正常对照组。灌胃给药,正常对照组和模型组小鼠灌胃相应体积纯水。除甲氨蝶呤组小鼠前4 d每天灌胃甲氨蝶呤,后4 d每天灌胃相应体积纯水外,其余各组均连续灌胃8 d。采用皮损严重程度指数(PASI)评估各组小鼠银屑病严重程度,采用酶联免疫法测定治疗后各组小鼠血清IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17a、IL-23a水平,采用qRT-PCR法和Western Blot法检测各组小鼠皮损部位Notch/Hes1及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠PASI评分、血清炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17a、IL-23a)水平显著升高,损伤皮肤组织Notch-1、Notch-2、Jagged-1、Hes1、AKT、PI3K、mTOR mRNA及蛋白和p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠PASI评分、血清炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-12、IL-17a、IL-23a)水平显著降低,损伤皮肤组织Notch-1、Notch-2、Jagged-1、Hes1、AKT、PI3K、mTOR mRNA及蛋白和p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:蜈蚣败毒饮对银屑病具有较好的治疗作用,可显著降低银屑病小鼠血清炎症因子水平,并能抑制Notch/Hes1和PI3K/AKT/mTOR信号通路。

转录因子RUNX1上调MFAP2调控Notch信号通路促进甲状腺癌血管生成

目的探究微纤维相关蛋白2(MFAP2)在甲状腺癌中的功能以及其影响血管生成的分子机制。方法生信分析靶基因在甲状腺癌组织中的表达量及其富集通路,预测靶基因潜在的上游转录因子并分析其表达量与靶基因的相关性以及结合位点。双荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀(ChIP)实验验证基因之间的结合关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测靶基因的表达水平,western blot检测信号通路和血管形成相关蛋白的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和血管形成实验检测细胞活力和血管形成能力。结果生信分析确定MFAP2在甲状腺癌中高表达(P<0.05),qRT-PCR发现MFAP2在甲状腺癌细胞FTC-133、TCP-1和IHH-4显著高表达于人甲状腺正常细胞NTHYORI3-1(均P<0.05)。MFAP2富集在Notch信号通路上,Runt相关转录因子1(RUNX1)与MFAP2表达呈正相关,RUNX1与MFAP2上游2000 bp处有结合位点。qRT-PCR实验证实RUNX1与MFAP2在甲状腺癌细胞中高表达(P<0.05),双荧光素酶报告实验和ChIP实验验证了RUNX1与MFAP2之间存在靶向结合关系。CCK-8实验和血管形成实验证实MFAP2通过激活Notch信号通路促进甲状腺癌细胞的活力和肿瘤的血管生成。回复实验证实RUNX1/MFAP2轴通过Notch轴促进甲状腺癌的血管生成。结论RUNX1/MFAP2/Notch信号网络在甲状腺癌进展中有促癌机制,提示抑制该调控网络的药物开发可能是甲状腺癌治疗的新途径。

基于Notch信号通路探讨芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠Th1/Th2免疫平衡的调节机制

