肝细胞癌中Notch1和Notch2蛋白表达及其意义

目的:探讨原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHCC)中Notch1和Notch2蛋白的表达及临床病理学意义。方法:采取免疫组织化学ENVISION法对78例PHCC组织和对照组10例癌旁组织中Notch1和Notch2蛋白的表达进行检测,并结合临床病理学及随访资料,进行统计分析。结果:在PHCC组织中Notch1阳性表达52例(66.67%),Notch2阳性表达12例(15.38%),而对照组癌旁组织Notch1阳性表达2例(20.00%),Notch2阳性表达8例(80.00%)。Notch1阳性表达率PHCC组织高于对照组癌旁组织(P<0.01),而Notch2在PHCC组织中的阳性表达率低于对照组癌旁组织(P<0.01),两者比较差异均有统计学意义。Notch1的表达与有无肝硬化、肿瘤大小、HBsAg是否阳性、肿瘤分期及转移呈正相关,而Notch2的表达与患者年龄、组织分级以及TNM分期呈正相关。随访9年,死亡53例,存活25例,≥24个月38例,生存时间<24个月40例,平均生存时间34.96个月,2年生存率48.72%。Spearman等级相关性分析显示,随着Notch1阳性表达率提高,PHCC患者术后生存率下降,两者呈负相关,Notch2阳性表达率与PHCC患者的生存时间无相关性。结论:Notch1作为促癌基因,在PHCC的发生发展、浸润和转移起着重要作用,而Notch2在肝细胞癌中表达较低,可能具有抑制肝细胞癌生长的作用。

Notch2在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨Notch2在喉癌组织及体外培养的喉鳞癌细胞Hep-2中的表达及与喉癌患者临床病理资料之间的关系。方法应用量子点超敏免疫荧光染色法检测95例喉癌组织标本中Notch2蛋白的表达,同时选取31例声带息肉标本作为对照组,结合患者临床病理资料进行分析;制作细胞爬片并进行量子点(QDs)免疫荧光染色检测Notch2蛋白在喉鳞癌细胞Hep-2中的表达。结果 95例喉癌组织中Notch2阳性表达率为92.6%(88/95),其阳性率与声带息肉中的阳性率(32.3%)相比差异均有统计学意义(P<0.01),其表达主要定位于细胞核。Notch2在喉癌组织中的表达与临床分期显著相关(P<0.05):临床分期越高,表达率越高。Notch2在喉癌组织细胞核中表达阳性与T分级、临床分期、病理分级和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。喉癌细胞Hep-2中Notch2表达阳性,其表达主要定位于细胞质和胞膜中。结论 Notch2在喉癌的发生发展中起着重要作用,其可能成为治疗喉癌的分子靶点。

微小RNA-151a-3p及Notch2在结肠癌的表达及临床意义

背景据统计,全球每年约有100万人被诊断为结肠癌,探究结肠癌的发病机制,寻找新的诊断指标及治疗方法是其治疗关键.RNA在其发生发展中具有重要调控作用,Notch2表达与结直肠癌密切相关,抑制其表达可能在肿瘤抑制中发挥作用.目的探究微小RNA-151a-3p(miR-151a-3p)及Notch2在结肠癌(colonic cancer,CC)的表达情况及临床意义.方法选取2018-01/2020-06我院92例CC患者作为研究对象,均取术中切除的癌组织与癌旁组织(距癌边缘>2.0 cm,且病理结果显示无癌细胞)标本,检测比较癌组织与癌旁组织中miR-151a-3p、Notch2蛋白表达量,分析癌组织中miR-151a-3p与Notch2蛋白表达量的相关性,并比较不同临床特征(性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、病理类型、肿瘤分期、浸润深度、分化程度、淋巴结转移)患者癌组织中miR-151a-3p、Notch2蛋白表达量,分析miR-151a-3p、Notch2蛋白表达量与CC临床特征的关系.结果癌组织中miR-151a-3p、Notch2蛋白表达量均高于癌旁组织(P<0.001);癌组织中miR-151a-3p表达量与Notch2蛋白表达量呈正相关(P<0.001);随着CC患者肿瘤分期和浸润深度增加、分化程度降低、发生淋巴结转移,癌组织中miR-151a-3p、Notch2蛋白表达量逐渐升高(P<0.05);癌组织中miR-151a-3p、Notch2蛋白表达量与CC患者肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05).结论miR-151a-3p、Notch2蛋白在CC癌组织中表达明显增加,且二者之间的表达呈正相关关系,其过表达可参与了结肠癌疾病的发生发展.