目的探讨果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)辅助性T细胞1(Helper T cells 1,Th1)和辅助性T细胞2(Helper T cells 2,Th2)失衡中的作用及芪蛭皱肺颗粒的干预机制。方法70只Wistar大鼠随机挑选10只作为空白对照组,其余大鼠均采用香烟烟雾(CS)联合气管滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)法建立COPD模型,空白对照组及造模组各随机挑选3只大鼠验证造模是否成功。造模结束进行灌胃给药干预,造模组大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组(67.5μg·kg^(-1))及芪蛭皱肺颗粒高中低剂量组(3.24、1.62、0.81 g·kg^(-1)),分别给予生理盐水、醋酸地塞米松混悬液、芪蛭皱肺高、中、低剂量混悬液进行灌胃干预,空白对照组同模型对照组,灌胃等体积生理盐水。经28天造模及28天治疗后,采用动物肺功能测试系统检测吸气峰流速(Peak Inspiratory Flow,PIF)和呼气峰流速(Peak Expiratory Flow,PEF),处死大鼠提取肺脏、脾脏、血清及支气管肺泡灌洗液(BALF),苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织病理变化,酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定血清及BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,流式细胞仪检测脾脏Th1/Th2细胞水平,免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织Notch1、Hes家族发状分裂相关增强子1(Hes1)、Hey家族发状分裂相关增强子1(Hey1)蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测肺组织Notch1、Hes1、Hey1基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠肺功能显著降低(P<0.05),肺组织出现炎性细胞浸润、支气管结构破坏等病变,血清及BALF中TNF-α含量显著升高(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著降低(P<0.05),Th2细胞百分比显著升高(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05),差异均具有统计学意义;与模型对照组比较,各给药组大鼠肺功能显著升高(P<0.05),肺组织病理损伤均有所减轻,血清及BALF中TNF-α含量显著降低(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著升高(P<0.05),Th2细胞百分比显著降低(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),差异均具有统计学意义。结论芪蛭皱肺颗粒通过抑制Notch信号通路调节Th1/Th2平衡,从而改善COPD大鼠肺功能及病理损伤,影响其免疫功能。

基于Notch1/Hes1信号通路探讨葛根素对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的探讨葛根素对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响及关于缺刻基因(Notch)1/发状分裂相关增强子(Hes)1信号通路表达的变化机制。方法将96只雄性Wistar大鼠(200~250 g)随机分成3组:对照组:进行假手术;模型组:按照模型制备操作结扎大鼠心脏冠脉;葛根素干预组:同模型组进行模型制备后24 h进行腹腔注射葛根素120 mg/(kg·d)。3组按照术后1、2、3、4 w记录各时间点血液流变学指标后处死大鼠,运用TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡情况;Western印迹检测心肌细胞凋亡基因蛋白及Notch1/Hes1信号通路蛋白的表达情况。结果模型组左心室功能较对照组显著降低(P<0.05),葛根素干预组左心室功能较模型组明显改善(P<0.05);模型组与葛根素干预组心肌梗死面积差异显著(P<0.05),手术4 w后,模型组左心室重量较对照组显著上调(P<0.05),葛根素干预组左心室重量较模型组明显降低(P<0.05);对照组未出现明显心肌细胞凋亡,模型组和葛根素干预组心肌梗死病灶附近均出现心肌细胞凋亡现象,但葛根素干预组较模型组显著改善(P<0.05);术后1、3、4 w时,模型组B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)/Bcl-2数值较相同时间的对照组显著上升(P<0.05),术后3、4 w时,模型组的Bax/Bcl-2数值较同组术后1 w时显著上升,且4 w时上升更加显著(P<0.05),4 w时,葛根素干预组Bax/Bcl-2数值较模型组显著下降,葛根素干预能够明显激活Notch1/Hes1信号通路的表达(P<0.01)。结论心肌梗死大鼠心肌细胞会发生明显凋亡现象,并且伴随左心室功能降低,使用葛根素进行干预能够通过促进Bcl-2抑制Bax基因的表达一定程度上减轻心肌细胞凋亡,有助于左心室功能改善及减轻心室重构,这些过程与其激活Notch1/Hes1信号通路的表达密切相关。

γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力及Notch2/hes1信号通路表达的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂DAPT对庆大霉素致大鼠耳损伤及修复过程中听力变化及Notch2/hes1信号通路表达的影响。方法 72只成熟大鼠随机分成三组,每组24只;对照组给予生理盐水3ml.kg-1.d-1腹腔注射,连继10天,庆大霉素组给予Gen 120mg.kg-1.d-1腹腔注射,连继10天,DAPT组给予DAPT 5mg.kg-1.d-1腹腔注射,连用5天后停用2天,再用3天,同时腹腔注射Gen 120mg.kg-1.d-1,连继10天。各组注射前及注射后1、14、28天进行ABR检测后处死动物,应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路的表达。结果对照组注射前后ABR反应阈无明显变化,与注射前相比,DAPT组和庆大霉素组注射后1、14、28天ABR阈值均明显升高,但随时间的延长阈值有所下降(P<0.05),其中,第28天DAPT组ABR反应阈较庆大霉素组下降明显(P<0.05);与对照组相比,DAPT组和庆大霉素组Notch2/hes1的表达均明显增高(P<0.05);与庆大霉素组相比,DAPT组的Notch2/hes1表达明显降低(P<0.05)。结论在庆大霉素致耳损伤及修复过程中,DAPT可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻耳蜗毛细胞损伤并促进耳蜗毛细胞修复,进而促进听功能恢复。

发酵虫草菌粉和泼尼松对急性马兜铃酸肾病大鼠肾小管Notch2／hes-1信号通路活化的影响

目的探讨发酵虫草菌粉及泼尼松对急性马兜铃酸肾病(acute aristolochic acid nephropathy,AAAN)大鼠肾小管上皮细胞Notch2/hes-1信号通路的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、发酵虫草菌粉组(CS组)、泼尼松组及CS加泼尼松组,每组10只。以马兜铃酸A纯品100mg/(kg·d)连续灌胃3天建立AAAN模型。CS组予发酵虫草菌粉5.0g/(kg·d)灌胃,泼尼松组予泼尼松0.5mg/(kg·d)灌胃,CS加泼尼松组予两药联合灌胃,连续3周。检测各组大鼠肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)],HE染色观察肾脏病理改变,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组织化学法及Westernblot法检测大鼠肾组织Notch2、Hes-1蛋白表达。结果 HE染色结果显示,正常组大鼠肾组织结构正常;模型组大鼠出现肾小管坏死改变;泼尼松组、CS组及CS加泼尼松组肾小管病理明显改善。与正常组比较,模型组大鼠BUN和SCr水平、肾小管间质半定量评分、凋亡细胞比例以及Notch2、Hes-1蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,CS组、泼尼松组及CS加泼尼松组上述指标均显著降低(P<0.01)。以CS加泼尼松组降低更明显(P<0.05,P<0.01)。结论 Notch2/hes-1信号通路活化可能参与AAAN肾小管上皮细胞凋亡的发生。CS及泼尼松对AAAN有肾保护作用,但联合干预疗效更佳,其机制可能与抑制肾组织Notch2/hes-1信号通路活化有关。

姜黄素对糖尿病肾病大鼠肾功能及肾组织JNK、Notch2/hes1信号通路的影响

目的观察姜黄素对糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能以及肾脏内质网应激介导的凋亡信号通路JNK、Notch2/hes1的影响,探讨姜黄素肾脏保护作用的机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组、姜黄素组各20只。模型组和姜黄素组给予腹腔注射链脲佐菌素50 mg/kg建立DN模型。造模成功后,姜黄素组给予姜黄素混悬液200 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等体积1%羧甲基纤维素钠灌胃,连续8周。8周后,采集大鼠腹主动脉血检测血糖(GLU)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血浆白蛋白(ALB);处死大鼠,取肾脏行HE及PAS染色观察肾组织病理改变;采用RT-PCR及Western blotting法分别检测肾组织JNK、Notch2、hes1 mRNA及蛋白。结果与正常组比较,模型组GLU、HbA1c、BUN、Scr水平升高而ALB水平降低;与模型组比较,姜黄素组GLU、HbA1c、BUN、Scr水平降低而ALB水平升高(P均<0.05)。正常组肾脏组织结构正常,模型组和姜黄素组肾脏组织均呈现不同程度的肾间质小管片状坏死,小管上皮细胞肿胀和空泡变性,肾小管上皮细胞坏死脱落,管腔变大,炎性细胞浸润,其中以模型组肾脏组织损伤更明显。与正常组比较,模型组肾组织JNK、Notch2、hes1 mRNA及蛋白表达升高;与模型组比较,姜黄素组肾组织JNK、Notch2、hes1 mRNA及蛋白表达降低(P均<0.05)。结论姜黄素能够降低DN大鼠的血糖,改善肾功能;其可能通过抑制肾脏内质网应激介导的凋亡信号通路JNK、Notch2/hes1,抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。