基于Midkine/Notch2/Hey1信号通路探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠的抗炎作用

目的:探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中肝素结合因子(Midkine)/跨膜受体蛋白(Notch2)/Hey1信号通路中的影响及其抗炎的分子机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(5、10、20 g·kg^(-1)·d^(-1))和γ-分泌酶抑制剂组(Notch1通路抑制剂,DAPT),每组10只。以烟熏联合脂多糖(LPS)法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味各干预组灌胃(ig)给药;DAPT组ig DAPT(0.02 g·kg^(-1));正常组及模型组ig等体积生理盐水。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中Midkine、中性粒细胞趋化因子-1(CINC-1)、大鼠巨噬细胞来源趋化因子(MDC)、大鼠CXC趋化因子5(CXCL5)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和核转录因子-κB(NF-κB)p65的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织中Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达;免疫组化(IHC)检测大鼠肺组织中Midkine、Notch2和Hey1蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组BALF中Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5、NE和NF-κB p65含量均显著升高(P<0.01);肺组织Midkine、Notch2和Hey1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.01)。与模型组比较,二陈汤加味中、高剂量组和DAPT组BALF中Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5和NF-κB p65含量均显著减少(P<0.01);Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能是通过下调Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达,抑制Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5释放有关。

丹参提取物对大鼠心肌缺血后血管新生的保护作用研究

目的血管新生是治疗缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)非常有效的一种方法。本研究的主要目的是探究丹参提取物对大鼠心肌缺血后血管新生的保护作用及其机制。方法48只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、丹参提取物组和阳性药组,每组12只。手术结扎左冠状动脉前降支(left anterior descending,LAD)建立心肌缺血模型,造模成功后丹参提取物组以浓度为0.2928 g/kg的丹参提取物药液灌胃,阳性药组以浓度为1 mg/kg瑞舒伐他汀药液灌胃,模型组、假手术组给予生理盐水灌胃。干预28天后通过超声评估心功能,通过激光多普勒评估心脏血流的变化。体外实验采用氧—葡萄糖剥夺法(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过CCK-8实验和Matrigel成管实验评估丹参提取物对HUVECs的保护作用,通过Western blots检测通路蛋白的表达变化。结果丹参提取物不仅可以改善心肌缺血大鼠的心功能(P<0.01),增加心脏血流量(P<0.01),改善心肌细胞形态和炎症,还可以增加内皮细胞的活力(P<0.05),促进细胞体外成管。机制上丹参提取物能够促进OGD诱导的内皮细胞分泌骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)(P<0.01),下调Delta-Like配体蛋白-4(Delta-like 4,Dll4)和Notch1蛋白的表达(P<0.01,P<0.01)。结论丹参提取物可能通过调节BMP2-Dll4/Notch1通路促进血管新生进而保护心功能。

刺山柑总生物碱抑制系统性硬皮病小鼠皮肤纤维化的作用机制探讨

目的探讨刺山柑总生物碱抑制系统性硬皮病(SSc)小鼠皮肤纤维化的作用机制。方法将60只BALB/c小鼠随机分为4组各15只。刺山柑总生物碱给药组、模型组和阳性对照组均制备SSc模型,背部皮下注射博莱霉素造模(30μg/d,30 d);空白对照组不制备SSc模型,仅背部皮下注射生理盐水。造模结束后,背部注射部位外敷450 mg/kg的刺山柑总生物碱乳膏,阳性对照组灌胃给予125 mg/kg的青霉胺片,模型组、空白对照组背部注射部位外敷不含药基质,1次/天,共60 d。采用Western blotting法检验各组小鼠背部注射部位皮肤组织Notch2、Jagged1、MAML1蛋白,免疫组化法检测Hes1蛋白。结果与空白对照组比较,模型组Notch2、Jagged1、MAML1、Hes1蛋白相对表达量升高(P均<0.05);与模型组比较,刺山柑总生物碱组、阳性对照组Notch2、Jagged1、Hes1蛋白相对表达量降低,刺山柑总生物碱组MAML1蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。结论刺山柑总生物碱可调控SSc小鼠受损皮肤Notch通路,具体作用机制为抑制Notch2、Jagged1、Hes1蛋白表达。

微小RNA-18a靶向Notch2抑制NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达

[背景]矽肺主要病理特征是肺部纤维化。矽肺发生发展过程中多种miRNAs具有调控作用。[目的]利用成纤维细胞系,探究微小RNA-18a(miR-18a)对细胞外基质相关基因表达的影响,并对其作用机制进行验证。[方法]在成纤维细胞系NIH-3T3细胞中转染miR-18a模拟物以及神经源性基因座Notch同源蛋白2(Notch2)基因的小干扰RNA(siRNA)。通过应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)技术检测Acta2、Col1a1及Notch2基因mRNA表达变化,通过蛋白质印迹技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Notch2蛋白的表达变化,利用双荧光素酶报告载体在人胚肾细胞HEK293T细胞中验证miR-18a调控Notch2基因的直接作用位点。[结果]qRT-PCR检测结果表明,在NIH-3T3细胞中,miR-18a模拟物过表达36 h抑制了Col1a1以及Acta2的m RNA表达(P<0.05),同时利用蛋白质印迹技术检测发现,miR-18a模拟物过表达48 h后α-SMA蛋白表达丰度降低。通过qRT-PCR未检测到过表达miR-18a 36 h对于Notch2基因表达的影响,通过蛋白质印迹技术检测发现过表达miR-18a模拟物36 h可以在蛋白水平上抑制Notch2的表达。双荧光素酶报告载体检测结果发现,在HEK293T细胞中,无论是过表达miR-18a模拟物或者抑制物24 h均证明了Notch2是miR-18a的直接靶基因。当Notch2被抑制36 h时,qRT-PCR检测发现Acta2和Col1a1基因表达下调(P<0.05);蛋白质印迹技术检测表明α-SMA在蛋白水平也受到抑制。[结论]本研究发现miR-18a可以通过直接作用于靶基因Notch2的3’UTR而抑制其表达,从而抑制成纤维细胞系NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达。