Notch2/Hes-1信号通路活化参与调控肾缺血-再灌注诱导炎症因子的表达研究

目的观察肾缺血-再灌注(IR)大鼠肾小管Notch2/Hes-1信号通路的活化,及信号通路关键酶γ-泌肽酶抑制剂DAPT对血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法 45只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和γ-泌肽酶抑制剂组(DAPT组),每组15只,按先摘除右肾然后夹闭左肾蒂60 min的方法建立肾I/R模型。Sham组和I/R组手术前后灌服生理盐水2 ml/d,DAPT组手术前后灌服DAPT 500μg/(kg·d)。结果HE染色结果显示,Sham组大鼠肾小管间质未见明显病变;I/R组肾小管出现小管扩张、管腔内管型、刷状缘丢失、间质炎症细胞浸润等病变,小管损伤以I/R后24 h最重。I/R组大鼠24、48和72 h的尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)、肾小管间质半定量计分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间Sham组增高(P<0.01);而经DAPT处理后,小管结构较I/R组完整清晰,病理改变明显减轻。DAPT组BUN、Scr、肾小管间质半定量评分、血清TNF-α和IL-6水平、肾小管Notch2、Hes-1、MCP-1蛋白表达比相同时间I/R组大鼠降低(P<0.01)。结论肾I/R可诱导肾小管Notch2/Hes-1信号通路活化,并参与调控炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1表达,γ-泌肽酶抑制剂DAPT可能具有一定的肾保护作用。

金匮肾气丸对庆大霉素诱导肾损伤大鼠肾组织Notch2/hes1信号通路的影响

目的:动态观察肾气丸对Notch2/hes1通路在庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中表达的影响。方法:72只大鼠随机分成空白组(生理盐水灌胃,6ml/kg;生理盐水腹腔注射,3ml/kg,1次/d,持继10d)、金匮肾气丸组(金匮肾气丸灌胃:0.6g·kg-1·d-1);Gen,120mg/kg(3ml/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)和模型组(生理盐水灌胃,6ml/kg;Gen,120mg/kg,1次/d,腹腔注射,持继10d)。应用光镜观察肾小管损伤情况;应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路在造模后1、14、28d肾脏的动态表达情况。结果:肾脏病理切片显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组、肾气丸组造成的肾脏损伤程度有所不同;在第28天,各组肾小管基本恢复正常。免疫印迹蛋白、RT-PCR显示:在第1、14天,与空白组相比,模型组和金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显增高(P<0.05);在第28天,各组表达差异无统计学意义(P>0.05);在第1、14天,与模型组相比,金匮肾气丸组Notch2/hes1的表达明显减少(P<0.05);在第28天,两组表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Notch2/hes1信号通路可能是庆大霉素诱导肾损伤及修复过程中的重要角色之一,肾气丸可能通过抑制Notch2/hes1信号通路减轻肾脏损伤并促进肾小管上皮细胞修复。

姜黄素后处理对缺血再灌注肾损伤大鼠Notch2/Hes-1通路的影响

目的探讨姜黄素后处理大鼠肢体缺血再灌注肾损伤对Notch2/Hes-1通路的影响。方法选取成年雄性SD大鼠80只,体重280~320 g,6~8月龄,采用随机数字表法,将其分成4组(各20例):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、姜黄素后处理组(I/R+Cur组)及抑制剂组(I/R+DAPT组)。采用夹闭双下肢股动脉4 h再灌注4 h复制肢体缺血再灌注肾损伤模型。在大鼠肢体缺血后4 h,I/R+Cur组经腹腔注射姜黄素200 mg/kg;I/R+DAPT组经腹腔注射DAPT 0.5μmol。于再灌注4 h时经颈动脉取血,待检血浆肌酐、尿素氮、丙二醛等指标。随后处死大鼠,采用HE染色检测肾组织病理变化,并对肾小管间质进行半定量评分;应用Western blotting和RT-PCR分别测定Notch2受体蛋白和靶分子Hes-1 mRNA的表达;通过ELISA测定肾组织TNF-α及IL-1β的表达。结果与Sham组比较,I/R组可见肾小管出现小管明显扩张,管腔内可见管型,刷状缘消失、肾间质炎症细胞浸润等病变,肾小管间质半定量评分升高(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);与I/R组比较,I/R+Cur组肾间质炎症细胞浸润减少,视野内未见肾小管扩张,偶可见少量管型等病理改变,肾小管间质半定量评分下降(P <0.05);组织中Notch2、Hes-1 mRNA、TNF-α和IL-1β的表达升高(P <0.05);I/R+DAPT组各指标与I/R+Cur组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素后处理可减轻大鼠肢体缺血再灌注时肾损伤,其作用机制可能与下调Notch2/Hes-1信号通路有关。

金匮肾气丸对庆大霉素所致大鼠听力变化及Notch2/hes1信号通路表达的影响

目的动态观察金匮肾气丸对庆大霉素所致大鼠耳损伤及修复过程中听力变化及Notch2/hes1信号通路表达的影响。方法 108只大鼠随机分成空白组(生理盐水灌胃6 ml/kg,1次/d,持续10 d;生理盐水腹腔注射,3 ml/kg,1次/d,持续10 d)、金匮肾气丸组[金匮肾气丸灌胃:1次/d,0.6 g/(kg.d),持续10 d;Gen,120 mg/kg(3 ml/kg),1次/d,腹腔注射,持续10 d]和模型组(生理盐水灌胃:1次/d,持续10 d,6 ml/kg;120 mg/kg,1次/d,腹腔注射,持续10 d)。应用听觉脑干诱发电位(ABR)检测听力变化;免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路的动态表达情况。结果听觉脑干诱发电位(ABR)示:空白组各时段无明显变化;与用药前比较,金匮肾气丸组和模型组ABR阈值均明显升高,并随时间的延长阈值下降;免疫印迹蛋白、实时PCR显示:与空白组比较,金匮肾气丸组和模型组Notch2/hes1的表达均明显增高(P<0.05);与模型组比较,金匮肾气丸组的Notch2/hes1表达明显降低(P<0.05)。结论在庆大霉素所致听力损伤及修复过程中,金匮肾气丸可能通过抑制Notch2/hes1信号通路保护并促进听力的恢复。

Notch2/hes1信号通路在庆大霉素所致大鼠耳损伤及修复过程中的表达及对听力变化的影响

目的动态观察庆大霉素所致大鼠耳损伤及修复过程中听力的变化及Notch2/hes1信号通路的表达。方法 48只大鼠随机分成空白组(生理盐水,3mL/(kg.d),腹腔注射,持续10天)和模型组(Gen,120mg/(kg.d),腹腔注射,持续10天)。应用听觉脑干诱发电位(ABR)检测听力变化;免疫印迹蛋白、定量PCR观察大鼠Notch2/hes1信号通路的动态表达情况。结果 (1)听觉脑干诱发电位(ABR)显示:空白组无明显变化;模型组与用药前ABR阈值相比明显升高,并随时间的延长阈值下降。(2)定量PCR显示:与空白组相比,Notch2/hes1的表达明显增高(P<0.05),并随时间的延长,表达强度下降。结论 Notch2/hes1信号通路可能是庆大霉素诱导听力损伤及修复过程中的重要角色之一。

HES1在神经胶质瘤中的研究进展

神经胶质细胞瘤是常见的颅内原发恶性肿瘤,现有的治疗方案存在局限,高级别神经胶质瘤经手术及放化疗后无法完全治愈。HES1属于前神经元碱性螺旋-环-螺旋基因(BHLH)家族的转录因子,在细胞发育、分化和增殖中起重要作用。在胶质瘤发展和恶化过程中HES1的角色备受瞩目。本文旨在通过回顾相关研究,探究HES1在胶质瘤发展过程中的作用机制以及其对治疗方式的影响,对这一领域的进展进行综述。

ADAM17通过调控NOTCH1/Hes1信号通路抑制肝癌HepG2细胞生长的研究

目的探讨ADAM17对肝癌HepG2细胞生长的调控作用及其对NOTCH1/Hes1信号通路的影响。方法采用shRNA-ADAM17抑制肝癌HepG2细胞中ADAM17的表达。将细胞分为空白对照组、shRNA-scrambled组(阴性对照组)和shRNA-ADAM17组(干预组)。使用MTT法测定在不同时间点(0、24、48h)对肝癌HepG2细胞的增殖水平。在干预4h后,使用qPCR法对HepG2细胞中ADAM17、NOTCH1和Hes1mRNA水平进行检测,并对ADAM17、NOTCH1和Hes1蛋白水平采用western blot进行测定。结果与对照组相比较,干预组干预的HepG2细胞活性呈时间依赖性下降,差异均有统计学意义(P<0.05),而阴性对照组干预的HepG2细胞各时间点差异均无统计学意义(P均>0.05)。在干预4h后与对照组相比较,干预组干预的HepG2细胞ADAM17、NOTCH1和Hes1mRNA和蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);同时与对照组相比较,阴性对照组干预的HepG2细胞ADAM17、NOTCH1和Hes1mRNA和蛋白表达水平无明显统计学差异(P均>0.05)。结论ADAM17主要是通过NOTCH1/Hes1信号通路调控肝癌HepG2细胞的增殖,提示ADAM17可能是治疗肝细胞癌的潜在分子靶点。

腹炎消通过调控Notch2/Hes-1通路对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的影响

目的探究腹炎消对重症急性胰腺炎大鼠急性肺损伤的影响及可能的作用机制。方法SD大鼠随机选取12只作为假手术组,其余大鼠采用3.5%牛磺胆酸钠诱导建立重症急性胰腺炎模型。造模成功后将大鼠分为模型组,DAPT(Notch信号通路抑制剂)组,腹炎消低、高剂量组,腹炎消+DAPT组,每组12只,给药24 h。计算肺组织湿/干质量比,采用血气分析仪测定血氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2)),并计算氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2)),比色法检测血清淀粉酶(AMY)活性,ELISA法检测肺匀浆液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)水平,HE染色观察胰腺、肺组织病理学变化,免疫组化法和RT-qPCR法检测肺组织Notch2、Hes-1蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)降低(P<0.05),PaCO_(2),肺组织湿/干质量比,血清AMY活性,肺组织TNF-α、IL-6、ICAM-1水平及Notch2、Hes-1蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),胰腺和肺组织水肿严重、炎性细胞浸润明显,有出血和坏死,肺泡间隔增厚;与模型组比较,DAPT组和腹炎消各剂量组以上指标均得到改善(P<0.05)。结论腹炎消可能通过抑制Notch2/Hes-1通路的激活,降低肺部炎症,改善与重症急性胰腺炎相关的急性肺损伤。

益气养阴活血中药对糖尿病肾病大鼠Notch/Hes1通路与血管内皮CD34、CD144的影响

目的观察益气养阴活血中药对糖尿病肾病大鼠Notch/Hes1通路与血管内皮CD34、CD144作用机制。方法采取左肾切除术+高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射STZ复制早期糖尿病肾病大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、西药贝拉普利组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,设正常对照组,药物干预8周。观察24 h尿白蛋白、HE染色肾组织病理、免疫组化肾组织Hes1、Western blot法检测CD34、CD144的表达。结果与正常组比较,模型组24 h尿白蛋白、Hes1、CD34、CD144的含量比较均有明显差异(P<0.05);与模型组比较,中药高剂量组、中剂量组能降低24 h尿蛋白(P<0.05),中药各剂量组均能明显降低肾组织Hes1、CD34含量(P<0.05),中药高剂量组均能明显降低肾组织CD144含量(P<0.05);与西药组比较,中药各剂量组均能降低CD34(P<0.05),中药低剂量组降低CD144(P<0.05)。病理观察模型组大鼠出现肾小球硬化、萎缩,系膜基质增多、系膜出现增厚增宽并可见结节样增生等改变;中药高、中剂量组对上述病理改变有积极改善。结论益气养阴活血中药可以降低模型大鼠肾组织Hes1和CD34、CD144,发挥对肾功能的保护作用,延缓DN的发展。